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RIA Distribución Gratuita HH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH HH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH H VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VH HH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH H VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VH HH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH H VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VH HH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH H VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH V VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH VHH 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Entrevista exclusiva con Raquel Chan PEQUEÑOS MILAGROS Nanoanticuerpos de llama contra rotavirus humano y animal ISSN edición impresa 0325-8718 ISSN en línea 1669-2314 Institución Editora: Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) Cuatrimestral Vol. 38 / N.º 3 / Diciembre 2012, Buenos Aires, Argentina Propiedad Intelectual nº 4980255 MIEMBROS DEL CONSEJO DIRECTIVO DEL INTA COMITE EDITORIAL Presidente: Dr. Carlos Di Bella - INTA Ing. Agr. Carlos Casamiquela Ing. Agr. M.Sc. Jorge Mariotti - INTA Vicepresidente: Ing. Agr. Francisco Anglesio Consejeros Nacionales: Méd. Vet. Daniel Gustavo Garello - MAGyP Dr. Rafael Fernández - UNCuyo Dr. Emilio Satorre - UBA Dr. Carlos Scoppa - ANAV Dr. Roberto J. Fernández Aldúncin - UBA Ing. Agr. Oscar Arellano - Facultades de Agronomía Dr. Eduardo Eliseo Baroni - Facultades de Cs. Veterinarias Ing. Agr. Horacio A. Alippe - AACREA. COMITE ASESOR Ing. Agr. Elbio Néstor Laucirica - CONINAGRO Ing. Agr. M.Sc. María Eugenia Beget - INTA D. Alejandro Lahitte - CRA Med. Vet. M.Sc. Ana María Canal - UNL Dr. Aldo Paredes - FAA Dra Luciana Couso - UBA Sr. Bruno Quintana - SRA Dra. Sandra García Lampasona - INTA SEDE EDITORIAL Chile 460 2.º piso Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina CP (C1098AAJ) +54 (011) 4339-0600 http://ria.inta.gov.ar [email protected] Dr. Eduardo Baroni - UNL Director Nacional: Ing. Agr. Eliseo Monti Dra. Betina Kruk - UBA Ing. Agr. M.Sc. Alejandro Rago - INTA Dr. Miguel Ángel Taboada - INTA Directores Nacionales Asistentes: DNA Sistemas de Información, Comunicación y Calidad Lic. Gabriel Delgado STAFF La Revista de Investigaciones Agropecuarias (RIA) es una publicación de información científica editada por el INTA. Los artículos presentados son admitidos por un Comité Editorial compuesto por prestigiosas figuras del ámbito académico y científico agropecuario. Abarca diferentes temas preparados por profesionales del INTA y de otras instituciones, y está destinada a la comunidad científica nacional e internacional. Reservados todos los derechos. Prohibida su reproducción sin autorización expresa de sus editores, en cuyo caso se agradecerá citar la fuente. Lo expresado por autores, corresponsales o columnistas no necesariamente reflejan el pensamiento del Comité Editorial, de la revista o de su institución editora. DNA de Relaciones Institucionales Dra. Ana Cipolla Dirección: DNA Planificación, Seguimiento y Evaluación Dra. Susana Mirassou Coordinación editorial: Dra. Norma Pensel Lic. Máximo Bontempo Lic. Felicitas Terreno DNA Organización y RR.HH. Ing. Agr. Guillermo Semproníi DNA Administración CPN Lic. Rosendo Tarsetti Coordinadores Nacionales: CN de Transferencia y Extensión Ing. Agr. Julio Catullo CN de Investigación y Desarrollo Dra. Norma Pensel CN de Vinculación Tecnológica Ing. Adolfo Luis Cerioni Asistente editorial: Giselle Miquet Florencia Castilla Producción Editorial: Asesores técnicos y de contenido Dr. Ricardo Sager Ing. Agr. Cristian Zuchini Diseño y Edición: Área Comunicación Visual, Gerencia de Comunicación e Imagen Institucional Fotografía: Área Audiovisual, Gerencia de Comunicación e Imagen Institucional Indexada en Latindex (Folio 3346) CABI Publishing DOAJ (Directory of Open Access Journals) Dialnet Sidalc Esta publicación es propiedad del Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria Rivadavia 1439. CABA, Buenos Aires, Argentina. Impreso en Gráfica Latina Av. de los Constituyentes 3423 Ciudad de Buenos Aires (1427) 54 (11) 4522 7888 - 4521 8082 54 (11) 4521 4988 - 4523 6566 [email protected] www.graficalatina.com.ar Editorial El G20 propone una agenda para la Investigación y el Desarrollo Agrícola En mayo de 2012 los Viceministros de Agricultura del G20, reunidos en la ciudad de Los Cabos (México), acordaron una serie de recomendaciones para avanzar en el incremento sostenible de la productividad agropecuaria, para lo cual identificaron a la Investigación y Desarrollo como factor clave y asumieron el compromiso de coordinar las agendas de investigación y desarrollo de sus países miembros. Como propuesta de los mandatarios, se llevó a cabo la reunión conocida como G20 MACS (Meeting of Agricultural Chief Scientist), en septiembre en la ciudad de Guadalajara, México. De este encuentro participaron la gran mayoría de los países miembros y organizaciones internacionales de diferente rango como la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura (FAO), la Unión Europea (UE), el Banco Mundial, el Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura (IICA), el Centro Internacional de Mejoramiento de Maíz y Trigo (CIMMYT), el Grupo Consultor sobre Investigación Internacional para la Agricultura (CGIAR), el Foro Global de Investigación Agropecuaria (GFAR) y el Foro Global para los Servicios de Asesoría Rural (GFRAS). Para dar inicio a las jornadas, se presentó el documento conceptual del G20 MACS 2012 con un dato preocupante que marcará los objetivos a mediano y largo plazo de los diferentes Estados: para el año 2050 se espera que la población mundial ascienda a 9.300 millones de habitantes principalmente en los países en desarrollo, identificados con el