Estudios de polinizacin controlada en mango
Transcripción
Estudios de polinizacin controlada en mango
MEMORIA Titulo del Proyecto: MEJORA DE LA PRODUCTIVIDAD DE FRUTALES TROPICALES COMPLEMENTARIOS A LA PLATANERA EN CANARIAS. Proyecto Nº : SC 98 - 107 Centro: Instituto Canario de Investigaciones Agrarias Departamento: Fruticultura Tropical Coordinador del Proyecto: Víctor Galán Saúco 1.- Introducción y objetivos El presente Proyecto se ha planteado como continuación de la línea de trabajo existente en el Departamento sobre evaluación de frutales tropicales complementarios a la platanera, principal cultivo frutal de las Islas Canarias, habiéndose trabajado en este sentido sobre diversas especies (Protocolos proyectos INIA 5928, 5932, 8137 y SC93-044), principalmente aguacate, piña tropical, mango, papaya, chirimoyo, litchi y carambola. El objetivo general del Proyecto era la mejora de la productividad de frutales tropicales, específicamente mango, papaya y litchi, mediante diversas técnicas culturales y mejor conocimiento de su comportamiento en floración y cuajado en condiciones subtropicales. Para mango se pretendía mejorar el conocimiento de la floración y el cuajado de cultivares mono y poliembriónicos, determinar el efecto de la polinización cruzada en la productividad de cultivares comerciales y la caracterización de cultivares mediante descriptores morfoagronómicos y moleculares. Para papaya se pretendía evaluar el comportamiento del cultivar del grupo “Solo” “Baixiño de Sta. Amalia” en invernadero con distintos marcos de plantación. Para litchi se pretendía avanzar en el conocimiento del comportamiento floral y la productividad de distintos cultivares en condiciones subtropicales. 2.- Desarrollo de las actividades y resultados obtenidos 2.1.-Mango: 2.1.1.- Estudio de la Floración y Cuajado De los datos recogidos a lo largo de la duración del proyecto se deduce que la emergencia de las panículas florales en la zona sudeste de Tenerife tiene lugar a lo largo del mes de diciembre, en la primera floración, y entre los meses de febrero y marzo en la segunda. La apertura (o antesis) de la flor, en la primera floración, se inicia en la segunda quincena del mes de enero, dándose la plena floración unos treinta días después, y el final de floración en la primera quincena de marzo. Con respecto a la segunda floración hay que decir que pueden verse las primeras flores en antesis entre los meses de marzo y abril. La plena floración se produce durante los meses de marzo y abril y el final de la floración entre los meses de mayo y junio. No se aprecia una marcada diferencia entre los tres cultivares estudiados (Tommy Atkins, Keitt y Gomera 1), en cuanto a los periodos de floración anteriormente comentados. Número y disposición de flores por panícula: Se ha llevado a cabo el recuento del número de flores perfectas (hermafroditas) y masculinas y su disposición en la panícula, en los tres cultivares. Los datos corresponden a dos años de muestreo, en seis fechas diferentes de segunda floración (la primera floración es usualmente eliminada en Canarias para permitir obtener un mejor cuajado en 2ª floración, como fue demostrado en proyectos anteriores). Durante el periodo de plena floración