HemosIL - Werfen

HemosIL®
Von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity - 0020300900
ENGLISH - Insert revision 12/2014
Von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity - 0020300900
ESPAÑOL - Revisión Folleto 12/2014
Intended use
Results
Aplicación
Resultados
HemosIL VWF:RCo results are reported in % of normality.
The assay results should be used with other information, including the clinical context,
in forming a diagnosis.
Inmunoensayo automatizado para la determinación cuantitativa de la actividad del
Factor von Willebrand como cofactor de la ristocetina en plasma humano citratado, en
los Sistemas de la familia ACL TOP®.
El kit HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity (HemosIL VWF:RCo)
está indicado para su uso en pacientes que, según sus síntomas clínicos, sean
sospechosos de tener la enfermedad de von Willebrand.
Buffer:
Automated latex enhanced immunoassay for the quantitative determination of von
Willebrand Factor ristocetin cofactor activity in human citrated plasma on ACL TOP®
Family Systems.
HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity (HemosIL VWF:RCo)
is indicated for use on patients who, based on their clinical signs, are suspected of
having von Willebrand Disease.
Summary and principle
The basic screening of von Willebrand Disease (VWD) includes the use of a von
Willebrand Factor Ristocetin Cofactor activity (R:CoF) assay to determine the activity
of the von Willebrand Factor (VWF) plasma protein. The R:CoF assay using platelets
reproduces in vitro the ability of VWF to interact with one of its platelet receptors, the
glycoprotein GPIb-IX-V complex in presence of ristocetin.1 The classical method is
based on the property of the antibiotic ristocetin to agglutinate formalin-fixed normal
platelets in presence of VWF; however, it has high inter-laboratory variability due to the
complexity of the procedure.2
Clinical guidelines suggest that the measurement and comparison of von Willebrand
Factor Antigen (VWF:Ag), VWF Activity, and Factor VIII (FVIII) levels in plasma allow
for differentiation of quantitative defects (type 1 or type 3) or qualitative defect (type 2)
of VWF and, therefore, to diagnose the different types of VWD.1,2,3 When an extremely
low or undetectable level of VWF:Ag is obtained, a type 3 VWD could be expected.
If a moderate or even normal result is obtained, R:CoF and FVIII assays must be
performed and compared with the VWF:Ag result. If all three values are within the
normal range, VWD and Hemophilia A may be excluded. If at least one parameter is
abnormally low, it is necessary to calculate the ratios of R:CoF/VWF:Ag and FVIII/
VWF:Ag. If both ratios are close to 1 (some authors suggest 0.7 as cut-off), a VWD
type 1 may be diagnosed.1,3 When the R:CoF/VWF:Ag ratio is low (0.7 is also the
suggested cut-off), types 2A, 2B or 2M may be diagnosed. Additional laboratory tests
such as RIPA (Ristocetin Induced Platelet Aggregation), multimeric analysis, and
binding assays are required in order to be able to distinguish the different subtypes.3
When the FVIII/VWF:Ag ratio is low (0.7 is also the suggested cut-off), a type 2N
or Hemophilia A may be diagnosed and a FVIII binding assay is necessary to
discriminate among them.
The HemosIL VWF:RCo kit is a latex particle enhanced immunoturbidimetric assay
to quantify VWF:RCo activity in citrated plasma. The activity of VWF is determined by
measuring the increase of turbidity produced by the agglutination of the latex reagent.
A recombinant fragment of glycoprotein platelet receptor of VWF (rGP1bα) is coated
to the latex particles by means of a specific monoclonal antibody which orientates
the GP1bα fragment in the proper way to interact with the VWF of patient sample in
the presence of ristocetin.4,5 The degree of agglutination is directly proportional to
the activity of VWF in the sample and is determined by measuring the decrease of
transmitted light caused by the aggregates.
Composition
The HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity kit consists of:
R Latex Reagent (Cat. No. 0020300910): 2 vials x 2 mL of a suspension of
polystyrene latex particles coated with a recombinant fragment of glycoprotein
platelet receptor of VWF (rGP1bα) by means of a specific monoclonal antibody.
Contains bovine serum albumin, buffer, stabilizer, and preservative.
RCoRistocetin (Cat. No. 0020300920): 2 vials x 1.6 mL of ristocetin sulphate, a
glycopeptide antibiotic isolated from Nocardia lurida in aqueous acidic solution.
BBuffer (Cat. No. 0020300930): 2 vials x 4 mL of Tris buffer containing bovine
serum albumin, stabilizers, and preservative.
DDiluent (Cat. No. 0020300940): 2 vials x 3.6 mL of saline solution containing
bovine serum albumin and preservative.
PRECAUTIONS AND WARNINGS:
Latex Reagent, Buffer, and Diluent contain bovine material. All donor animals were
sourced from BSE-free herds. The cattle received ante- and post mortem health
inspection by a veterinarian, and they were apparently free from infectious and
contagious material. However, the material should be treated as potentially infectious.
Latex Reagent, Ristocetin, Diluent are not classified as hazardous.
Warning
Hazard Class: Eye Irrit. 2, H319
Hazard Statements: H319: Causes serious eye irritation
Precautionary Statements: P264: Wash hands thoroughly after handling.
P280: Wear protective gloves/protective clothing/eye protection/face protection.
P305+P351+P338: IF IN EYES: Rinse cautiously with water for several minutes.
Remove contact lenses, if present and easy to do. Continue rinsing. P337+P313: If eye
irritation persists: Get medical advice/attention.
This product is For in vitro Diagnostic Use.
Preparation
Latex Reagent: Invert to mix before use.
Ristocetin: Invert to mix before use.
Buffer: Invert to mix before use.
Diluent: Invert to mix before use.
Note: Avoid foam formation when homogenizing reagents. Bubbles on top of the liquids
may interfere with the instruments liquid sensors.
Reagent storage and stability
Unopened reagents are stable until the expiration date shown on the vial labels when
stored at 2-8°C.
Opened reagents are stable 2 months at 2-8°C in the original vial or 24 hours
continuously when placed at 15°C on-board the ACL TOP Family. When reagents are
used for 4 hours on-board per test session and all vials are returned well capped to
2-8°C between sessions, the reagents are stable for an on-board cumulative time of
up to 12 hours. This cumulative time on-board study was distributed over a period of 6
days. When used for 2 hours on-board per test session and all vials are returned well
capped to 2-8°C between sessions, the reagents are stable for an on-board cumulative
time of up to 10 hours. This cumulative time on-board study was distributed over a
period of 11 days.
Do not freeze.
For optimal stability remove reagents from the system and store them at 2-8°C in the
original vial.
Instrument/test procedures
Refer to the appropriate IL instrument’s Operator’s Manual and/or Application Manual
for the complete assay procedure instructions.
Specimen collection and preparation
Refer to CLSI Document H21-A5 for instructions on specimen collection, handling, and
storage.6
Thaw frozen samples rapidly at 37°C and centrifuge if necessary. Gently mix before
testing. After thawing, the assay must be performed within 2 hours.
Additional reagents and control plasmas
The following are not supplied with the kit and must be purchased separately.
Calibration plasma
Normal Control
Special Test Control Level 1 Special Test Control Level 2
Americas and Pacific Rim
Cat. No.
0020003700
0020003120
0020011000
0020012000
Europe
Cat. No.
0020003700
0020003110
0020011000
0020012000
Quality control
Normal and abnormal controls are recommended for a complete quality control
program.7 Normal Control, Special Test Control Level 1 (contains a normal level of
VWF:RCo) and Special Test Control Level 2 (contains an abnormal level of VWF:RCo)
are designed for this program. Each laboratory should establish its own mean and
standard deviation and should establish a quality control program to monitor laboratory
testing. Controls should be analyzed at least once every 8 hours shift in accordance
with good laboratory practice. Refer to the instrument’s Operator’s Manual for
additional information. Refer to Westgard et al for identification and resolution of out-ofcontrol situations.8
Limitations/interfering substances
HemosIL VWF:RCo results on the ACL TOP Family are not affected by hemoglobin up
to 500 mg/dL, bilirubin up to 18 mg/dL and lipids up to 1300 mg/dL. The presence of
rheumatoid factor was shown to produce an overestimation of the test result.
Specimens from patients who have received preparation of mouse monoclonal
antibody for diagnosis or therapy may contain human anti-mouse antibody (HAMA).
The presence of HAMA may cause an over-estimation of results in immunoassays
that utilize mouse monoclonal antibodies. The HemosIL VWF:RCo Buffer contains a
blocking agent against HAMA to minimize this interference on the assay results.
Expected values
A normal range study was performed using the HemosIL VWF:RCo kit.
Blood ABO Type9
N
ACL TOP Family (% VWF:RCo)
O
124
48.2 - 201.9
A + B + AB
140
60.8 - 239.8
These results were obtained using a specific lot of reagent. Due to many variables
which may affect results, each laboratory should verify its own normal range.
Performance characteristics
Precision:
Precision was evaluated in accordance with CLSI EP05-A210, for 20 days, with 2 runs
per day and 2 replicates per run for each sample level (n=80/ instrument/ lot). Results
for within run (repeatability) and total (within device) precision are below.
ACL TOP Family
Mean (% VWF:RCo) CV% (Within run) CV% (Total)
Normal Control
112
5.1
5.5
Special Test Control Level 1
72
6.6
6.9
Special Test Control Level 2
26
6.1
6.8
Correlation:
System
Slope
Intercept
r
Comparative method
ACL TOP Family
1.02
-0.99
0.977
HemosIL VWF Activity
The precision and correlation results were obtained using specific lots of reagents and
controls.
In field studies, the following data were obtained using specific lots of HemosIL
VWF:RCo reagents:
System
Slope
Intercept
r
Comparative method
ACL TOP Family
1.06
0.71
0.96
HemosIL VWF Activity
ACL TOP Family
1.08
1.20
0.96 HemosIL VWF Activity
Detection limit:
System
ACL TOP Family
4.4 (% VWF:RCo)
Linearity:
System
Regular test (% VWF:RCo)
Rerun test (% VWF:RCo)
ACL TOP Family
7.0 – 120.0
7.0 – 480.0
The assay does not show prozone effect up to 1300%.