nivel más alto de inseguridad alimentaria. Para ello, se advierte que el mayor desafío que afronta hoy la comunidad internacional es lograr incrementar la productividad para alcanzar la seguridad alimentaria de los países más pobres para lo cual será necesario y urgente explorar nuevas formas de cooperación y adaptación de las políticas públicas en el sector agropecuario. Con estas medidas se espera un incremento de la producción de alimentos entre el 50 y el 70 % para el año 2050, y más específicamente de casi un 100% en los países en desarrollo. En este sentido, el Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) designado por el Ministerio de Agricultura Ganadería y Pesca (MAGyP) y la Cancillería para representar a la Argentina, tuvo activa participación, contribuyendo con el objetivo de la reunión que buscó establecer nuevas alianzas de colaboración en investigación para la agricultura, seguridad alimentaria y nutrición, con el desarrollo de Plataformas Globales de Colaboración en Investigación. Sobre todo, en lo referido a la difusión de modelos exitosos dentro del sector agrícola mediante el intercambio de información, técnicas y tecnologías para la producción. Durante el trascurso de las jornadas hubo discusiones de elevado nivel y se llegaron a definir metas y prioridades pero sin perder de vista algunos aspectos como por ejemplo: el G20 representa sólo a una parte de la comunidad internacional (por América Latina participan México, Brasil y la Argentina) y por esa razón debería lograrse una articulación regional de las acciones de Investigación y Desarrollo agrícola con los países no miembros para poder alcanzar una mayor representatividad. A su vez, la situación respecto de la seguridad alimentaria, y aún de la soberanía alimentaria, es muy heterogénea a nivel global. En nuestra región, conviven países con gran potencialidad para producir alimentos, abastecer su mercado interno y exportar con otros que tienen serios problemas de superpoblación, escasez y degradación de recursos naturales. Asimismo cabe preguntarse: Los países desarrollados… ¿no afrontan problemas de seguridad alimentaria?. En este sentido, cobra relevancia el hecho de que en esos ámbitos surgen oportunidades para la cooperación nortesur, sur-sur y triangular en Investigación y Desarrollo agrícola. Por lo tanto, se aprecia que el fortalecimiento institucional y la construcción de capacidades locales es prioritaria para todos los países y sobre todo para los menos desarrollados. Como expresó el representante de la Federación Rusa, la seguridad alimentaria es un problema que excede a las acciones de Investigación y Desarrollo y se sitúa en las estrategias de desarrollo de los países, las regiones y la comunidad internacional, sin desconocer la importancia de la generación y transferencia de conocimientos como instrumento para alcanzarla. No obstante, es destacable la iniciativa de los líderes del G20 de reunir a los responsables de Ciencia y Técnica Agropecuaria de sus países miembros, teniendo en cuenta que el desarrollo sustentable requiere de decisiones políticas claras y concretas. Es necesario pensar en el largo plazo en términos de Investigación y Desarrollo, pero también en el corto y mediano. El acceso de los productores, sobre todo los pequeños y medianos, a la tecnología disponible, el uso adecuado del agua para incrementar la producción, y la disminución de las pérdidas de cosecha y poscosecha son parte insoslayable de una agenda inmediata. El desafío para el próximo G20 MACS, que se reunirá en Rusia en el 2013 será incorporar estos temas en la agenda global y plasmar en acciones concretas, con resultados tangibles en términos de seguridad alimentaria, los enunciados que por el momento se visualizan en la superestructura. Contenido Actualidad en I+D RIA / Vol. 38 N.º3 Diciembre 2012, Argentina. Trabajos Editorial 206 Agenda para la Investigación y el Desarrollo Revisión 236 Monitoreo de coagulación de la leche Sbodio, O.A.; Revelli, G.R. El G20 propone la investigación como clave para incrementar la productividad agropecuaria. Artículos Notas 210 247 Llamas contra rotavirus humano Nanoanticuerpos de camélidos anti rotavirus registran el 100 por ciento de efectividad contra el VP6, la proteína más importante del virus. Nutrientes en hojas de arándanos Rivadeneira, M. F. 251 Biomasa y nutrientes en cebadilla chaqueña Bustamante, E.G.R.; Ruiz, M.A.; Morici, E.; Babinec, F.J.; Pordomingo, A.B. 257 Aplicación foliar de calcio en melón Bouzo, C.A.; Cortez, S.B. 218 La verdadera riqueza de las zonas secas La biodiversidad de esas regiones es fundamental para amortiguar los efectos del cambio climático. 263 Tratamientos antioxidantes para manzana Denoya, G. I.; Ardanaz, M.; Sancho, A. M.; Benítez, C. E.; González, C.; Guidi, S. 268 Ensayo de procedencias de Pino Ponderosa Schinelli, T.; Basil, G.; Tejera, L.; Honorato, M.; Gallo, L.A.; Mondino, V.; Martinez-Meier, A.G.; Pastorino, M.J. 276 Efecto del manejo de suelo en duraznero Gonzalez, J.; Fernández, J. R.; Santanatoglia, O. J.; Del Pardo, C. 282 Degradación de clorpirifós en cítricos Kulczycki, C.; Navarro, R.; Turaglio E.; Becerra, V.; Sosa, A. 225 Equidad de género, una consigna rural El reconocimiento, la participación y el igual acceso a los recursos productivos para varones y mujeres que trabajan en el ámbito rural son clave para el desarrollo humano y agroalimentario. 231 Retos para el futuro de los alimentos Raquel Chan asegura que hay desafíos para la provisión de alimentos y energía, que serían posibles de afrontar debido al desarrollo en investigación agropecuaria que hay en el país. 235 Pastillas Un breve resumen de las noticias más sobresalientes. 