el porcentaje de flores hermafroditas fue superior al 50 % en la mayoría de las panículas de los tres cultivares, dándose los mayores porcentajes (90 y 96) en el cv T. Atkins. Los menores porcentajes (18.5 y 34) se dieron en el cv. Gomera 1 en panículas de final de floración, aunque en plena floración los porcentajes en este cultivar estuvieron comprendidos entre el 75 y 89%. Referente a la disposición de los tipos de flores (masculinas y hermafroditas) en la panícula, hay que decir que si bien en el informe anterior se indicaba que el número de flores hermafroditas aumentaba a medida que nos acercábamos a la porción apical de la panícula y ramas secundarias, al analizar un mayor número de muestras se ha podido comprobar que, en la mayoría de los casos, además de mantenerse superior el número de flores hermafroditas al de masculinas, dichas flores se distribuyen en la panícula con cierta homogeneidad. Valoración del poder germinativo y viabilidad del grano de polen: Se trató de buscar un medio idóneo de germinación in vitro de polen de mango, que permitiera comparar el poder germinativo del polen entre cultivares. Para ello se probaron varios de los medios citados para esta especie en la bibliografía consultada, así como otros que son efectivos en una gama amplia de tipos de polen. Estos fueron: - Brewbaker and Kwack (1963) al 5%, 10% y 15% de sacarosa - Brewbaker and Kwack (1963); sin ácido bórico, al 10%, 15% y 20% de sacarosa - Golan-Goldhirsh et al., 1991, al 10%, 20% y 30% de sacarosa - Heslop-Harrison and Heslop-Harrison (1988) al 10%, 15% Y 20% de sacarosa - Hoekstra and Bruinsma (1975) - Potts and Marsden-Smedley, 1989 (con distintas concentraciones de H3BO3, más 10%, 20% y 30% de sacarosa). - Shivana et al. (1978), modificado sin agar y sacarosa. al 10% y 20% de - Medios con Agar al 0,5% y 1% más 15 y 25% de sacarosa (Young, 1955); Agar al 5% más 10% y 20% de sacarosa (Singh and Bhagat, 1988). El polen, en algunos casos, fue sometido a rehidratación durante 3 horas antes de colocarlo en el medio. A la vista de que los resultados de las germinaciones en dichos medios de cultivos in vitro no dieron resultados plenamente satisfactorios, se puso a punto la técnica para determinar la viabilidad del polen mediante Diacetato de Fluoresceina (FDA) (Heslop-Harrison et al. 1984). Los resultados mediante esta técnica muestran que el mayor porcentaje de polen viable (61%) se dio tanto en el cultivar T. Atkins como en Gomera 1, siendo el porcentaje en el cultivar Keitt del 49%. Como trabajo complementario se creyó conveniente valorar el tiempo necesario de germinación y crecimiento del tubo polínico a través del tejido conductor hasta el ovario mediante germinaciones en semivivo. Con dicho fin se puso a punto la técnica de microscopía de fluorescencia mediante tinciones con azul de anilina y auramia-0 (Johanses, 1940; Martín, F.W., 1969). Se realizaron polinizaciones manuales cruzadas entre los cultivares T. Atkins y Osteen y entre T. Atkins y Keitt x Gomera 1 (tetraplóide). Se han observado granos de polen germinados en el estigma y tubos polínicos a través del tejido conductor, pero no se pueden adelantar más datos por no disponer que resultados concluyentes, hasta la fecha. 2.1.2.