If the linear range (Rerun test) is exceeded, samples should be manually diluted
1:10 with the Diluent included in the kit (40 µL of sample + 360 µL of Diluent) and
reassayed. The result must be multiplied by 10 to correct for the dilution.
Principio
El diagnóstico básico de la enfermedad de von Willebrand (EVW), incluye el uso de
un ensayo de la actividad del Factor von Willebrand como cofactor de la ristocetina
(CoF:R) para determinar la actividad del Factor von Willebrand (FVW) plasmático. El
ensayo de la actividad del CoF:R que usa plaquetas, reproduce in vitro la capacidad
del FVW de interaccionar con uno de los receptores plaquetarios, el complejo de la
glicoproteína GPlb-IX-V, en presencia de ristocetina.1 El método clásico se basa en la
propiedad del antibiótico ristocetina de aglutinar plaquetas normales fijadas con formol
en presencia de FVW, sin embargo, dicho método muestra una alta variabilidad entre
laboratorios debido a la complejidad del procedimiento.2
Las guías clínicas sugieren que la medida y comparación de los niveles de Factor
von Willebrand Antígeno (FVW:Ag), FVW Actividad y Factor VIII (FVIII) en plasma
permiten la diferenciación de las deficiencias cuantitativas de FVW (tipo 1 y tipo 3) o
cualitativas (tipo 2), y por tanto permiten diagnosticar los diferentes tipos de EVW. 1,2,3
Cuando el nivel obtenido de FVW:Ag es extremadamente bajo o indetectable, debe
esperarse una EVW del tipo 3. Si el nivel obtenido es moderado o incluso normal,
se deberán realizar los ensayos de CoF:R y FVIII, y compararlos con el resultado de
FVW:Ag. Si los tres valores se encuentran dentro del rango de normalidad, podrá
excluirse la EVW y la Hemofilia A. Si al menos uno de ellos está por debajo de la
normalidad, será necesario calcular las relaciones CoF:R/FVW:Ag y FVIII/FVW:Ag.
Si ambas relaciones están cerca de 1 (algunos autores sugieren 0,7 como valor
umbral), puede ser diagnosticada la EVW del tipo 1.1,3 Cuando la relación CoF:R/
FVW:Ag es baja (0,7 es también el valor umbral sugerido), podrán diagnosticarse los
tipos 2A, 2B, o 2M. Para poder distinguir los diferentes subtipos, se necesitarán otras
pruebas complementarias tales como el RIPA (agregación de las plaquetas inducida
por ristocetina), análisis multiméricos, y ensayos de valoración de la capacidad de
unión.3 Cuando la relación FVIII/FVW:Ag es baja (0,7 es también el valor umbral
sugerido), podrá diagnosticarse el tipo 2N o la Hemofilia A y para poder diferenciarlas
se necesitará la prueba de la capacidad de unión al FVIII.
El ensayo HemosIL VWF:RCo es una inmunoturbidimetría amplificada con partículas
de látex que permite cuantificar la actividad FVW:RCo en plasma citratado. La
actividad del FVW se determina midiendo el incremento de turbidez debido a la
aglutinación del reactivo de látex. Un fragmento recombinante de la glicoproteína
de las plaquetas (rGP1bα), receptor del FVW, se une a las partículas de látex por
medio de un anticuerpo monoclonal específico que orienta el fragmento GP1bα en
la posición adecuada para que, en presencia de ristocetina, pueda interactuar con
el FVW del paciente.4,5 El grado de aglutinación es directamente proporcional a la
actividad del FVW en la muestra y se determina midiendo el descenso de la luz
transmitida causado por los agregados.
Composición
El kit HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity contiene:
R Reactivo Látex (Núm. Cat. 0020300910): 2 viales de 2 mL de una suspensión
de partículas de látex de poliestireno a las que se les ha unido mediante un
anticuerpo monoclonal un fragmento recombinante de la glicoproteína de las
plaquetas (rGP1bα), receptor del FVW. Contiene albúmina de suero bovino,
tampón, estabilizante y conservante.
RCoRistocetina (Núm. Cat. 00203000920): 2 viales de 1,6 mL de sulfato de
ristocetina, un antibiótico glicopéptido aislado de Nocardia lurida, en solución
acuosa ácida.
BTampón (Núm. Cat. 0020300930): 2 viales de 4 mL de tampón Tris que contiene
albúmina de suero bovino, estabilizantes y conservante.
DDiluyente (Núm. Cat. 0020300940): 2 viales de 3,6 mL de solución salina que
contiene albúmina de suero bovino y conservante.
MEDIDAS DE PRECAUCIÓN Y ADVERTENCIAS:
El Reactivo látex, el Tampón y el Diluyente contienen material de origen bovino.
Todos los animales donantes proceden de estabularios libres de BSE. El ganado fue
inspeccionado por un veterinario antes y después de su muerte, y aparentemente los
animales estaban libres de material infeccioso o contagioso. Sin embargo, el material
debe tratarse como potencialmente infeccioso.
El Reactivo Látex, Ristocetina y el Diluyente, no se han clasificado como reactivos
peligrosos.
Tampón:
Atención
Clase de peligro: Irrit. oc. 2, H319
Indicaciones de peligro: H319: Provoca irritación ocular grave
Consejos de prudencia: P264: Lavarse las manos concienzudamente
tras la manipulación. P280: Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección.
P305+P351+P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar
cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si
lleva y resulta fácil. Seguir aclarando.
P337+P313: Si persiste la irritación ocular: Consultar a un médico.
Este producto es para diagnóstico in vitro.
Preparación
Reactivo látex: Mezclar por inversión antes de su uso.
Ristocetina: Mezclar por inversión antes de su uso.
Tampón: Mezclar por inversión antes de su uso.
Diluyente: Mezclar por inversión antes de su uso.
Nota: Evitar la formación de espuma al homogeneizar los reactivos reconstituidos.
Las burbujas en la superficie del líquido pueden interferir con los sensores de nivel de
líquido de los instrumentos.
Conservación y estabilidad de los reactivos
Los reactivos que no hayan sido abiertos y se hayan conservado a 2-8°C son estables
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Los reactivos una vez abiertos son estables 2 meses a 2-8°C en el vial original o
24 horas cuando los viales se mantienen continuadamente a 15°C a bordo de los
instrumentos de la Familia ACL TOP.
Cuando los reactivos se mantienen a bordo del instrumento durante 4 horas por
sesión, y los viales se conservan bien tapados a 2-8°C entre sesión y sesión, los
reactivos son estables por un tiempo acumulado de hasta 12 horas. Este estudio
de tiempo acumulado en el instrumento se distribuyó a lo largo de 6 días. Cuando
los reactivos se mantienen a bordo del instrumento durante 2 horas por sesión, y
los viales se conservan bien tapados a 2-8°C, entre sesión y sesión, los reactivos
son estables por un tiempo acumulado de hasta 10 horas. Este estudio de tiempo
acumulado en el instrumento se distribuyó a lo largo de 11 días.
No congelar los reactivos.
Para una óptima estabilidad, retirar los reactivos de los instrumentos y conservarlos a
2-8°C en sus viales originales bien tapados.
Método de ensayo
Las instrucciones completas del ensayo se encuentran en el correspondiente Manual
del Usuario del Instrumento y/o en el Manual de Aplicaciones.
Recolección y preparación de las muestras
Para la recolección, manejo y conservación del plasma seguir las recomendaciones
del Documento H21-A5 del CLSI.6
Los plasmas congelados deben descongelarse rápidamente a 37°C y agitarse bien
antes de su análisis. Se debe realizar el ensayo de los mismos antes de transcurridas
2 horas de su descongelación.
Reactivos y plasmas de control adicionales
Los siguientes materiales no se suministran con el kit y deben pedirse por separado.
América y Área del Pacífico
Núm. Cat.
Plasma de calibración
0020003700
Control Normal
0020003120
Control de Técnicas Especiales Nivel 1 0020011000
Control de Técnicas Especiales Nivel 2 0020012000
Europa
Núm. Cat.
0020003700
0020003110
0020011000
0020012000
Control de Calidad
Para realizar un programa completo de control de calidad, se recomienda el uso de
dos niveles de control, normal y patológico.7 El Control Normal, el Control de Técnicas
Especiales Nivel 1 (que contiene un nivel normal de FVW:RCo) y el Control de
Técnicas Especiales Nivel 2 (que contiene un nivel anormal de FVW:RCo) cumplen
con los requisitos del programa. Cada laboratorio debe establecer su propia media
y desviación estándar, y debe realizar un programa de control de calidad para
monitorizar sus resultados. Los controles deben ser analizados como mínimo una
vez por cada turno de 8 horas, de acuerdo con la normativa de Buenas Prácticas del
Laboratorio. Consultar el Manual del Usuario para información adicional. Consultar
la publicación de Westgard et al para la identificación y resolución de situaciones
anormales del control de calidad.8
Los resultados obtenidos con el kit HemosIL VWF:RCo se informan en % de
normalidad.
Para establecer un diagnóstico, los resultados del análisis deben ser usados
conjuntamente con el resto de información, incluyendo el historial clínico.
Limitaciones/interferencias
Concentraciones de hemoglobina hasta 500 mg/dL, de bilirrubina hasta 18 mg/dL y
de lípidos hasta 1300 mg/dL no afectan a los resultados del kit HemosIL VWF:RCo en
los Sistemas de Coagulación de IL. La presencia de factor reumatoide en la muestra
puede producir resultados falsamente positivos.
Las muestras de pacientes que han recibido preparados de anticuerpos monoclonales
con fines diagnósticos o terapéuticos pueden contener anticuerpos humanos antiratón (HAMA). La presencia de HAMA puede causar una sobrevaloración de los
resultados en inmunoensayos que utilicen anticuerpos monoclonales de ratón. El
Tampón de reacción del kit HemosIL VWF:RCo contiene un agente bloqueante de los
HAMA para minimizar su interferencia en los resultados del análisis.