289 Necesidad de frio y calor en duraznero Chaar, J.; Astorga, D. Temas Vacas y llamas anti rotavirus Investigadores argentinos descubrieron una metodología alternativa para combatir el rotavirus (RV) tanto humano como animal. A través de anticuerpos de llama neutralizaron la proteína más importante del virus que representa más de la mitad de su masa y es común a todas las variantes del grupo A de RV. Ahora, en conjunto con empresas privadas, el INTA busca desarrollar una vaca transgénica que exprese esos anticuerpos en su leche. Así, este alimento funcional podría llegar a los infantes de una manera simple y económica. Si bien tomará años de investigación, el potencial de este desarrollo tendría implicancias mundiales. (Actualidad en I+D p. 210) Riqueza natural La biodiversidad de las zonas más secas del planeta es crucial para amortiguar los efectos del cambio climático, según una investigación realizada por 50 científicos pertenecientes a 16 países. Según sostienen, la cantidad de plantas está “directamente relacionada” con el funcionamiento del ecosistema y éste, a su vez, con la temperatura media anual en las zonas secas. Estas regiones del mundo ocupan el 41 por ciento de la superficie terrestre y mantienen a más del 38 por ciento de la población. Son centros de diversidad vegetal muy importantes pero al mismo tiempo son muy vulnerables a los procesos de desertificación. (Actualidad en I+D p. 218) Monitoreo de coagulación de la leche Desde hace décadas los científicos utilizan diferentes técnicas para llegar al monitoreo online de la coagulación enzimática de la leche, una etapa fundamental en la elaboración de queso. Actualmente, investigadores de la Universidad Nacional del Litoral y el Conicet lograron desarrollar un sensor que cumple con las reglas para su utilización en tina industrial que tiene la fortaleza suficiente, no es destructivo, no interfiere con el proceso de corte o agitación y cumple con los requerimientos sanitarios. Se trata de una herramienta que superó las pruebas de laboratorio y en planta piloto, de funcionamiento simple y bajo costo. (Trabajos p. 236) Género y medio rural Las mujeres representan a escala mundial el 43 por ciento de la fuerza laboral agrícola en los países en desarrollo y un 20 por ciento en América Latina y el Caribe. Para el representante de la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO), Alejandro Flores Nava, existe un acceso desigual de las mujeres a los múltiples recursos asociados a la producción agrícola. A su vez, distintos actores reconocen la importancia de políticas de equidad de género que determinen líneas de acción hacia el interior de las instituciones y que estén presentes en el trabajo de extensión, en la elaboración y ejecución de planes de desarrollo para trabajar en el medio rural. (Actualidad en I+D p.225) Cultivos prometedores Para la investigadora y directora del Conicet Santa Fe, Raquel Chan, en el mundo existe una demanda de alimentos y de energía que podría ser atendida si fuera posible generar más alimentos en la misma superficie de tierra. Para eso, los equipos de investigación agropecuaria que existen en el país, trabajan en desarrollos en materia de cultivos mejorados para adaptarse a condiciones ambientales adversas y en biorremediación, para desarrollar plantas capaces de absorber los desechos tóxicos. Estos avances permitirían brindar posibles respuestas frente al rol que asume la Argentina a escala mundial en la producción de alimentos y seguridad alimentaria. (Actualidad en I+D p. 231) Nutrientes en hojas de arándanos En la Argentina, el cultivo de arándano tuvo una amplia difusión y Entre Ríos es una de las principales provincias productoras. Con el objetivo de establecer la composición mineral se determinó la concentración de nutrientes en dos edades de hojas en las variedades Misty, Jewel y Emerald. Para ello, se recolectaron hojas expandidas, sin daños ni lesiones desde los 70 a 90 días después de plena floración y se comprobó que no hubo diferencias en la composición de nitrógeno, fósforo, potasio y calcio mientras que la mayor concentración de magnesio se obtuvo en la Misty y la menor en Jewel. (Trabajos p. 247) Biomasa y nutrientes en cebadilla chaqueña La forrajera conocida como cebadilla chaqueña (Bromus auleticus) es considerada una de los más valiosas del Cono Sur. Por esa razón, se buscó evaluar el índice de biomasa acumulada y los indicadores de calidad nutritiva en dos períodos del año (verano-otoño y otoño-primavera) en muestras del forraje de clones argentinos y uruguayos. Para ello se calculó el índice de Fibra Detergente Neutra, Proteína Bruta y Digestibilidad de la Materia Seca y se determinaron diferencias entre los clones de ambos orígenes que sugieren una variación genotípica en los materiales evaluados, a pesar de que los argentinos fueron más similares entre sí. (Trabajos p. 251) Evaluación de procedencias de Pino Ponderosa El Pino Ponderosa es la principal especie forestal implantada en secano en la Patagonia, para lo cual asegurar su provisión de semillas de adecuada calidad genética resulta indispensable. El objetivo del presente trabajo es evaluar los rodales comerciales que sirven habitualmente como fuentes de semillas ensayando su descendencia. Para ello, se examinaron 31 procedencias locales seleccionadas (Áreas Productoras de Semillas) en etapa de vivero, en dos sitios. Mediante el análisis de la varianza, se probó que existe un claro efecto de interacción entre las APS y los sitios y, también, diferencias entre las APS dentro de cada sitio. (Trabajos p. 268) Degradación de clorpirifós en cítricos El insecticida utilizado en cítricos para el control de plagas debe ajustarse a niveles que son cada vez más reducidos y adaptarse a las exigencias estipuladas por los controles fitosanitarios que examinan los residuos en la fruta. Mediante la cinética de disipación se disminuyen los riesgos tanto toxicológicos como comerciales. En este trabajo se estudió el nivel de degradación y persistencia del