- Estudios de polinización controlada. Los estudios de polinización se realizaron en jaulas con estructura de tubos galvanizados y cubierta de malla antitrips, aislando cada cultivar o cruce de cultivares y usando abejas como polinizadores. Los resultados muestran un descenso de productividad en el caso de la autopolinización de Tommy Atkins comparado con los cruces Tommy Atkins/Keitt y T. Atkins/Van Dyke, cosa que no ocurre con los otros dos cultivares estudiados (Keitt y Van Dyke), lo que hace pensar que puede haber una cierta autoincompatibilidad en este cultivar, como ya se señalaba en trabajos anteriores realizados en este Departamento (Galán Saúco et al, 1997). Así mismo se muestra un aumento del tamaño del fruto en los casos de menor cuajado como era de esperar. Las semillas de los frutos obtenidos se han sembrado y pasado a campo para su evaluación a efectos de selección y mejora, estando protocolizada esta actividad en el Proyecto INIA RTA02-096: Mejora del mango en Canarias (2002-2004). Los resultados obtenidos se muestran en la siguiente tabla: Tratamiento Tommy Atkins / Van Dyke Tommy Atkins Van Dyke Van Dyke / Van Dyke Van Dyke Keitt / Van Dyke Keitt Van Dyke Keitt / Keitt Keitt Keitt / Tommy Atkins Keitt Tommy Atkins Tommy Atkins / Tommy Atkins Tommy Atkins Frutos / Panicula Peso Fruto (gr) Número Frutos 1,00 0,95 448,7 298,0 30 19 0,97 265,8 29 1,20 1,20 657,1 338,6 36 36 1,83 488,6 55 1,13 1,20 815,2 545,3 36 34 0,27 780,5 8 2.1.3.-Caracterización de cultivares Se han caracterizado morfológicamente 25 cultivares utilizando los descriptores FAO-IBPGR y UPOV, tanto para caracteres de fruta, hoja, flores y estructura general del árbol (UPOV, 1987; FAO-IBPGR, 1989). Se han probado varios sistemas isoenzimáticos(SKDH, PGM, 6PGD, BGal 4.5, Muest, ACP, AAT, LAP), encontrándose polimorfísmos en varios de estos sistemas. También se han caracterizado13 cultivares a base de marcadores moleculares tipo RAPD, partiendo de 64 cebadores y seleccionando 12 de ellos que amplificaban mejor y presentaban un mayor número de polimorfismos Denominación Secuencia (5´a 3´) OPH-01* OPH-06* OPH-07* OPC-06* OPC-08* OPC-14* CS-12 CS-24 OPF-06* OPF-16* OPF-20* OPA-20* ggTCggAgAA ACgCATCgCA CTgCATCgTg gAACggACTC TggACCggTg TgCgTgCTTg gCgACgCCTA gCggCATTgT gggAATTCgg ggAgTACTgg ggTCTAgAgg gTTgCgATCC Tommy Atkins Osteen Van Dyke Manzanillo Núñez Kent Zill Otts Haden Gomera-1 Keitt Lippens Sensation Torbet 0.44 0.56 0.68 0.80 0.92 Coeficiente Figura 1.- Representación gráfica del análisis de cluster de 13 cultivares de mango usando 12 iniciadores 2.3.- Papaya. Las plantas entraron en producción rápidamente (9 meses después de la plantación), lo que pone de manifiesto su buena adaptación al medio, (Fig. 2). Las plantas hermafroditas y femeninas en el marco de plantación más amplio (T2) (2,5 x 2,5 m), producen más kilos por planta que el resto. Hay que destacar que en el segundo ciclo, las plantas femeninas producen mayor número de kilos por planta que las hermafroditas. (Figs. 3 y 4). Sin embargo, en el marco de plantación (T1) (2,5 x 1,5 m) de mayor densidad (2.666pl/ha), produce mayor rendimiento por hectárea que en los otros tratamientos tanto en el caso de las plantas hermafroditas como en