Valores esperados
Se ha realizado un estudio del rango de normalidad utilizando el kit HemosIL
VWF:RCo en los Sistemas de Coagulación de IL.
Grupo Sanguíneo9
N
Familia ACL TOP (% FVW:RCo)
O
124
48,2 - 201,9
A + B + AB
140
60,8 - 239,8
Estos resultados se han obtenido utilizando un lote específico de reactivo. Debido
a las muchas variables que pueden afectar a los resultados, cada laboratorio debe
establecer su propio rango de normalidad.
Características técnicas
Precisión:
El estudio de precisión se ha realizado de acuerdo con la norma EP05-A210 del CLSI,
durante 20 días, 2 series cada día y 2 replicados de cada muestra por serie (n=80/
instrumento/lote). Los resultados intraserie (repetibilidad) y total (entre series) se
muestran a continuación:
Familia ACL TOP
Media (% FVW:RCo)
CV% (Intraserie) CV% (Total)
Control Normal
112
5,1
5,5
Control Técnicas Especiales Nivel 1 72
6,6
6,9
Control Técnicas Especiales Nivel 2 26
6,1
6,8
Correlación:
Sistema
Pendiente
Intersección
r
Método de referencia
Familia ACL TOP
1,02
-0,99
0,977
HemosIL VWF Activity
La precisión y los datos de correlación se han obtenido usando lotes específicos de
reactivos y de controles.
En estudios externos, usando lotes específicos de reactivos HemosIL VWF:RCo y de
controles, se obtuvieron los siguientes resultados:
Sistema
Pendiente
Intersección
r
Método de referencia
Familia ACL TOP
1,06
0,71
0,96
HemosIL VWF Activity
Familia ACL TOP
1,08
1,20
0,96
HemosIL VWF Activity
Límite de detección:
Sistema
Familia ACL TOP
4,4 (% FVW:RCo)
Linealidad:
Sistema
Test Regular (% FVW:RCo)
Test Rerun (% FVW:RCo)
Familia ACL TOP
7,0 - 120,0
7,0 - 480,0
El ensayo no presenta efecto de prozona hasta concentraciones de 1300%.
Si se excede el rango de linealidad (Test Rerun), las muestras deben diluirse
manualmente 1:10 con el Diluyente incluido en el kit (40 µL de muestra + 360 µL de
Diluyente) y reanalizarse. Los resultados obtenidos deben multiplicarse por el factor
de dilución 10.
Von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity - 0020300900
DEUTSCH - Packungsbeilage Version 12/2014
Von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity - 0020300900
FRANÇAIS - Révision de la notice 12/2014
Verwendung
Ergebnisse
Utilisation
Résultats
HemosIL VWF:RCo Ergebnisse werden in Prozent der Norm dargestellt. Sie sollten
bei der Diagnosestellung immer im Zusammenhang mit weiteren Informationen, wie
z.B. dem klinischen Kontext, herangezogen werden.
Méthode sensible automatisée de dosage immunologique Latex pour la détermination
quantitative de l’activité cofacteur de la ristocétine du Facteur von Willebrand
(VWF:RCo) dans le plasma humain citraté, sur les analyseurs de la famille ACL TOP®.
L’utilisation du réactif HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity
(HemosIL VWF:RCo) est indiquée pour des patients qui en regard des symptômes
cliniques peuvent être suspectés d’être atteints d’une maladie de von Willebrand.
Puffer:
Vollautomatischer Latex-Immunoassay zur quantitativen Bestimmung der von
Willebrand Faktor Ristocetin Cofaktor Aktivität in humanem Citratplasma auf Systemen
der ACL TOP® Gerätefamilie.
HemosIL von Willebrand Faktor Ristocetin Cofaktor Aktivität (HemosIL VWF:RCo)
ist für Diagnose von Patienten indiziert, die aufgrund ihrer klinischen Symptome im
Verdacht stehen unter der von Willebrand Erkrankung zu leiden.
Testprinzip und Zusammenfassung
Um die Aktivität des von Willebrand Faktor Plasmaproteins zu beurteilen, beinhaltet
das Screening der von Willebrand Erkrankung (VWD) die Untersuchung der von
Willebrand Ristocetin Cofactor Aktivität (R:CoF). Durch die Verwendung von Plättchen
reproduziert der R:CoF Assay in vitro die Fähigkeit des VWF, in Anwesenheit von
Ristocetin, mit einem seiner Plättchenrezeptoren, dem Glykoprotein GPIb-IX-V
Komplex, zu interagieren.1 Die klassische Methode beruht auf der Eigenschaft des
Antibiotikums Ristocetin in Anwesenheit von VWF mit formalinfixierten normalen
Plättchen Agglutinationen zu bilden; von Labor zu Labor besteht jedoch aufgrund der
Komplexität der Testmethodik eine hohe Variabilität der Ergebnisse.2
Klinische Richtlinien empfehlen die Messung und den Vergleich von von Willebrand
Faktor-Antigen (VWF:AG), VWF Aktivität und Faktor VIII (FVIII) im Plasma zur
Differenzierung von quantitativen (Typ 1 oder Typ 3) oder qualitativen (Typ 2) VWF
Defekten. Dadurch können die verschiedenen Typen des von Willebrand-Syndroms
(VWS) diagnostiziert werden.1,2,3 Bei einem extrem niedrigem oder undetektierbarem
VWF:Ag Wert kann von einem Typ 3 VWS ausgegangen werden. Bei einem leicht
erniedrigten oder gar normalen Resultat, sollten R:CoF und FVIII Tests durchgeführt
und mit dem VWF:Ag Resultat verglichen werden. Falls alle drei Werte innerhalb des
Normalbereichs liegen, können ein VWS und eine Hämophilie A ausgeschlossen
werden. Falls mindestens ein Parameter abnormal niedrig ausfällt, ist es notwendig
die Ratios von R:CoF/VWF:Ag und von FVIII/VWF:Ag zu berechnen. Wenn beide
Ratios nahe 1 sind (einige Autoren schlagen 0,7 als Cut-off vor), kann ein VWS Typ 1
diagnostiziert werden.1,3 Bei einer niedrigen R:CoF/VWF:Ag Ratio (0,7 ist ebenfalls
der vorgeschlagene Cut-off), können die Typen 2A, 2B oder 2M diagnostiziert
werden. Zusätzliche Labortests wie RIPA (Ristocetin induzierte Plättchen
Aggregation), Multimer-Analyse und Binding Assays sind erforderlich, um zwischen
den verschiedenen Subtypen zu unterscheiden.3 Bei einer niedrigen FVIII/VWF:Ag
Ratio (0,7 ist der vorgeschlagene Cut-off), kann ein Typ 2N oder eine Hämophilie A
diagnostiziert werden. Ein FVIII Binding Assay ist notwendig, um zwischen beiden zu
unterscheiden.
Der HemosIL VWF:RCo Kit ist ein Latex-verstärkter Immunoassay zur Quantifizierung
der VWF:RCo Aktivität in Citrat-Plasma. Die Aktivität des VWF wird bestimmt durch die
Messung der Trübungszunahme, welche durch die Agglutination des Latex-Reagenz
verursacht wird. Ein rekombinantes Fragment des Glykoprotein Plättchen Rezeptors
des von Willebrand Faktors (rGP1bα) ist mittels eines monoklonalen Antikörpers auf
die Latexpartikel beschichtet. Der monoklonale Antikörper ist dabei so gegen das
GP1bα Fragment gerichtet, dass es in Anwesenheit von Ristocetin mit dem VWF der
Patientenprobe in Wechselwirkung treten kann.4,5 Der Grad der Agglutination nimmt
proportional zur VWF Aktivität in der Probe zu. Die Bestimmung erfolgt durch die
Messung, der durch die Agglutination bedingten Abnahme der Lichtdurchlässigkeit.
Inhalt
Die HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity Packung enthält:
R Latex Reagent (Art. Nr. 0020300910): 2 Flaschen x 2 mL einer Suspension
aus Polystyrol-Latexpartikeln, die mittels eines monoklonalen Antikörpers mit
einem rekombinanten Fragment des Glykoprotein Plättchen Rezeptors des VWF
(rGP1bα) beschichtet sind. Enthält zusätzlich bovines Serum-Albumin, Puffer,
Stabilisatoren und Konservierungsmittel.
RCoRistocetin (Art. Nr. 0020300920): 2 Flaschen x 1,6 mL mit Ristocetin Sulphat,
ein Glykopeptid-Antibiotikum, das aus Nocardia lurida isoliert wurde, in wässrigsaurer Lösung.
BBuffer (Art. Nr. 0020300930): 2 Flaschen x 4 mL mit Tris Puffer, der bovines
Serum-Albumin, Stabilisatoren und Konservierungsmittel enthält.
DDiluent (Art. Nr. 0020300940): 2 Flaschen x 3,6 mL mit Salzlösung, die bovines
Serum-Albumin und Konservierungsmittel enthält.
Warnung:
Latex Reagenz, Puffer und Diluent enthalten bovines Material. Alle Spendertiere
stammen aus BSE-freien Herden. Die Tiere wurden ante- und post-mortem einer
veterinärmedizinischen Gesundheitsüberprüfung unterzogen. Sie zeigten sich dabei
frei von infektiösem und ansteckendem Material. Dennoch sollten die Materialien als
potentiell infektiös behandelt werden.
Latex Reagenz, Ristocetin und Diluent werden als nicht gefährlich eingestuft.
Achtung
Gefahrenklasse: Augenreiz. 2, H319
Gefahrenhinweise: H319: Verursacht schwere Augenreizung.
Sicherheitssätze: P264: Nach Gebrauch die Hände gründlich waschen.
P280: Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz tragen.