compuesto en dos variedades de naranjas y tres de mandarinas y se determinó que los residuos presentes están por debajo del límite máximo exigido por la legislación argentina, por la Federación Rusa y la Unión Europea. (Trabajos p. 282) Efectos de la aplicación foliar de calcio en melón La nutrición foliar con fertilizantes cálcicos juega un papel importante en el aumento de los nutrientes en vegetales durante la fructificación. El objetivo de este trabajo fue evaluar este tipo de aplicaciones en diferentes ambientes para determinar los efectos sobre la calidad de frutos de melón, ya que existe evidencia de que el calcio regula el ablandamiento del fruto y es un factor que afecta el potencial de vida de almacenamiento. Los resultados evidenciaron un incremento del nutriente en la cáscara pero no tuvieron igual efecto en la firmeza ni en la concentración de sólidos solubles de la fruta. (Trabajos p. 257) Tratamientos antioxidantes para manzana cortada El pardeamiento enzimático, es un proceso oxidativo que afecta la calidad y limita la vida útil de frutas mínimamente procesadas. Para evitarlo, es común utilizar sulfitos. Sin embargo, este antioxidante dejó de utilizarse porque puede provocar reacciones alérgicas, especialmente en individuos asmáticos. En este trabajo se analizó la evolución de la enzima PPO que produce la reacción y las características cromáticas de la pulpa de rodajas de manzanas cv. Granny Smith, tratadas por inmersión con dos concentraciones de aditivos alternativos. Así, se determinó que los extractos sometidos a los tratamientos más severos presentaron mayor inhibición de la enzima. (Trabajos p. 263) Efecto del manejo de suelo en duraznero Los investigadores se propusieron determinar el efecto que tienen los sistemas de manejo y la textura del suelo sobre el desarrollo del sistema radicular y el diámetro de tronco del duraznero debido a que son evaluadores del crecimiento y la productividad del frutal. Se trabajó con tres sistemas de manejo del suelo: labores mecánicas, sin labranza con control químico de malezas y cobertura vegetal y se determinó que los dos primeros están asociados a un mayor desarrollo del diámetro del tronco y del sistema radicular, mientras que el tratamiento con cobertura vegetal generó un menor desarrollo de raíces. (Trabajos p. 276) Necesidad de frio y calor en duraznero Los árboles frutales de hoja no persistente poseen un período de reposo entre los ciclos vegetativos y, para salir del reposo invernal, las yemas deben acumular frío (endodormancia) y luego calor (ecodormancia). El objetivo de este trabajo fue determinar el requerimiento de frío y de calor en cinco cultivares de duraznero mediante un método de correlación, con datos de fecha de plena floración y temperatura del aire de siete años, en el este de Mendoza. Determinar estas variantes permitirá diseñar prácticas de manejo tendientes a retrasar la floración y, consecuentemente, disminuir el riesgo de daño por heladas tardías. (Trabajos p. 289) 210 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 Desarrollo de Nanoanticuerpos Llamas contra el rotavirus humano Investigadores argentinos descubrieron una novedosa manera de combatir esta enfermedad diarreica que afecta principalmente a niños menores de cinco años. La presencia de anticuerpos VHH en leche de vaca se presenta como una alternativa 100 por ciento efectiva y de bajo costo. Por Felicitas Terreno Llamas contra el rotavirus humano Diciembre 2012, Argentina 211 RV y sus tres capas Los rotavirus del grupo A, son virus no envueltos que están compuestos por tres capas concéntricas de proteínas que engloban al genoma viral. La capa interna es la Proteína Viral (Viral Protein en inglés -VP-) 2, la intermedia es la VP6, y la más externa es la VP7. No obstante, también cuenta con unas especies de puntas que sobresalen que son las VP4 y unos pequeños agujeros llamados “canales”. El desarrollo de anticuerpos suele basarse en las proteínas externas pero éstas suelen variar mucho. Por ejemplo, el rotavirus posee 35 variantes de VP4 y más de 20 de VP7. No obstante, la VP6 prácticamente no cambia entre todas las clases de rotavirus del grupo A, a la vez que representa el 51 por ciento de la masa viral. Por ello es que la mayoría de las estrategias de identificación y lucha contra el RV se basan en atacar a la VP6, aunque los resultados no fueron buenos hasta que los investigadores del INTA desarrollaron los nanoanticuerpos de llama anti VP6 (VHH). Según estiman, debido a que su tamaño es muy pequeño, los VHH estarían ingresando al virus por los “canales” hasta llegar al VP6 para neutralizarlo. “Tengo una vaca lechera, no es una vaca cualquiera…” afirmaba una canción infantil. Sólo que hay una diferencia: esta vaca no va a dar leche merengada, sino que producirá una leche especial con un componente que permite combatir la diarrea por rotavirus en niños. Se trata de los VHH, unas moléculas derivadas de los anticuerpos de los camélidos, que son “las más pequeñas que existen en la naturaleza capaces de reconocer a otra y de neutralizarla”, asegura a la Revista RIA la responsable del Laboratorio de Virus Diarreicos del INTA Castelar, Viviana Parreño. Las enfermedades diarreicas son la segunda causa de muerte de niños menores de cinco años en el mundo. Si bien suelen ser “prevenibles y tratables”, lo cierto es que fallecen cerca de un millón y medio de niños cada año, según afirma la Organización Mundial de la Salud. Las dos causas más comunes de enfermedades diarreicas en países en desarrollo son los Rotavirus (RV) y la Escherichia coli. En la Argentina, el Programa de Vigilancia del Ministerio de Salud informó que el 42 por ciento de las internacio- nes por diarrea en niños menores de tres años se deben al RV, enfermedad que llega a ocasionar deshidratación en el 83 por ciento de los infectados. En el mercado