las femeninas (Tablas 1 y 2). Se puede observar también en las mismas tablas, que el menor porcentaje de fruta no comercial (carpeloide y deforme por aplastamiento) dentro de las hermafroditas corresponde igualmente al marco de plantación más denso (2,5 x 1,5 m). Como se muestra en las figuras 5 y 6, las plantas hermafroditas producen menor número de frutos por planta que el resto de los tratamientos en el segundo ciclo y con el marco de plantación más pequeño (2,5 x 1,5 m), no ocurriendo así en el primer ciclo, existiendo diferencias significativas entre las plantas del marco más denso y el resto, sólo en el segundo ciclo. El peso de los frutos hermafroditas y femeninos de las plantas pertenecientes al marco de plantación menos denso (2,5 x 2,5 m) es mayor (Figs. 7 y 8), no existiendo diferencias significativas entre ciclos. Además destacar que los frutos hermafroditas pesan siempre más que los frutos femeninos, presentando en su mayoría menor tamaño y también menor relación longitud/anchura. El número de frutos deformes de las plantas hermafroditas en los dos ciclos y para cualquiera de los tratamientos es insignificante (< 6 frutos/planta) (Fig. 9). Sin embargo, cuando se trata de las plantas femeninas el número se incrementa notablemente sobre todo en el segundo ciclo (Fig. 10). De la figura 11 se deduce que, en el caso de la densidad mayor (2.666pl/ha), marco de plantación 2,5 x 1,5 m, las plantas hermafroditas tienen menor número de frutos carpeloides que el resto de los tratamientos, tanto en el primer ciclo como en el segundo, existiendo diferencias significativas de este tratamiento con el resto de ellos. Ello no sucede en las plantas femeninas, lo que es lógico ya que no presentan el fenómeno de la carpeloidía, como consecuencia de que sus flores son estables respecto a las condiciones ambientales (Storey, 1958) . JL 96 plantación AB 97 inic. recolección 1er ciclo 9 meses + 13 meses Figura 1.Ciclos de producción AB 98 MA 98 2º ciclo 12 meses AB 99 b 60 a 80 a b b b c c 40 KILOS KILOS 80 20 cb b 60 a a b b b b T3 T4 40 20 0 0 T1 T2 T3 T1 T4 T2 TRATAMIENTOS TRATAMIENTOS 1er CICLO 2º CICLO 1er CICLO 2º CICLO Figura 3.- Producción de frutos hermafroditas por Figura 4.- Producción de frutos femeninos por planplanta y tratamiento en el 1º y 2º ciclo. ta y tratamiento en el 1º y 2º ciclo. T1: 2,5 x 1,5 m; T2: 2,5 x 2,5 m; T3: 2,0 x 2,0 x 3,0 m ; T4: 3,0 x 1,5 m a b 150 ab b b a b c 100 50 a 300 NÚMERO DE FRUTOS NÚMERO DE FRUTOS 200 a a b a a b b T3 T4 200 100 0 0 T1 T2 T3 T1 T4 T2 TRATAMIENTOS TRATAMIENTOS 1er CICLO 2ºCICLO 1er CICLO 2º CICLO 500 400 300 ab b a a a bc b a 300 PESO (g) PESO (g) Figura 5.- Número de frutos hermafroditas por plan- Figura 6.- Número de frutos femeninos por planta ta y tratamiento en el 1º y 2º ciclo. y tratamiento en el 1º y 2º ciclo. 200 100 0 ab b a a b b c b 200 100 0 T1 T2 T3 T4 TRATAMIENTOS 1er CICLO 2º CICLO Figura 7.- Peso medio de los frutos hermafroditas por planta y tratamiento en el 1º y 2º ciclo. T1 T2 T3 T4 TRATAMIENTOS 1er CICLO 2º CICLO Figura 8.- Peso medio de los frutos femeninos por planta y tratamiento en el 1º y 2º ciclo. a 150 a a a a a a NÚMERO DE FRUTOS NÚMERO DE FRUTOS 5 4 3 2 1 0 a a a a a 100 50 ab a T1 T2 b b T3 T4 0 T1 T2 T3 T4 TRATAMIENTOS TRATAMIENTOS 1er CICLO 1er CICLO 2º CICLO 2ºCICLO NÚMERO DE FRUTOS Figura 9.