P305+P351+P338: BEI KONTAKT MIT DEN AUGEN: Einige Minuten lang behutsam
mit Wasser spülen. Vorhandene Kontaktlinsen nach Möglichkeit entfernen. Weiter
spülen. P337+P313: Bei anhaltender Augenreizung: Ärztlichen Rat einholen/ärztliche
Hilfe hinzuziehen.
Dieses Produkt ist nur für die in vitro Diagnostik geeignet.
Herstellung
Latex Reagent: Vor dem Gebrauch vorsichtig schwenken.
Ristocetin: Vor dem Gebrauch vorsichtig schwenken.
Buffer: Vor dem Gebrauch vorsichtig schwenken.
Diluent: Vor dem Gebrauch vorsichtig schwenken.
Hinweis: Schaumbildung vermeiden. Luftblasen auf der Oberfläche der Reagenzien
können die Flüssigkeitssensoren der Geräte stören.
Lagerung und Haltbarkeit
Die ungeöffneten Reagenzien sind bei Lagerung zwischen 2-8°C bis zu dem auf dem
Etikett angegebenen Verfallsdatum haltbar.
Haltbarkeit der geöffneten Reagenzien:
• bei 2-8°C in der Originalflasche: 2 Monate
• bei 15°C in Systemen der ACL TOP Familie: 24 Stunden
Wenn die Reagenzien pro Testlauf pro Tag für 4 Stunden im Gerät verwendet werden
und alle Flaschen anschließend bis zum nächsten Testlauf mit den Originalkappen gut
verschlossen bei 2-8°C gelagert werden, sind die Reagenzien insgesamt 12 Stunden
im Gerät stabil. Diese Stabilitätstestung im Gerät erstreckte sich über einen Zeitraum
von 6 Tagen. Wenn die Reagenzien pro Testlauf pro Tag für 2 Stunden im Gerät
verwendet wurden und alle Flaschen anschließend bis zum nächsten Testlauf mit den
Originalkappen gut verschlossen bei 2-8°C gelagert wurden, sind die Reagenzien
insgesamt bis zu 10 Stunden im Gerät stabil. Diese Stabilitätstestung im Gerät
erstreckte sich über einen Zeitraum von 11 Tagen.
Nicht einfrieren.
Für eine optimale Haltbarkeit sollten die Reagenzien nach dem Gebrauch aus dem
Gerät entnommen und im Kühlschrank bei 2-8°C in der Originalflasche aufbewahrt
werden.
Bestimmungsansatz
Die ausführliche Beschreibung des Bestimmungsansatzes ist dem GeräteBedienerhandbuch und/oder dem Applikationshandbuch zu entnehmen.
Probenmaterial und Gewinnung
Hinweise zur Gewinnung, Aufbereitung und Lagerung des Blutes sind den
Empfehlungen des Deutschen Instituts für Normung - DIN 58 905 – oder dem CLSI
Dokument H21-A5 zu entnehmen.6
Eingefrorene Proben sollten bei 37°C schnell aufgetaut und bei Bedarf zentrifugiert
werden. Vor der Analyse vorsichtig mischen. Aufgetaute Proben müssen innerhalb von
2 Stunden analysiert werden.
Zusätzliche Reagenzien und Kontrollplasmen
Die folgenden Materialien sind nicht in der Packung enthalten und müssen zusätzlich
bestellt werden:
Amerika und pazifischer Raum
Europa
Art. Nr.
Art. Nr.
Kalibrationsplasma
00200037000020003700
Normal-Kontroll-Plasma 00200031200020003110
Spezialtest Kontrolle Level 1 0020011000
0020011000
Spezialtest Kontrolle Level 2
0020012000
0020012000
Qualitätskontrolle
Es ist gängige Laborpraxis, die Qualität der Analyse mit Kontrollmaterialien im
normalen sowie im pathologischen Bereich zu überprüfen.7 Es wird empfohlen,
als Kontrollmaterial die oben angegebenen Kontrollen zu verwenden. Jedes
Labor sollte für das Qualitätskontroll-Programm seinen eigenen Mittelwert und
die Standardabweichung (s) ermitteln. Spätestens nach jeweils 8 Stunden
sollte eine Qualitätskontrolle durchgeführt werden. Weitere Informationen
sind dem Bedienerhandbuch zu entnehmen. Algorithmen zur Beurteilung der
Qualitätskontrollergebnisse siehe z.B. Westgard et al.8
Siehe auch „Richtlinien der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung
laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen“ in der jeweils gültigen Fassung.
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Einschränkungen
HemosIL VWF:RCo Ergebnisse auf Systemen der ACL TOP Familie werden durch
Konzentrationen von Hämoglobin bis 500 mg/dL, Bilirubin bis 18 mg/dL und Lipiden
bis 1300 mg/dL nicht beeinflusst.
Das Vorhandensein von Rheumafaktoren kann zu einer Überbewertung der
Testergebnisse führen.
Proben von Patienten, die Präparationen von monoklonalen Maus-Antikörpern aus
diagnostischen oder therapeutischen Gründen erhalten haben, können humane
Anti-Maus Antikörper enthalten (HAMA). Die Anwesenheit von HAMA kann zu einer
Überschätzung der Ergebnisse von Immunoassays führen, die monoklonale MausAntikörper verwenden. Der Puffer des HemosIL VWF:RCo enthält eine hemmende
Substanz gegen HAMA zur Minimierung der Interferenzen auf das Testergebnis.
Referenzbereiche
Mit dem VWF:RCo Kit wurde eine Studie zur Bestimmung des Normalbereichs
durchgeführt.
Blutgruppe9
N
ACL TOP Familie (% VWF:RCo)
O
124
48,2 – 201,9
A + B + AB
140
60,8 – 239,8
Die Werte wurden mit einer spezifischen Reagenziencharge ermittelt. Aufgrund
verschiedener Variablen, die die Gerinnungszeit beeinflussen können, wird empfohlen,
dass jedes Labor seinen eigenen Normalbereich überprüft.
Testcharakteristik
Präzision:
Die Präzision wurde in Übereinstimmung mit den CLSI EP05-A210 Richtlinien, an 20
Tagen mit 2 Läufen pro Tag und 2 Wiederholungen pro Lauf für jede Probe (n=80/
Gerät/Charge) ermittelt.
Es wurde die Präzision im Lauf und von Tag zu Tag bestimmt:
Mittelwert
VK %
VK %
ACL TOP Familie
(% VWF:RCo)
(im Lauf)
(Summe)
Normal-Kontroll-Plasma112
5,1 5,5
Spezialtest Kontrolle Level 1
72
6,6
6,9
Spezialtest Kontrolle Level 2
26
6,1
6,8
Korrelation:
System
SteigungOrdinatenabschnitt r
Vergleichsmethode
ACL TOP Familie
1,02
-0,99
0,977
HemosIL VWF Aktivität
Die Präzisions- und Korrelationsergebnisse sind mit spezifischen Reagenzien- und
Kontrollchargen ermittelt worden.
In externen Studien wurden die folgenden Daten mit einer spezifischen HemosIL
VWF:RCo Charge ermittelt:
System
SteigungOrdinatenabschnitt r
Vergleichsmethode
ACL TOP Familie
1,06
0,71
0,96
HemosIL VWF Aktivität
ACL TOP Familie
1,08
1,20
0,96 HemosIL VWF Aktivität
Bestimmungsgrenze:
System
ACL TOP Familie
4,4 % VWF:RCo
Linearität:
System
Standard Test
Rerun Test
ACL TOP Familie
7 – 120 % VWF:RCo
7 – 480 % VWF:RCo
Der Test zeigt keinen Prozone-Effekt bis zu 1300 %.
Für den Fall, dass der lineare Bereich im Rerun Test überschritten wird, sollten
die Proben mit dem in der Packung enthaltenen Diluent manuell 1:10 verdünnt
werden (40 µL Probe + 360 µL Diluent) und die Analyse erneut durchgeführt
werden. Die daraus ermittelten Ergebnisse müssen anschließend mit dem Faktor 10
multipliziert werden, um den Verdünnungsschritt zu korrigieren.
Principe
Le screening de base de la maladie de Von Willebrand (VWM), inclut le test d’activité
cofacteur de la ristocétine (VWF:RCO) de la protéine plasmatique VWF. Le test
VWF:RCo utilisant des plaquettes reproduit in vitro la capacité du VWF d’interagir
avec un de ses récepteurs plaquettaires, le complexe glycoprotéique GPIb-IX-V,
en présence de ristocétine.1 La méthode classique est basée sur la propriété de
l’antibiotique ristocétine d’entraîner l’agglutination des plaquettes normales fixées à
la formaline en présence de VWF. Cette méthode a cependant une variabilité inter
laboratoires élevée en raison de la complexité de la procédure.2
Les différentes recommandations cliniques suggèrent que la détermination et la
comparaison des niveaux plasmatiques d’antigène du Facteur von Willebrand
(VWF:Ag), d’activité du Facteur von Willebrand et de Facteur VIII (FVIII), permettent
de différencier les défauts quantitatifs (Type 1 ou 3) des défauts qualitatifs (Type 2) et
ainsi de diagnostiquer les différents types de VWM1,2,3.
Quand un niveau extrêmement faible voire indétectable de VWF:Ag est obtenu une
VWM de type 3 peut être attendue. Quand un taux modéré voire même normal est
obtenu, les tests VWF:RCo et FVIII doivent être réalisés et les résultats comparés
à ceux du VWF:Ag. Si les 3 valeurs se trouvent dans les limites de la normale,
l’hémophilie A et la VWM semblent pouvoir être exclues. Si au moins l’un des
paramètres est anormalement bas, il est nécessaire de calculer les ratios, VWF:RCo/
VWF:Ag et FVIII/VWF:Ag. Si les deux ratios sont proches de 1 (certains auteurs
suggèrent 0,7 comme valeur cut-off) une VWM de type 1 semble pouvoir être
diagnostiquer.1,3 Lorsque le ratio VWF:RCo/VWF:Ag est bas (le seuil préconisé étant
également 0.7), une VWM de types 2A, 2B ou 2M semble pouvoir être diagnostiquée.