actualmente existen dos vacunas disponibles compuestas por el virus vivo atenuado que son altamente eficaces para la reducción de la diarrea y de la mortalidad. No obstante, la seguridad y eficacia de su administración en pacientes inmunocomprometidos no está comprobada, según advierte el Ministerio de Salud de la Nación. VHH vs Rotavirus La investigadora que forma parte del equipo de Parreño, Lorena Garaicoechea, desarrolló estos nanoanticuerpos VHH durante su tesis doctoral en colaboración con científicos alemanes del Laboratorio Europeo de Biología Molecular (EMBL, por sus siglas en inglés). Los resultados del trabajo indicaron que los VHH pueden neutralizar a la infección por una amplia variedad de variantes (serotipos) de Rotavirus grupo A. Según explica, “estos nanoanticuerpos se unen a la proteína VP6 de Rotavirus, una proteína interna Llamas contra el rotavirus humano del virus que conforma más del 50 por ciento de su masa”. Mientras los estudios realizados hasta este momento se centraban en “atacar” la parte externa del virus, los investigadores del INTA pudieron comprobar que, de alguna manera, estos anticuerpos atacaban “su corazón” (ver recuadro: RV y sus tres capas). La capa superficial del virus, contra la cual se suelen generar las vacunas, cambia constantemente año a año y de especie a especie, tal como el virus de la influenza. Por ejemplo, las cepas de rotavirus grupo A detectadas hasta el momento poseen 35 variantes de las “Si existiera una leche que protegiera contra el rotavirus, ocasionaría un impacto sanitario realmente importante” (Andrés Bercovich). 212 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 Al atacar la parte interna del virus, tal como lograron los investigadores, tanto animales como humanos quedan protegidos contra la diarrea causada por los RV del grupo A. Pero su pequeñez y capacidad de escabullirse no es la única característica extraordinaria de los VHH: en general, cuando las moléculas son expuestas a altas temperaturas o a cambios en el pH, suelen desnaturalizarse (o cambiar su estructura). Pero los VHH no: estas moléculas pueden ingresar en un ambiente muy ácido (como el del estómago) y cuando llegan al intestino, que posee un pH levemente alcalino, se arman nuevamente y mantienen sus propiedades funcionales. Y como si eso fuera poco, también resisten altas temperaturas como las utilizadas durante la pasteurización. “Aún no sabemos cómo funciona ese mecanismo pero especulamos que por los orificios que hay disponibles en el virus el anticuerpo se mete y se engancha a la VP6. Entonces no importa qué diferencia haya en la superficie”, sostienen Garaicoechea y Parreño. “Esto quiere decir que si logramos desarrollar una vaca transgénica que en su leche exprese estos nanoanticuerpos, podríamos pasteurizar esa leche y dársela a un bebé para protegerlo, por ejemplo, contra la diarrea por Rotavirus”, adelantan las investigado- proyecciones que sobresalen en su capa externa, y más de 20 de la superficie de esa capa, por lo que para lograr vacunas efectivas se desarrollan formulaciones multivalentes que inducen anticuerpos contra los serotipos más comunes que afectan a humanos. Estas vacunas recombinantes y atenuadas son muy costosas y no incluyen los serotipos raros que circulan en algunos países de Sudamérica, África y Asia. Los VHH son las moléculas más pequeñas que existen en la naturaleza capaz de reconocer a otra y de neutralizarla. Llamas contra el rotavirus humano Diciembre 2012, Argentina 213 VHH: Plataforma hacia el futuro* Los nanoanticuerpos VHH representan una herramienta muy ventajosa y con características únicas y diferentes al del resto las Igs que los hacen muy atractivos para distintas aplicaciones biotecnológicas. Una característica diferencial muy importante es su capacidad de permanecer estables y resistir a cambios de temperatura y de ambientes químicos. Esto abre un sinfín de aplicaciones que pueden abarcar desde la administración en forma de tópico u oral (dado que resiste al pH drástico del estómago) a la pasteurización (ya que tolera altas temperaturas). Al ser administrados oralmente, poseen la ventaja de ser muy poco inmunogénicos, lo que se convierte en una diferencia muy importante respecto de los anticuerpos convencionales. A su vez, se pueden modificar por ingeniería genética para evitar su rechazo (humanización) y, así, lograr su administración sistémica. El crecimiento exponencial de aplicaciones de los VHH también se debe a que estos anticuerpos de dominio único son más económicos, simples y fáciles de producir. Además, sólo poseen 1/10 del tamaño de un anticuerpo completo. De esta manera, estas moléculas combinan las características únicas de un anticuerpo con las ventajas de las drogas de pequeño tamaño que pueden penetrar tejidos y tumores más rápido que los anticuerpos convencionales. Se estima que los naonanticuerpos son capaces de saturar un tumor a una velocidad 10 veces mayor que una IgG convencional. También se ha demostrado que pueden atravesar la barrera hematoencefálica, lo que los convierte en excelentes candidatos para ser utilizados en terapia medicinal de enfermedades del sistema nervioso central. Su pequeño tamaño también otorga la oportunidad única de ser multimerizados, lo que en ciertos casos aumenta significativamente su actividad biológica y, más aún, les otorga especificidades nunca antes vistas. Finalmente, pueden ser fusionados a drogas (se los utiliza en el direccionamiento de terapia génica y el delivery de drogas oncológicas). También se utilizan en la industria cosmética y en la neutralización de toxinas y venenos de escorpiones y ofidios. Hasta el momento existen ocho nanonaticuerpos en ensayos clínicos que abarcan el tratamiento de enfermedades autoinmunes, cáncer, alteraciones hematológicas y tratamiento de la infección por virus respiratorio sincicial, entre