- Frutos hermafroditas aplastados por plan- Figura 10.- Número de frutos femeninos aplastados ta y tratamiento en el 1º y 2º ciclo. por planta y tratamiento en el 1º y 2º ciclo. 60 50 40 30 20 10 0 ab c a a b ab b c T1 T2 T3 T4 TRATAMIENTOS 1er CICLO 2º CICLO Figura 11.- Número de frutos hermafroditas carpeloides por planta y tratamiento en el 1º y 2º ciclo. Tabla 1. Rendimientos (kg/ha) de las plantas hermafroditas en dos ciclos productivos Densidades 2.666/pl/ha 1.600/pl/ha 2.000/pl/ha 2.222/pl/ha kg totales 293.822 220.160 233.600 235.320 kg comerciales 244.768 164.160 164.600 173.104 kg no comerciales 17% 25% 30% 26% Tabla 2. Rendimientos (kg/ha) de las plantas femeninas en dos ciclos productivos Densidades 2.666/pl/ha 1.600/pl/ha 2.000/pl/ha 2.222/pl/ha kg totales 266.600 211.520 209.000 197.758 kg comerciales 182.222 134.926 168.000 142.430 kg no comerciales 32% 36% 19% 28% Tanto los frutos hermafroditas entre sí como los femeninos entre sí presentan características descriptivas muy semejantes (Tablas 3 y 4), destacando los mayores porcentajes de sólidos solubles totales (T.S.S.) en los frutos hermafroditas, de forma contraria a lo que ocurre normalmente y dentro de los límites requeridos en el mercado de exportación 11,5 % ºBrix Tabla 3. Características descriptivas de los frutos hermafroditas T.S.S. Tratamientos Longitud Anchura Long./Anch. Grosor (cm) (cm) pulpa (cm) º Brix (cm) T1 (2,5x1,5m) 13,63 8,20 1,66 1,90 11,30 T2 (2,5x2,5m) 14,14 8,40 1,68 2,00 11,67 T3 (2x2x3m) 13,89 8,25 1,68 1,92 11,16 T4 (3x1,5m) 14,82 8,07 1,84 1,89 11,45 Vol./Cav (cc) 84,13 83,75 84,31 79,54 Tabla 4. Características descriptivas de los frutos femeninos Tratamientos Longitud Anchura Long./Anch. Grosor (cm) (cm) (cm) pulpa (cm) T1 (2,5x1,5m) 9,98 7,32 1,36 1,53 T2 (2,5x2,5m) 10,35 7,55 1,37 1,61 T3 (2x2x3m) 10,30 7,50 1,37 1,70 T4 (3x1,5m) 9,82 7,00 1 1,48,40 Vol./Cav (cc) 55,00 55,91 53,00 49,66 T.S.S. º Brix 10,57 11,55 10,95 10,90 Finalmente y a la vista de los resultados, podemos concluir que el mayor rendimiento y menor porcentaje de fruta no comercial para plantas hermafroditas se produce en el caso de la mayor densidad (2.666 pl/ha). Debe destacarse que las plantas femeninas producen en general frutos con poco peso (< 300 gr) mal polinizados y deformados en cualquiera de los tratamientos y principalmente en el segundo ciclo, por lo tanto, es aconsejable no cultivar este tipo de plantas, eliminándolas en el momento de la apertura de la primera flor. En cuanto a la calidad de los frutos expresada en TSS, ésta se mantiene en todos los tratamientos en torno a los límites requeridos en el mercado de exportación para los frutos hermafroditas, sin embargo, los frutos femeninos tienen ligeramente menor contenido en TSS, lo que está de acuerdo con lo observado en Hawaii para cultivares del grupo Solo (Nakasone and Paull, 1998). 2.4.