Des tests complémentaires tels que RIPA (Ristocetin Induced Platelet Aggregation),
analyse multimérique et tests de “binding”, sont nécessaires afin d’être en mesure de
discriminer les différents sous-types.3 Lorsque le ratio FVIII/VWF:Ag est bas (le seuil
préconisé étant également 0.7), une VWM de type 2N ou une Hémophilie A semble
pouvoir être diagnostiquée. Dans ce cas, un test de « binding » FVIII est nécessaire
afin de les discriminer.
Le réactif HemosIL VWF:RCo est un test immunoturbidimétrique latex destiné à
quantifier l’activité VWF:RCo dans le plasma citraté. L’activité VWF est déterminée
en mesurant l’augmentation de turbidité produite par l’agglutination de particules de
latex contenues dans le réactif correspondant. Les particules de latex sont adsorbées
avec un fragment recombinant de la glycoprotéine du récepteur plaquettaire du
VWF (rGP1bα) par l’intermédiaire d’un anticorps monoclonal spécifique qui permet
d’orienter le fragment GP1bα afin qu’il puisse interagir avec le VWF de l’échantillon de
patient en présence de ristocétine.4,5 L'importance de l'agglutination est directement
proportionnelle à l’activité en VWF de l'échantillon et est déterminée en mesurant la
diminution de la lumière transmise due à la formation d'aggrégats.
Composition
Le coffret von Willebrand Factor Ristocetinn Cofactor Activity (Activité Cofacteur
Ristocétine du Facteur von Willebrand) contient:
R Latex Reagent (Réf. 0020300910): 2 flacons de 2 ml d'une suspension de
particules de latex polystyrène adsorbées avec un fragment recombinant de la
glycoprotéine récepteur plaquettaire du VWF (rGP1bα), contenant également de
l'albumine bovine sérique, un stabilisant et un conservateur.
RCoRistocetin (Réf. 0020300920): 2 flacons de 1,6 ml de sulfate de ristocétine,
glycopeptide antibiotique isolé à partir de Nocardia lurida en solution aqueuse
acide.
BBuffer (Réf. 0020300930): 2 flacons de 4 ml de tampon Tris contenant de
l'albumine bovine sérique, des stabilisants et un conservateur.
DDiluent (Réf. 0020300940): 2 flacons de 3,6 ml d’une solution saline contenant
de l'albumine bovine sérique et un conservateur.
PRECAUTIONS:
Le réactif latex, le tampon et le diluant contiennent des produits d’origine bovine.
Les animaux sources ont été déterminés comme indemnes d’ESB. Les animaux
sources ont été l’objet d’une inspection des services sanitaires vétérinaires ante et
post mortem et déterminés comme indemnes de tout agent infectieux ou contagieux.
Cependant, ce matériel doit être manipulé et considéré comme potentiellement
infectieux.
Le réactif latex, la Ristocétine et le diluant ne sont pas classifiés comme dangereux.
Tampon:
Attention
Classe de danger: Eye Irrit. 2, H319
Indications de danger: H319: Provoque une sévère irritation des yeux.
Conseils de prudence: P264: Se laver les mains soigneusement après
manipulation P280: Porter des gants de protection/des vêtements de protection/
un équipement de protection des yeux/du visage. P305+P351+P338: EN CAS DE
CONTACT AVEC LES YEUX: rincer avec précaution à l’eau pendant plusieurs minutes.
Enlever les lentilles de contact si la victime en porte et si elles peuvent être facilement
enlevées. Continuer à rincer. P337+P313: Si l’irritation oculaire persiste: consulter un
médecin.
Ce produit est à usage diagnostique in vitro.
Préparation
Latex Reagent: Mélanger par inversion avant utilisation.
Ristocetin: Mélanger par inversion avant utilisation.
Buffer: Mélanger par inversion avant utilisation.
Diluent: Mélanger par inversion avant utilisation.
Note: Eviter la formation de mousse lors de l’homogénéisation des réactifs. La
présence de bulles d’air en surface du liquide peut entraîner des interférences avec les
détecteurs fluidiques des instruments.
Conservation et stabilité des réactifs
Conserver à 2-8°C, les réactifs non ouverts sont stables jusqu'à la date de péremption
indiquée sur les flacons.
La stabilité des réactifs ouverts est de: 2 mois à 2-8°C dans le flacon d'origine ou 24
heures à 15°C sur les analyseurs de la famille ACL TOP en continu. Si les réactifs
sont placés à bord de l’analyseur pendant 4 heures puis remis au réfrigérateur entre
les séries dans le flacon d’origine bouché, la stabilité cumulée à bord de l’analyseur
est de 12 heures. Cette étude de stabilité cumulée a été réalisée sur une période de
6 jours. Si les réactifs sont placés à bord de l’analyseur pendant 2 heures puis remis
au réfrigérateur entre les séries dans le flacon d’origine bouché, la stabilité cumulée à
bord de l’analyseur est de 10 heures. Cette étude de stabilité cumulée a été réalisée
sur une période de 11 jours.
Ne pas congeler.
Pour une stabilité optimale, conserver le réactif à 2-8°C dans le flacon d’origine entre
chaque utilisation.
Procédures de test/instrument
Se référer au mode d'emploi de l'instrument IL approprié et/ou au manuel d'application
pour des informations complètes sur les procédures de dosage.
Recueil des spécimens et préparation
9 parts de sang fraîchement prélevé sont collectées avec 1 part de citrate trisodique.
Se référer au document NCCLS H21-A5 ou au document GEHT (STV, numéro spécial,
1-40, 1998 et ses modifications parues en 2007 sur le site du GEHT) pour plus
d'informations sur le prélèvement des échantillons, leur manipulation et leur stockage.6
Les échantillons de plasma congelés doivent être décongelés rapidement à 37°C puis
éventuellement centrifugés avant utilisation. Après décongélation le dosage doit être
réalisé dans les 2 heures.
Réactifs auxiliaires et plasma de contrôle
Non fournis avec la trousse, ils doivent faire l’objet d’une commande séparée:
Amérique et Pacifique
Europe
Réf.Réf.
Plasma de calibration
0020003700
0020003700
Contrôle normal
0020003120
0020003110
Contrôle Tests Spéciaux Niveau 1
0020011000
0020011000
Contrôle Tests Spéciaux Niveau 2
0020012000
0020012000
Contrôle de qualité
Les contrôles normaux et anormaux sont recommandés pour un programme de
contrôle de qualité complet.7 Le Contrôle normal, le Contrôle Tests Spéciaux Niveau
1 (contenant un taux normal de VWF:RCo) et le Contrôle Tests Spéciaux Niveau
2 (contenant un taux de VWF:RCo dans la zone anormale) sont spécifiques à ce
programme. Chaque laboratoire doit établir ses propres, moyenne, écart type et
programme de contrôle de qualité afin de vérifier l’état de fonctionnement de son
système analytique. A titre d’exemple les contrôles pourraient être analysés toutes
les 8 heures en accord avec une bonne pratique de laboratoire. Se référer au mode
d'emploi de l'instrument pour des informations complémentaires. Se reporter à
Westgard et al pour la détermination et la résolution des contrôles hors limites.8
Les résultats VWF:RCo sont reportés en % de la normalité.
Les résultats du dosage peuvent être utilisés avec d'autres informations, comprenant
le contexte clinique, pour établir le diagnostic.
Limites de la méthode et substances interférant avec celle-ci
Les résultats VWF:RCo sur les analyseurs de la famille ACL TOP ne sont pas affectés
par l'hémoglobine jusqu'à 500 mg/dl, la bilirubine jusqu'à 18 mg/dl (180 mg/l) et par les
lipides jusqu'à 1 300 mg/dl (13 g/l).
La présence de facteurs rhumatoïdes peut entraîner l’obtention de résultats par excès.
Les spécimens de patients ayant reçu des préparations d’anticorps monoclonaux de
souris à des fins diagnostiques ou dans le cadre de traitements, peuvent contenir des
anticorps humains anti-immunoglobulines de souris (HAMA). La présence de HAMA
pourrait entraîner l’obtention de résultats par excès pour les tests immunologiques
utilisant des anticorps monoclonaux de souris. Le tampon de réaction HemosIL
VWF:RCo buffer contient des agents bloquants de ces HAMA afin de minimiser l’effet
de ce type d’interférence sur le test.
Valeurs attendues
Les valeurs normales de cette étude ont été obtenues en utilisant le coffret HemosIL
VWF:RCo.
Groupes ABO9
N
Famille ACL TOP (% VWF:RCo)
O
124
48,2 – 201,9
A + B + AB
140
60,8 – 239,8
Ces résultats sont obtenus en utilisant un lot spécifique de réactifs.
Du fait qu'un grand nombre de variables peuvent affecter les résultats, nous
recommandons à chaque laboratoire de vérifier ses propres valeurs normales.
Caractéristiques et performances
Fidélité:
La répétabilité (CV% intra séries) et la reproductibilité (CV% total, inter séries et
de jour à jour) ont été évaluées selon les recommandations du document CLSI
EP05-A210, sur une période de 20 jours à raison de 2 séries par jour et 2 réplicates de
chaque échantillon par série (n = 80 / instrument / lot). Les résultats de répétabilité et
de reproductibilité intra laboratoire sont présentés ci-dessous.
Famille ACL TOP
Moyenne (% VWF:RCo) CV % (Intra séries) CV % (Total)
Contrôle normal
112
5,1
5,5
Contrôle Tests Spéciaux Niveau 1
72
6,6
6,9
Contrôle Tests Spéciaux Niveau 2
26
6,1
6,8
Corrélation:
Méthode de
Analyseur
Pente Ordonnées à l’origine r
comparaison
Famille ACL TOP
1,02
-0,96
0,977
HemosIL VWF Activity
Les résultats de fidélité et de corrélation sont obtenus en utilisant des lots spécifiques
de réactifs et de contrôles.
Des études réalisées sur des sites indépendants ont donné les résultats suivants en
utilisant des lots spécifiques de réactifs HemosIL VWF:RCo.