otros. Por Viviana Parreño, Responsable del Laboratorio de Virus Diarreico, INTA Castelar. ras que luego del hallazgo se sumaron a la plataforma técnico-organizativa para el desarrollo de proyectos tecnológicos del INTA (INCUINTA) liderada por Andrés Wigdorovitz. El comienzo de algo histórico Así, dado el elevado potencial de estas pequeñas moléculas, el INTA comenzó a trabajar con BioSidus (una empresa argentina que produce biofármacos y que tiene vasta experiencia en transgénicos) para desarrollar una vaca que exprese los nanoanticuerpos VHH en su leche. Para llevar a cabo este proyecto se constituyó un consorcio en el que participan otras dos empresas del sector lácteo (Establecimiento Lácteo San Marcos y Aproagro SA). El proyecto se presentó a la convocatoria de Alimentos Funcionales del Fondo Argentino Sectorial (FONARSEC) y obtuvo financiación para desarrollar alimentos lácteos funcionales que contengan VHH anti rotavirus en su formulación y, de esa manera, reduzcan el impacto de las diarreas por rotavirus en niños. Llamas contra el rotavirus humano En este sentido, según comentó a la Revista RIA el responsable del departamento de Investigación y Desarrollo de la empresa Biosidus, Andrés Bercovich, “si existiera una leche que tuviera una característica nutricional que protegiera contra el rotavirus, podría ocasionar un impacto sanitario realmente importante”. Para lograr este alimento, la empresa solicitó a la Comisión Nacional Asesora de Biotecnología Agropecuaria (CONABIA) una autorización y, si bien Bercovich entiende que este proyecto tiene un largo camino por recorrer (que esperan finalizar hacia 2018), los investigadores de BioSidus ya comenzaron a hacer un trabajo de ingeniería genética en el laboratorio que conlleva una serie de exámenes de concepto para comprobar si se puede producir la leche con esos VHH. A su vez, desde el INTA se realizaron pruebas en animales que confirmaron la actuación de los anticuerpos VHH contra la diarrea por RV. En este sentido, Celina Vega y Marina Bok, integrantes del equipo de Parreño en Castelar, demostraron que la administración de leche suplementada 214 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 Los VHH, al ser altamente específicos y racionalmente diseñados, se proyectan como una solución para el control de las diarreas neonatales. con los VHH desarrollados previno la diarrea en lechones mantenidos bajo condiciones de esterilidad. Según afirman, “este resultado que logramos con colaboradores norteamericanos, fue muy alentador y representa una prueba de que estas moléculas tiene un elevado potencial de convertirse en un tratamiento preventivo o terapéutico de las diarrea por este agente viral”. Las crías de cerdo no sólo son susceptibles de contraer rotavirus humano, sino que son similares a los bebés en lo que respecta a peso, fisiología del intestino, dieta láctea y desarrollo de la respuesta inmune. Así, el tratamiento preventivo con esta leche indujo un 100 por ciento de protección frente a la diarrea causada por la infección experimental con Rotavirus humano. Además, no interfirió con el desarrollo de la respuesta in- Llamas contra el rotavirus humano Diciembre 2012, Argentina mune específica contra ese virus, por lo que no sólo protegió al cerdo frente a la diarrea, sino que no impidió que el organismo genere anticuerpos propios contra el virus. Así, generó una “memoria inmunológica” en el caso de futuras exposiciones ante el RV. Según los resultados del trabajo, “estos VHH resultan una estrategia de inmunidad pasiva novedosa que podrían, incluso, ser aplicados en niños prematuros o inmunocomprometidos, complementándose con la vacuna. Debido a que son altamente específicos y racionalmente diseñados, se proyectan como una solución versátil y económica para el control de las diarreas neonatales”. Para Bercovich, las vacunas que existen actualmente contra el rotavirus “son bastante caras y a los gobiernos se suele dificultar realizar campañas 215 de vacunación así que nosotros queremos que este desarrollo pueda ser utilizado en esas campañas y que llegue a la gente de bajos recursos que, justamente, son quienes tienen más alta prevalencia de diarrea por este virus”. Aún así, el director de I+D de Biosidus advierte que “el desarrollo de alimentos funcionales como este busca dar una cierta protección contra la enfermedad, lo que no necesariamente significa que vaya a curar la infección o a reemplazar una vacuna”. Una vez lograda la aprobación para comenzar a trabajar en el desarrollo de una vaca transgénica, habrá que seguir una serie de pasos para comprobar que la leche podrá ser consumida por los infantes. Entre la serie de exámenes se encuentran los de seguridad y eficacia tanto en animales como en humanos. Llamas contra el rotavirus humano “Si logramos desarrollar una vaca transgénica que en su leche exprese estos nanoanticuerpos, vamos a poder pasteurizarla y dársela a un bebé” (Viviana Parreño). 216 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 Llamas contra el rotavirus humano Diciembre 2012, Argentina A su vez, también habría que considerar el desarrollo de un rodeo transgénico de unas 200 vacas para que su leche, con gran contenido de anticuerpos, pueda ser diluida con otra común y, así, cubrir las necesidades del mercado. Esto abaratará costos y dará la posibilidad de procesar esa leche como cualquier otra ya que los VHH resisten la pasteurización. Bercovich asegura que se trata de la primera vez que se desarrolla un sistema así, por lo que “podría constituir una ‘plataforma’ de producción de estos nanoanticuerpos, versátil y muy económica. Decimos ‘plataforma’ porque en el caso de que funcione bien contra este virus uno podría hacer una leche que prevenga contra otros agentes patógenos” (ver columna “VHH: Plataformas hacia el futuro”). 