- Estudio de comportamiento floral y productividad en litchi. Se han estudiado 19 cultivares, obteniendo resultados muy prometedores en cuanto a precocidad y productividad, existiendo cultivares (Early Large Red y Yu Her Pan) que han entrado en producción al segundo año de plantación, habiendose obtenido al cuarto año de plantación producciones de más de 30 kg por árbol (Lenz y Calcuttia Late) y producciónes entre 60 y 80 Kg/planta obtenidas por árboles de algunos cultivares (Calcuttia, Calcuttia Late, Early Large Red, Sum Yee Hong y Yu Her Pan) en el 5º año de plantación. Todos los cultivares florecieron entre principios de febrero y mitad de abril, con un periodo de plena floración de menos de un mes. Todos los cultivares se cosecharon entre mitad de julio y final de agosto, no existiendo excesivas diferencias entre ellos. El desarrollo vegetativo de todos los cultivares fue bueno excepto para el cv. Wai Chee, que presento un vigor sensiblemente inferior a los demás. En cuanto a las características de fruto, todos los cultivares superaron en tamaño los mínimos requeridos para exportación en la mayoría de los países (Galán Saúco, 1989, Menzel and Simpson, 1986), 10 de ellos mostraron un porcentaje de pulpa superior al 70%, estando el contenido de sólidos solubles para todos ellos entre el 17 y 21 %. Los resultados obtenidos se muestran en las siguientes tablas y gráficos. Características del fruto (medias) CULTIVARES Peso Fruto (g) Longitud Fruto (mm) Anchura Fruto (mm) Peso Semilla (g) 72-0-6 17.96 33.2 30.0 1.61 Peso Piel Peso Arilo % Fruto (g) (g) Comestible 3.09 13.26 73.9 TSS (ºBrix) 18.22 Brewster 18.61 33.7 30.0 3.80 4.20 10.60 56.8 18.31 Calcuttia 21.45 37.8 32.9 3.08 5.41 12.96 60.7 20.79 Calcuttia Late 24.67 40.6 34.4 3.11 4.46 17.05 70.1 19.98 Early Large Red 20.87 37.7 34.9 2.78 2.89 15.20 72.8 17.33 Fay Zee Siu 27.05 40.3 37.6 0.85 4.88 21.32 78.6 20.03 Gee Kee 16.58 35.2 31.7 2.72 3.59 10.27 61.7 18.91 Haak ip 1 19.67 34.2 31.9 2.40 4.14 13.12 66.8 16.83 Haak ip 2 21.89 34.8 32.2 2.37 4.31 15.22 69.5 17.94 Kway Mi 25.72 34.1 32.6 2.64 3.66 19.41 75.5 17.86 Kway mi pink 20.75 36.4 32.2 3.26 4.17 13.32 61.4 17.91 Lenz 19.08 36.7 31.7 3.59 4.13 11.35 59.5 18.07 No Mi Tze 2 18.82 33.5 30.0 1.96 3.48 13.39 70.8 19.84 Pat Po Hund 21.36 36.9 34.6 1.45 5.44 14.48 67.9 19.34 Sum Yee Hong 30.88 39.1 37.6 0.70 6.04 24.14 78.0 19.45 18.08 Tai So 27.90 39.0 35.3 2.92 4.02 20.97 74.9 Wai Chee 16.82 33.6 30.9 1.42 3.51 11.89 70.8 20.20 Yu Her Pan 27.85 40.5 37.3 1.39 4.35 22.11 79.1 19.61 17/03 02/03 16/02 01/02 Lenz Kw ay Mi Pink Kw ay Mi Haak Ip 2 Haak Ip 1 Gee Kee Fay Zee Siu Early Large Red Calcuttia Late Calcuttia Brew ster 72-0-6 Yu her pan Wai chee Tai so Sum yee hong Pat po hund Yu Her Pan Wai Chee Tai So Sum Yee Hong Pat Po Hund 01/04 No mai tze 2 Plena floración) No Mi Tze 2 16/04 Lenz Kw ay mi pink Kw ay mi Haak ip 2 Haak ip 1 Gee kee Fay zee siu Early large red Periodo de Floración (• Calcuttia late Calcuttia Brew ster 72 - 0 - 6 Fecha fecha Yu Her Pan Wai Chee Tai So Sum Yee Hong Pat Po Hund No Mai Tze 2 No Mai Tze 1 Lenz Kway Mi Pink Kway Mi Haak Ip 2 Haak Ip 1 Gee Kee Fay Zee Siu Early Large Red Calcuttia Late Calcuttia Brewster 72 - 0 - 6 Kg/planta Producción 120 100 80 60 40 2000 1999 1998 1997 20 0 Periodo de Cosecha 30/08 15/08 31/07 16/07 01/07 3.