Méthode de
Analyseur
Pente Ordonnées à l’origine r
comparaison
Famille ACL TOP
1,06
0,71
0,96
HemosIL VWF Activity
Famille ACL TOP
1,08
1,20
0,96
HemosIL VWF Activity
Limite de détection:
Analyseur
Famille ACL TOP
4,4 (% VWF:RCo)
Linéarité:
Test après dilution
Analyseur
Test sans dilution
automatique
(% VWF:RCo)
(% VWF:RCo)
Famille ACL TOP
7,0 – 120,0
7,0 – 480,0
Pas d’effet de zone (Excès d’antigène) jusqu’à 1 300 %.
Si la linéarité est dépassée après réanalyse automatique, les échantillons pourront
être dilués manuellement au 1:10 avec du diluant (40 µl d'échantillon + 360 µl de
diluant) et redosés. Les résultats ainsi obtenus doivent être multipliés par le facteur 10
de dilution.
T3800-4110 R2 12/2014
HemosIL®
Von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity - 0020300900
ITALIANO - Revisione dell'inserto 12/2014
Bibliography / Literatur / Bibliografía / Bibliographie / Bibliografia /Bibliografia
Utilizzo
Limitazioni/Sostanze interferenti
1. Sadler JE, Mannucci PM, Berntorp E, Bochkov N, Boulyjenkov V, Ginsburg D, Meyer
D, Peake I, Rodeghiero F, Srivastava A. Impact, diagnosis and treatment of von
Willebrand disease. Thromb Haemost 2000; 84: 160-174.
2. Clinical and Laboratory Standards Institute. Assays of von Willebrand Factor Antigen
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3. Nichols WL, et al. Von Willebrand disease (VWD): evidence-based diagnosis and
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Deckmyn H. Plasma glycocalicin as a source of GPIbα in the von Willebrand factor
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5. Federici AB, Canciani MT, Forza I, Mannucci PM, Marchese P, Ware J, Ruggeri ZM.
A sensitive ristocetin co-factor activity assay with recombinant glycoprotein Ibα for
the diagnosis of patients with low von Willebrand factor levels. Haematologica 2004;
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Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation and Molecular Hemostasis
Assays; Approved Guideline - Fifth Edition, CLSI Document H21-A5; Vol. 28 No. 5.
7. Zucker S, Cathey MH, West B. Preparation of Quality Control Specimens for
Coagulation. Am J Clin Pathol 1970; 53: 924-927.
8. Westgard JO, Barry PL. Cost-Effective Quality Control: Managing the Quality and
Productivity of Analytical Processes, AACC Press 1986.
9. Gill JC et al. The effect of ABO blood group on the diagnosis of VWD. Blood 1987; 69:
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10.Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision Performance of
Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline - Second Edition, CLSI
Document EP05-A2; Vol. 24, No. 25.
The Instrumentation Laboratory logo, HemosIL, ACL and ACL TOP are trademarks of
Instrumentation Laboratory Company and/or one of its subsidiaries or parent companies,
and may be registered in the United States Patent and Trademark Office and in other
jurisdictions.
©2011 Instrumentation Laboratory.
Issued December 2014
Buffer:
Test immunologico al lattice automatico per la determinazione quantitativa dell’attività
del cofattore ristocetinico del fattore von Willebrand nel plasma umano citratato sugli
analizzatori della Famiglia ACL TOP®.
L’uso del kit HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity (HemosIL
VWF:RCo) è indicato a scopo diagnostico nei casi di sospetta malattia di von
Willebrand.
Principio del metodo
Lo screening di base della Malattia di von Willebrand (VWD) comprende l’uso di un
test per determinare l’attività del cofattore ristocetinico del fattore von Willebrand
(R:CoF) per determinare l’attività del Fattore von Willebrand (VWF). Il test R:CoF
utilizza le piastrine per riprodurre in vitro la capacità del VWF di interagire con uno
dei suoi recettori piastrinici, il complesso glicoproteina GPIb-FIX-FV in presenza di
ristocetina.1 Il metodo classico si basa sulla capacità dell’antibiotico ristocetina di
agglutinare piastrine normali fissate con formalina in presenza di VWF; tuttavia questo
test è soggetto ad un’elevata variabilità inter-laboratorio dovuta alla complessità della
procedura.2
Le Linee Guida suggeriscono che la determinazione e il confronto dei risultati dei test
dell’antigene del fattore di von Willebrand (VWF:Ag), dell’attività del VWF e del fattore
VIII (FVIII) permettono la differenziazione delle anomalie quantitative (tipo 1 e tipo 3)
o qualitative (tipo 2) del VWF e quindi la diagnosi dei diversi tipi di VWD.1,2,3 Quando
si ottiene un valore estremamente basso o non misurabile di VWF:Ag, è possibile
prevedere una VWD di tipo 3. Se il risultato è normale o vicino alla normalità, devono
essere eseguite le determinazioni dell’attività del VWF e del FVIII, confrontando
poi i risultati ottenuti con il dato di VWF:Ag. Se tutti e tre i valori sono all’interno
dell’intervallo di normalità, si possono escludere la VWD e l’emofilia A.
Se anche solo uno dei risultati è basso, è necessario calcolare i rapporti R:CoF/
VWF:Ag e FVIII/VWF:Ag. Se entrambi i rapporti sono vicino ad 1 (alcuni autori
suggeriscono 0,7 come cut-off), può essere diagnosticata una VWD di tipo 1.1,3
Quando il rapporto R:CoF/VWF:Ag è basso (il cut-off suggerito è ancora 0,7),
possono essere diagnosticati i tipi 2A, 2B o 2M. Per distinguere i differenti sottotipi
sono necessari ulteriori test di laboratorio come il RIPA (Ristocetin Induced Platelet
Aggregation, Aggregazione piastrinica indotta dalla ristocetina), l’analisi dei multimeri
e i test per la verifica della capacità di legame del VWF al FVIII, al collagene e alle
piastrine (recettore Glicoproteina Ib).3 Quando il rapporto FVIII/VWF:Ag è basso (il
cut-off suggerito è ancora 0,7), può essere diagnosticato un tipo 2N o una emofilia A:
per discriminare fra le due patologie è necessario effettuare il test per la verifica della
capacità di legame del VWF al FVIII.
Il kit HemosIL VWF:RCo è un test immunologico al lattice automatico per la
determinazione quantitativa dell’attività del VWF:RCo nel plasma umano citratato.
L’attività del VWF viene determinata misurando l’incremento di torbidità prodotta dalla
reazione di agglutinazione. Il reagente al lattice contenuto nel kit è una sospensione
di particelle di polistirene di grandezza uniforme legate ad una porzione ricombinante
della glicoproteina che agisce da recettore piastrinico per il VWF (rGP1bα). Tale
legame avviene per mezzo di un anticorpo monoclonale specifico che permette di
orientare la posizione del frammento GP1ba così che possa interagire, in presenza
di ristocetina, con il VWF del campione in esame. 4,5 Il grado di agglutinazione è
direttamente proporzionale all’attività del VWF nel campione ed è determinato
misurando la diminuzione della luce trasmessa dovuta alla formazione degli aggregati
(test immunologico turbidimetrico).
Composizione
Il kit HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity è composto da:
R Latex Reagent (Cat. No. 0020300910): 2 flaconi da 2 mL di una sospensione di
una sospensione di particelle di lattice di polistirene rivestite con un frammento
ricombinante del recettore piastrinico glicoproteina del VWF (rGP1bα) per
mezzo di un anticorpo monoclonale specifico. Contiene albumina bovina serica,
tampone, stabilizzanti e conservanti.
RCoRistocetin (Cat. No. 0020300920): 2 flaconi da 1.6 mL di solfato di ristocetina,
un antibiotico glicopeptide ottenuto da una soluzione acquosa acida di Nocardia
lurida.
BBuffer (Cat. No. 0020300930): 2 flaconi da 4 mL di tampone Tris, con aggiunta di
albumina bovina serica, stabilizzanti e conservanti.
DDiluent (Cat. No. 0020300940): 2 flaconi da 3.6 mL di una soluzione salina
contenente albumina bovina serica, stabilizzanti e conservanti.
ATTENZIONE:
Latex Reagent, Buffer, and Diluent contengono materiale di origine bovina, ottenuto
da animali che non hanno mostrato sintomi di BSE né in vita né dopo la morte. Ciò
nonostante il materiale dovrebbe essere trattato come potenzialmente infetto.
Latex Reagent, Ristocetin, Diluent sono classificati come non pericolosi.
Attenzione
Classe di pericolo: Eye Irrit. 2, H319
Indicazionei di pericolo: H319: Provoca grave irritazione oculare.
Consigli di prudenzas: P264: Lavare accuratamente le mani dopo l’uso. P280:
Indossare guanti/indumenti protettivi /Proteggere gli occhi/ il viso. P305+P351+P338:
IN CASO DI CONTATTO CON GLI OCCHI: sciacquare accuratamente per parecchi
minuti. Togliere le eventuali lenti a contatto se è agevole farlo. Continuare a sciacquare.
P337+P313: Se l’irritazione degli occhi persiste, consultare un medico.
Per uso diagnostico in vitro.
Preparazione
Latex Reagent: Capovolgere delicatamente prima dell’uso.
Ristocetin: Capovolgere delicatamente prima dell’uso.
Buffer: Capovolgere delicatamente prima dell’uso.
Diluent: Capovolgere delicatamente prima dell’uso.
Nota: Evitare la formazione di schiuma, eventuali bolle possono interferire con i
sensori di livello degli strumenti.
Conservazione e stabilità dei reagenti
I reagenti sigillati sono stabili a 2-8°C fino alla data di scadenza stampata sull’etichetta.