217 De hecho, la novedad del desarrollo también encontró algunos escépticos entre la comunidad científica. Según comenta Parreño, “nadie nos creía que el anticuerpo contra esa proteína fuera neutralizante. Para publicar el trabajo nos pidieron hacer ocho experimentos más”, confiesa, “pero nos vino bien porque con cada uno de ellos confirmábamos aún más que lo que logramos era una realidad”. Más información: Viviana Parreño – [email protected] La Dra. Parreño es Bioquímica por la Universidad de Morón y Doctora por la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad de Buenos Aires. Es responsable del Laboratorio de Virus Diarreicos y coordinadora técnica del área de Investigación y Desarrollo de INCUINTA. Llamas contra el rotavirus humano 218 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 Biodiversidad La verdadera riqueza de las zonas secas La verdadera riqueza de las zonas secas Diciembre 2012, Argentina 219 Científicos de 16 países descubrieron que la diversidad de especies vegetales tiene un efecto muy importante sobre los procesos que regulan el funcionamiento de las tierras secas. La verdadera riqueza de las zonas secas 220 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 Hay quien mira, pero no ve. Mira las plantas, los insectos, el suelo y las aves, pero no ve la interacción que hay entre ellos. En la naturaleza existe una comunicación que va más allá de las palabras; es una interacción de vida que genera vida y permanencia a través del tiempo y que, por más que muchos no lo vean, nos salva. especialistas del INTA Bariloche, indican que estudiaron esas complejas relaciones mediante 14 variables relacionadas con el ciclo de elementos esenciales para la vida (carbono, nitrógeno y fósforo, por ejemplo) puesto que son “buenos indicadores” del funcionamiento de los ecosistemas y de los servicios que prestan. Media centena de investigadores de 16 países pudieron ver más allá al observar detenidamente la biodiversidad vegetal y su función en el gran esquema de la Naturaleza. Según descubrieron, esa diversidad es crucial para amortiguar los efectos del cambio climático y la desertificación en las regiones más secas del planeta. En este “primer estudio” a escala mundial en evaluar de forma explícita las relaciones entre funcionalidad del ecosistema y la biodiversidad bajo condiciones áridas y semiáridas, se observó que “el número de especies de plantas está directamente relacionado con el funcionamiento del ecosistema y éste, a su vez, con la temperatura anual en las zonas áridas”, destacan Bran y Gaitán. Los resultados de la investigación, que fue publicada en la revista Science (Vol. 335; n.° 6065), indican que la cantidad de especies de plantas está “directamente relacionada” con el funcionamiento del ecosistema. “La vida en la Tierra se basa en múltiples flujos de materia y energía, canalizados por las interacciones entre innumerables formas de vida”, explican dos de los investigadores argentinos que formaron parte del equipo de trabajo, Donaldo Bran y Juan Gaitán. Los Las zonas áridas, semiáridas y subhúmedas ocupan el 41 por ciento de la superficie terrestre y mantienen a más del 38 por ciento de la población humana. Allí se encuentran el 20 por ciento de los principales centros de diversidad vegetal y más del 30 por ciento de las áreas protegidas para aves. En este sentido, los 50 investigadores advierten sobre la “elevada vulnerabilidad” de estos sistemas ante cambios ambientales y la desertificación. La verdadera riqueza de las zonas secas Según concuerdan, “los modelos de cambio climático predicen un aumento de la temperatura media anual de cuatro grados centígrados en las zonas áridas, semiáridas y subhúmedas para fines del siglo XXI. Nuestros resultados sugieren que ese incremento reduciría la habilidad de los ecosistemas de llevar a cabo múltiples actividades relacionadas con el ciclo del carbono, el nitrógeno y el fósforo”. Además agregan que la riqueza de especies podría disminuir y aumentar las áreas afectadas por la desertificación, hechos que afectarían negativamente la funcionalidad de los ecosistemas. Sin embargo, estas posibilidades son inciertas, ya que la biodiversidad vegetal también podría jugar un rol importante en estos acontecimientos. “Debido a que la cantidad y calidad de los servicios ecosistémicos dependen en gran medida de la funcionalidad de esos ecosistemas, el aumento de las especies vegetales podría mejorar aquellos servicios en las zonas áridas, semiáridas y subhúmedas”, consideran los investigadores. Así, la biodiversidad vegetal en esos particulares ambientes podría ser fundamental para mantener el carbono, el ni- Diciembre 2012, Argentina 221 Clima de Zonas Secas En las regiones áridas, semiáridas y subhúmedas existen diferentes tipos de clima, en relación a las temperaturas medias y a la distribución de las lluvias. Éstas pueden concentrarse en la estación fría (régimen mediterráneo) o en la estación cálida (régimen monzónico) o pueden no tener una estación de lluvia definida y generalmente se observa una importante variabilidad entre años. Las regiones áridas también presentan las mayores fluctuaciones diarias de temperatura, que conlleva a restricciones en el crecimiento de las plantas. Además, mucha del agua disponible para utilización humana se encuentra en grandes ríos que se originan en áreas elevadas. Los recursos subterráneos también pueden estar disponibles para acompañar el desarrollo de las actividades que se llevan a cabo en las regiones. Sin embargo, la relativamente limitada recarga del agua subterránea depende en gran medida de la cantidad, intensidad y duración de la lluvia y también de las propiedades del suelo. Con las prácticas de manejo actuales, gran cantidad de lluvia se pierde por evapotranspiración y escorrentía y, como resultado, el agua subterránea se recarga sólo a nivel local por la filtración a través del perfil del