- Aplicación al sector y posible difusión de resultados La información obtenida en el presente Proyecto es de aplicación inmediata en campo en el caso de recomendaciones de marcos de plantación en Papaya y de cultivo y variedades más idóneas para las condiciones de Canarias en el caso del litchi (continuándose la evaluación de cultivares en el Proyecto INIA RTA02-097: Diversificación de la fruticultura tropical leñosa en Canarias. 20022004), y en el caso del mango como base para trabajos de selección y mejora (Estos resultados han servido de base para el Proyecto INIA RTA02-096: Mejora del mango en Canarias. 2002-2004) y para un mayor conocimiento del comportamiento de la especie. 4.- Referencias Bibliograficas. Brewbaker, J.L. and B.H. Kwack, 1963: The essential role of calcium ion in pollen germination and pollen tube growth. Amer. J. Bot. 50(9): 859-865. [FAO-IBPGR] International Board for Plant Genetics Resources. Food and Agriculture Organisation of the United Nations. 1989. Descriptors for Mango. Rome. FAO-IBPGR, 22pp. Galán Saúco, 1989. Litchi cultivation. FAO Plant Production and Protection Paper. Rome. 136 pp. Galán Saúco, V., Fernández Galván, D., Hernández Conde, J.C. and A. Morales Navarro. 1987. Preliminary studies on frit-set of mango cultivar Tommy Atkins under greenhouse cultivation in the Canary Islands. Acta Horticulturae, 455-1: 530-537. Golan-Goldhirsh, A., U. Schmidhalter, M. Müller y J.J. Oertli, 1991. Germinatgion of Pistacia vera L. Pollen in liquid medium. Sex. Plant Reprod. 4:182-187. Heslop-Harrison, J., Y. Heslop-Harrison and K.R. Shivanna. 1984. The evaluation of pollen Quality, and a further appraisal of the fluorochromatic (FCR) test procedure. Theor. Appl. Genet. Vol. 67: 367-375. Heslop-Harrison, J. and Y. Heslop-Harrison, 1988. Some permeability properties of angiosperm pollen grains, pollen tubes and generative cells. Sex Plant Reprod, 1: 65-73. Hoekstra, F.A. and J. Bruinsma, 1975. Viability of Compositae Pollen: Germination in vitro and Influences of Climatic Conditions during Dehiscece. Z. Pflanzenphysiol. Bd. 76. S.:36-43. Johansen, D.A., 1940. Plant microtechnique, 523 pp. McGraw-Hill, New York. Martín, F.W., 1969. Staining and observing pollen tubes in the style by means of fluorescence. Stain Technol. 34: 125-128. Menzel, C.M. and D.R.Simpson. 1986. Lychee cultivars. Description and performance of major lychee cultivars in subtropical Queensland. Queensland Agricultural Journal, May-June 1986: 125-135. Nakasone, H.Y. and R.E. Paull. 1998. Papaya, in: Tropical Fruits. Ed. CAB International. New York: 239-269. Potts, B.M. and .J. B. Marsden-Smedley. 1989. In vitro Germination of Eucalyptus Pollen: Response to Variation in Boric Acid and Sucrose. Austr. J. Bot., 37: 429-441. Singh, S. And B.K. Bhagat, 1988. Comparative studies on the floral biology of early and late cultivars of mango. Acta Horticulturae, 231: 152-154. Shivanna, K.R., Heslop-Harrison, Y. And Heslop-Harrison, J.S., 1978. Inhibition of the pollen tube in the self-incompatibility response of grasses. Newslett. 10, 5-7. [UPOV] Union Internationale pour la Protection des Obtentions Vegetales. 1987. Principes directeurs pour la conduite de l’examen des caracteres distintifs, de l’homogeneite et de la stabilite. Manguier. TG/112/3. Geneve. Young, T.W., 1955. Influence of temperature on growth of mango pollen. Proc. Flo. State Hort. Soc., nº 68: 308-313.