I reagenti aperti sono stabili per 2 mesi a 2-8ºC nel flacone originale o 24 ore
consecutive a 15°C a bordo dei Sistemi ACL TOP. Se i reagenti vengono lasciati a
bordo per 4 ore e riposti a 2-8°C nel flacone originale chiuso, sono stabili per un tempo
complessivo pari a 12 ore. Questo periodo di 12 ore deve essere distribuito in un
arco di tempo massimo pari 6 giorni. Se i reagenti vengono lasciati a bordo per 2 ore
e riposti a 2-8°C nel flacone originale chiuso, sono stabili per un tempo complessivo
pari a 10 ore. Questo periodo di 10 ore deve essere distribuito in un arco di tempo
massimo pari a 11 giorni.
Non congelare.
Al termine dei cicli lavorativi si consiglia di conservare i reagenti a 2-8°C nel flacone
originale per una migliore stabilità.
Metodo
Per le metodiche e le procedure di lavoro consultare il Manuale dell’Operatore della
Famiglia ACL TOP.
Preparazione dei campioni
Per informazioni aggiuntive sulla preparazione, il trattamento e la conservazione dei
campioni fare riferimento al documento CLSI H21-A5.6
Scongelare rapidamente i campioni a 37°C e centrifugare il plasma prima di eseguire il
test se necessario. Analizzare i campioni entro 2 ore dallo scongelamento.
Reagenti ausiliari e plasmi di controllo
I seguenti reattivi non sono forniti insieme al kit e devono essere ordinati
separatamente:
Europe
Cat. No.
Calibration plasma
0020003700
Normal Control
0020003110
Special Test Control Level 1 0020011000
Special Test Control Level 2
0020012000
Controllo di Qualità
Per un completo programma di controllo di qualità si raccomanda l’uso di plasmi
normali e patologici.7 Il Controllo normale e i Controlli dei Test Speciali Livello 1
(contiene livelli normali di VWF:RCo) e Livello 2 (contiene livelli patologici di VWF:RCo)
sono specifici per questo tipo di programma. Ogni laboratorio dovrà stabilire i propri
valori medi e le deviazioni standard per ogni controllo ed individuare le corrette
procedure di analisi. I controlli dovranno essere analizzati almeno una volta ogni 8 ore
in accordo con le esigenze del laboratorio. Consultare il Manuale dell’Operatore dello
strumento per ulteriori informazioni. Per l’identificazione e la risoluzione di situazioni
particolari, fare riferimento all’articolo di Westgard et al.8
I risultati del test HemosIL VWF:RCo su Sistemi ACL TOP non sono influenzati
in presenza di livelli di emoglobina fino a 500 mg/dL, bilirubina fino a 18 mg/dL,
trigliceridi fino a 1300 mg/dL. La presenza di fattore reumatoide potrebbe produrre una
sovrastima dei risultati.
I campioni di quei pazienti ai quali sono stati somministrati farmaci a base di anticorpi
monoclonali di topo, a scopo diagnostico o terapeutico, possono contenere anticorpi
umani anti-topo (HAMA). La presenza di HAMA nei campioni può causare una
sovrastima dei risultati. Il Buffer del kit HemosIL VWF:RCo contiene un agente diretto
contro gli HAMA per limitarne le interferenze sui risultati dei campioni.
Valori attesi
È stato eseguito uno studio sul range di normalità usando il kit HemosIL VWF:RCo kit.
Gruppi Sanguigni9
N
Sistemi ACL TOP (% VWF:RCo)
O
124
48.2 - 201.9
A + B + AB
140
60.8 - 239.8
Tali risultati sono stati ottenuti utilizzando un lotto specifico di reagente. A causa
delle numerose variabili che possono influenzare i risultati, ogni laboratorio dovrebbe
stabilire il proprio intervallo di normalità.
Prestazioni
Precisione:
La precisione è stata valutata seguendo le indicazioni del documento CLSI EP05-A210,
per 20 giorni, eseguendo due sessioni al giorno e 2 replicati per ciascun livello (n=80/
strumento/ lotto). I risultati ottenuti nelle serie (ripetibilità) e complessivamente (fra
strumenti) sono riportati qui di seguito.
Sistemi ACL TOP
Media (% VWF:RCo) CV% (Nella serie) CV% (Totale)
Normal Control
112
5.1
5.5
Special Test Control Level 1
72
6.6
6.9
Special Test Control Level 2
26
6.1
6.8
Correlazione:
Sistema
Pendenza
Intercetta
r
Metodo di riferimento
Sistemi ACL TOP
1.02
-0.99
0.977
HemosIL VWF Activity
La precisione e i risultati di correlazione sono stati ottenuti utilizzando un lotto specifico
di reagente e controlli.
In uno studio clinico, utilizzando un lotto specifico del kit HemosIL VWF:RCo, sono
stati ottenuti i seguenti risultati:
Sistema
Pendenza
Intercetta
r
Metodo di riferimento
Sistemi ACL TOP
1.06
0.71
0.96
HemosIL VWF Activity
Sistemi ACL TOP
1.08
1.20
0.96
HemosIL VWF Activity
Limite di rilevabilità:
Sistema
Sistemi ACL TOP
4.4 (% VWF:RCo)
Linearità:
Sistema
Test senza rerun (% VWF:RCo) Test con rerun (% VWF:RCo)
Sistemi ACL TOP
7.0 – 120.0
7.0 – 480.0
L’effetto prozona è assente fino a 1300%.
Se l’intervallo di linearità (Rerun) viene superato, i campioni devono essere diluiti
manualmente 1:10 con il diluente incluso nel kit (40 µL di campione + 360 µL di
Diluente) e rianalizzati. I risultati ottenuti devono essere moltiplicati per 10 per
correggere il fattore di diluizione.
Risultati
I risultati del test HemosIL VWF:RCo sono espressi in % di normalità.
I risultati del test dovrebbero essere utilizzati insieme ad altre informazioni, compreso il
quadro clinico, per una diagnosi completa.
Von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity - 0020300900
PORTUGUÊS - Revisão do folheto 12/2014
Utilização prevista
Resultados
Buffer:
O imunoensaio de latex automatizado melhorado para a determinação quantitativa
da actividade do cofactor ristocetina do factor de von Willebrand no plasma humano
citratado nos sistemas da Família ACL TOP® .
O HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity (HemosIL VWF:RCo)
é indicado para utilização em doentes que, baseado nos seus sinais clínicos, têm
suspeita de doença de von Willebrand.
Resumo e príncipio
O rastreio básico da doença de von Willebrand Disease (VWD) inclui a utilização de
um ensaio de actividade do cofactor Ristocetina do Factor de von Willebrand (R:CoF)
para determinar a actividade do Factor de von Willebrand (VWF) plasmático. O ensaio
R:CoF utiliza plaquetas e reproduz in vitro a capacidade do para interagir com um dos
seus receptors de plaquetas, o complexo de glicoproteínas GPIb-IX-V na presença da
ristocetina.1 O método clássico baseia-se na propriedade do antibiótico ristocetina de
aglutinar plaquetas normais fixadas em formalina na presença de VWF; contudo, tem
uma elevada variabilidade inter-laboratório devido à complexidade do procedimento.2
As guidelines clínicas sugerem que a medição e comparação do antigénio do Factor
de Willebrand (VWF:Ag), da actividade do VWF e níveis plasmáticos do Factor
VIII (FVIII) permitem a diferenciação dos defeitos quantitativos (tipo 1 ou tipo 3) ou
defeitos qualitativos (tipo 2) do VWF e portanto, diagnosticar os diferentes tipos de
VWD.1,2,3 Quando é obtido um nível extremamente baixo ou indetectável de VWF:Ag,
deve esperar-se uma VWD do tipo 3. Se é obtido um resultado moderado ou mesmo
normal, os ensaios R:CoF e FVIII têm de ser realizados e comparados com o
resultado VWF:Ag. Se os três valores estiverem dentro dos intervalos normais, poderse-á excluir VWD 3 Hemofilia A. Se pelo menos um parâmetro estiver anormalmente
baixo, será necessário calcular os rácios do R:CoF/VWF:Ag e FVIII/VWF:Ag. Se
ambos os rácios estiverem próximos de 1 (alguns autores sugerem 0.7 como cut-off),
pode ser diagnosticada uma VWD tipo 1.1,3 Quando o rácio R:CoF/VWF:Ag é baixo
(0.7 também é o cut-off sugeridos), podem ser diagnosticados os tipos 2A, 2B ou 2M.
São necessários testes laboratoriais adicionais, tal como o RIPA (Ristocetin Induced
Platelet Aggregation- agregação plaquetária induzida pela ristocetina), análise
multimérica, e ensaios de ligação para podermos distinguir os diferentes sub-tipos.
3 Quando o rácio FVIII/VWF:Ag é baixo (0.7 também é o cut-off sugerido), podemos
diagnosticar o tipo 2N ou Hemofilia A e é necessário um ensaio de ligação do FVIII
para efectuar a diferenciação.
O kit HemosIL VWF:RCo kit é um ensaio imunoturbidimétrico melhorado com
partículas de látex, para quantificar a actividade VWF:RCo no plasma citratado. A
actividade do VWF é determinada pela medição do aumento da turvação produzida
pela aglutinação do reagente latex. As partículas de latex são revestidas com um
fragmento recombinante do receptor plaquetário de VWF (rGP1bα) através de um
anticorpo monoclonal específico que orienta o fragmento GP1bα de modo adequado
para que possa interagir com o VWF da amostra na presença de ristocetina.4,5 O
grau de aglutinação é directamente proporcional à actividade do VWF na amostra
e é determinado pela medição do decréscimo da luz transmitida causada pelos
agregados.
Composição
O kit HemosIL von Willebrand Factor Ristocetin Cofactor Activity consiste em:
R Latex Reagent (Cat. No. 0020300910): 2 frascos x 2 mL de suspensão de
partículas latéx de poliestireno revestidas com um fragmento recombinante de
receptor plaquetário do VWF (rGP1bα) com um anticorpo monoclonal específico.
Contém albumina sérica bovina, tampão,estabilizante, e conservante.
RCoRistocetin (Cat. No. 0020300920): 2 frascos x 1.6 mL de sulfato de ristocetina,
um antibiótico glicopéptido isolado da Nocardia lurida numa solução ácida
aquosa.
BBuffer (Cat. No. 0020300930): 2 frascos x 4 mL de tampão Tris com albumina
sérica bovina, estabilizante e conservante.
DDiluent (Cat. No. 0020300940): 2 frascos x 3.6 mL de solução salina com
albumina sérica bovina e conservante.
PRECAUÇÕES E AVISOS:
O Reagente Látex, Buffer e D-Dimer Calibrator contém material de origem bovina
Todos os dadores animais foram fornecidos a partir de manadas sem BSE. O gado
recebeu uma inspecção de saúde ante- e post-mortem, efectuada por um veterinário,
e aparentemente não tinham material infeccioso e contagioso. Contudo, o material
deve ser tratado como potencialmente infeccioso.
Latex Reagent, Ristocetin, Diluent não estão classificados como perigosos.
Atenção
Classe de perigo: Eye Irrit. 2, H319
Advertências de perigo: H319: Provoca irritação ocular grave.
Recomendações de prudência: P264: Lavar as mãos cuidadosamente após
manuseamento. P280: Usar luvas de protecção/vestuário de protecção/protecção
ocular/protecção facial. P305+P351+P338: SE ENTRAR EM CONTACTO COM OS
OLHOS: enxaguar cuidadosamente com água durante vários minutos. Se usar lentes
de contacto, retire-as, se tal lhe for possível. Continuar a enxaguar. P337+P313: Caso
a irritação ocular persista: consulte um médico.
Este produto é para uso em diagnóstico in vitro
Preparação
Latex Reagent: Inverter para misturar antes de utilizar..
Ristocetin: Inverter para misturar antes de utilizar.
Buffer: Inverter para misturar antes de utilizar..
Diluent: Inverter para misturar antes de utilizar.
Nota: Evite a formação de espuma quando homogeneizar os reagentes. Bolhas de ar
no topo dos líquidos podem interferir com os sensores de líquido nos instrumentos.
Conservação e estabilidade do reagente
Os reagentes fechados são estáveis até ao fim do prazo de validade impresso no
frasco, desde que conservado entre 2-8°C.
Os reagentes abertos são estáveis durante 2 meses a 2-8°C no frasco original ou
24 horas continuamente quando colocados a 15°C na Família ACL TOP. Quando
os reagentes são utilizados durante 4 horas colocados por sessão de testes e são
repostos bem fechados a 2-8°C entre sessões, os reagentes são estáveis durante um
período cumulativo de até 12 horas. Este estudo de tempo cumulativo até 12 horas
foi distribuído ao longo de um período de 6 dias. Quando utilizados durante 2 horas
colocados por sessão de testes e são repostos bem fechados a 2-8°C entre sessões,
os reagentes são estáveis durante um período cumulativo de até 10 horas. Este
estudo de período de tempo cumulativo colocado no instrumento foi distribuído ao
longo de um período de 11 dias.
Não congelar.
Para obter uma estabilidade óptima retire os reagentes do aparelho e conserve-os
entre 2-8°C, nos recipientes originais.
Instrumento/Procedimentos de teste
Consulte o Manual do Operador e/ou Manual de Aplicação do instrumento IL
adequado para obter instruções completas sobre o procedimento do ensaio.
Colheita e preparação da amostra
Consulte o CLSI Document H21-A5 para obter instruções acerca de colheita,
manipulação e conservação de amostras.6
Descongelem amostras rapidamente a 37°C e centrifugue se necessário. Misture
suavemente antes de analisar. Depois de descongelar, o ensaio tem de ser realizado
no intervalo de 2 horas.
Reagentes adicionais e plasmas de controlo
Os seguintes produtos não são fornecidos com o kit e devem ser adquiridos
separadamente:
Américas e eixo do Pacífico
Europa
Cat. No.
Cat. No.
Calibration plasma
0020003700
0020003700
Normal Control
0020003120
0020003110
Special Test Control Level 1 0020011000
0020011000
Special Test Control Level 2
0020012000
0020012000
Controlo de qualidade
Os controlos normal e anormal são recomendados para um programa completo
de controlo de qualidade.7 Os controlos normal, controlo especial de teste nível 1
(com um nível normal de VWF:RCo) e controlo especial de teste nível 2 (contém
um nível anormal de VWF:RCo) (Normal Control, Special Test Control Level 1 e
Special Test Control Level 2) foram concebidos para este programa. Cada laboratório
deve estabelecer a sua média e desvio padrão e deve estabelecer um programa de
controlo de qualidade para monitorizar as análises do laboratório. Os controlos devem
ser analisados, pelo menos, uma vez a cada turno de 8 horas, de acordo com as boas
práticas de laboratório. Consulte Westgard et al para identificação e resolução de
situações fora do controlo.8
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Os resultados do HemosIL VWF:RCo são notificados em % de normalidade.
Os resultados do ensaio devem ser utilizados com outra informação, incluindo o
contexto clínico na formação de um diagnóstico.
Limitações/substâncias interferentes
Os resultados do HemosIL VWF:RCo na Família ACL TOP não são afectados pela
hemoglobina até 500 mg/dL, bilirrubina até 18mg/dL e lípidos até 1300 mg/dL. A
presença do Factor Reumatóide demonstrou produzir uma sobre-estimativa do
resultado do teste.
As amostras de doentes que receberam uma preparação de anticorpo monoclonal de
ratinho para diagnóstico ou terapêutica podem ter anticorpos humanos anti-ratinho
(HAMA). A presença de HAMA pode causar uma sobre-estimação dos resultados em
imunoensaios que utilizam anticorpos monoclonais de ratinho. O HemosIL VWF:RCo
Buffer (tampão de reacção) contém um agente bloqueante contra HAMA para
minimizar esta interferência nos resultados do ensaio.
Symbols used / Verwendete Symbole / Símbolos utilizados / Symboles utilisés / Simboli impiegati / Símbolos utilizados
In vitro diagnostic medical
device
In-vitro Diagnostikum
De uso diagnóstico in vitro
Dispositif mèdical de
diagnostic in vitro
Per uso diagnostico in vitro
Dispositivo médico para
utilização em diagnóstico
in vitro
Batch code
ChargenBezeichnung
Identificación
número de lote
Désignation du lot
Numero del lotto
Número de lote
Use by
Verwendbar bis
Caducidad
Utilisable jusqu’à
Da utilizzare prima
del
Data límite de
utilização
Temperature
limitation
Festgelegte
Temperatur
Temperatura de
Almacenamiento
Températures limites
de conservation
Limiti di temperatura
Límite de
temperatura
Consult instructions for
use
Beilage beachten
Consultar la metódica
Lire le mode d’emploi
Vedere istruzioni per l’uso
Consultar as instruções
de utilização
Control
Kontrollen
Control
Contrôle
Controllo
Controlo
Biological risks
Biologisches Risiko
Riesgo biológico
Risque biologique
Rischio biologico
Risco biológico
Manufacturer
Hergestellt von
Fabricado por
Fabricant
Prodotto da
Fabricado por
Authorised representative
Bevollmächtigter
Representante autorizado
Mandataire
Rappresentanza
autorizzata
Representante autorizado
Valores esperados
Foi realizado um estudo de intervalo normal utilizando o kit HemosIL VWF:RCo
Tipo de sangue ABO9
N
Família ACL TOP (% VWF:RCo)
O
124
48.2 - 201.9
A + B + AB
140
60.8 - 239.8
Estes resultados foram obtidos utilizando um lote específico de reagente. Devido a
demasiadas variáveis que podem afectar os resultados, cada laboratório deve verificar
o seu próprio intervalo normal.
Características de desempenho
Precisão:
A precisão foi avaliada de acordo com o CLSI EP05-A210, durante 20 dias, com
2 análises por dia e 2 replicados por análise para cada nível de amostra (n=80/
instrumento/ lote). Resultados para precisão intra-análise (repetibilidade) e total (intra
dispositivo) estão a seguir:
Família ACL TOP
Média (% VWF:RCo) CV% (intra-análise) CV% (Total)
Normal Control
112
5.1
5.5
Special Test Control Level 1
72
6.6
6.9
Special Test Control Level 2
26
6.1
6.8
Correlação:
Sistema
declive
Intercepção
r
Método comparativo
Família ACL TOP
1.02
-0.99
0.977
Actividade HemosIL VWF
Os resultados de precisão e de correlação foram obtidos utilizando lotes específicos
de reagentes e controlos.
Nos estudos em campo, foram obtidos os dados seguintes com lotes específicos de
reagentes HemosIL VWF:RCo
Sistema
declive
Intercepção
r
Método comparativo
Família ACL TOP
1.06
0.71
0.96
Actividade HemosIL VWF
Família ACL TOP
1.08
1.20
0.96 Actividade HemosIL VWF
Limite de detecção:
Sistema
Família ACL TOP
4.4 (% VWF:RCo)
Linearidade
Sistema
Teste regular (% VWF:RCo) Teste de reanálise (% VWF:RCo)
Família ACL TOP
7.0 – 120.0
7.0 – 480.0
O ensaio não mostra um efeito prozona até 1300%.
Se o intervalo linear (reanálise) for excedido, as amostras devem ser diluídas
manualmente de 1:10 com o Diluente incluído no kit (40 µL de amostra + 360 µL de
Diluente) e reanalisados. O resultado tem de ser multiplicado por 10 para corrigir a
diluição.
T3800-4110 R2 12/2014
VWF Ristocetin Cofactor Activity0020300900
Printed Insert Sheet: 3800-4110
Revision: R2
Issued: December 2014
C.O.:450726
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ENGLISH DEUTSCH ESPAÑOL
FRANÇAIS
ITALIAN
PORTUGUESE
TECHNICAL SPEC'S
PAPER: White paper, 50-60 g/m2 weight.
SIZE: 594 x 420 mm (DIN A2).
PRINT:Front/Back.
PRINT COLOR: Front - Top Band Green Pantone 382, all remaining type in black.
Back - All type in black.
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
T3800-4110 R2 12/2014