suelo. (Water and Cereal in Drylands, FAO) trógeno y el fósforo a la vez que promovería la resistencia a la desertificación al mantener la fertilidad de los suelos. La Argentina árida Más de la mitad del territorio argentino (51,5 por ciento) se encuentra bajo condiciones áridas, a las que habría que agregar un 27,5 por ciento de tierras que se encuentran en regiones subhúmedas y semiáridas. Para los especialistas de Bariloche, este es el motivo fundamental por el cual es necesario “conservar la biodiversidad de esas tierras y, de esta manera, asegurar el mantenimiento de la funcionalidad de sus ecosistemas”. Debido a que este país se caracteriza por su producción agropecuaria, las tierras que se encuentran a disposición deben ser aprovechadas en forma sus- “Es necesario conservar la biodiversidad de esas tierras y asegurar el mantenimiento de la funcionalidad de sus ecosistemas” (Bran y Gaitán). tentable. Según la Secretaría de Ambiente y Desarrollo Sustentable de la Nación (SAyDS), “las tierras secas producen el 50 por ciento del valor de la producción agrícola y el 47 de la ganadera, y concentran aproximadamente el 30 de la población nacional. Las más importantes actividades productivas se desarrollan en los oasis de riego, que totalizan alrededor de 1,5 millones de hectáreas”. Las tierras secas 222 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 concentran a la totalidad de los caprinos y camélidos del país, el 80 por ciento de los ovinos y el 40 de los bovinos. No obstante, Bran y Gaitán destacan que tanto la Patagonia como otras regiones áridas del país “han sufrido procesos de degradación que se originan por actividades humanas como el sobrepastoreo, que interactúa con eventos climáticos, principalmente sequías”. “Las zonas secas tienen potencial para lograr el crecimiento de las economías nacionales y el desarrollo humano sostenible” (Ban Ki-Moon). Asimismo, el director del Centro de Investigación en Recursos Naturales del INTA, Roberto Casas, advierte que “los ecosistemas producen servicios que resultan imprescindibles para la vida. Por eso, la transferencia de nutrientes, el control de la erosión, la preservación del hábitat y la provisión del agua dulce se ponen en peligro a causa de la intervención del hombre en estos frágiles ambientes”. En esa línea, indica que “cuando se producen estas alteración del hábitat, se afectan las poblaciones de flora y fauna, con su consiguiente reducción o desaparición de especies” y agrega que “la ganadería ovina en la Patagonia es un claro ejemplo de una actividad que produce cambios en la vegetación y en el suelo, y que incrementa los procesos de erosión eólica y desertificación”. En este sentido, los investigadores advierten que “es sumamente difícil cuantificar la pérdida de biodiversidad La verdadera riqueza de las zonas secas que provocan estos procesos”. Para ello, la SAyDS, el INTA y el Programa de las Naciones Unidas para el Desarrollo (PNUD) participan del proyecto Monitoreo Ambiental para Regiones Áridas y Semiáridas (MARAS) que busca “avanzar en el monitoreo y verificación del estado de la desertificación y de su reversión, no sólo para el territorio patagónico, sino de alcance mucho más amplio a escala nacional y global”. Según un documento del proyecto, “la degradación de los suelos es una de las principales causas de la pobreza rural y la consecuente migración hacia los centros urbanos. Este proceso se agudiza en las zonas áridas y semiáridas del territorio”. La gente de la tierra seca Según asegura la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO, por sus siglas en inglés), a escala mundial las tierras áridas, semiáridas y subhúmedas son habitadas por más de dos mil millones de personas, lo que corresponde a cerca del 40 por ciento de la población. “Éstas suelen ser unas de las más pobres del mundo en las que muchos subsisten con menos de un dólar por día”, indica el organismo internacional. Diciembre 2012, Argentina 223 Asia cuenta con el mayor porcentaje de gente que vive en este tipo de zonas: más de 1.400 millones (42 por ciento de la población regional), seguido por África con el 41 por ciento y Sudamérica con el 30. mente áridas o que tienen un proceso de desertificación muy fuerte”, destacó. Ante estos números, puede considerarse que los habitantes de este tipo de regiones podrían carecer de seguridad alimentaria, ya que las zonas más secas del planeta tienen mayores riesgos de iniciar procesos de desertificación a raíz del cambio climático y las actividades humanas. Así, la SAyDS coordina el Programa de Acción Nacional de Lucha contra la Desertificación (PAN) para contribuir al desarrollo sustentable en las zonas secas de la República Argentina. Para ello se implementaron programas que analizan la situación de la desertificación y su efecto sobre las poblaciones, y que contemplan capacitar, sensibilizar y educar a la población para lograr el manejo sustentable en esas zonas y su consiguiente desarrollo económico, teniendo en cuenta las particularidades de cada región. En una entrevista exclusiva con la revista RIA (Vol. 38; n.° 2), el representante de la FAO en la Argentina, Alejandro Flores Nava, consideró que una posible solución podría contemplar el aspecto tecnológico. “Habría que generar el conocimiento que hace falta para lograr mejorar productivamente aquellas áreas que hoy son total- En este sentido, el manejo sustentable también se torna esencial para alcanzar la seguridad alimentaria y la conservación de la biomasa y la biodiversidad. Por ejemplo, según el documento base del PAN, “mientras que en la Patagonia el sobrepastoreo es la norma, La verdadera riqueza de las zonas secas La biodiversidad es más importante que las variables climáticas. 224 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 La diversidad es crucial para amortiguar los efectos del cambio climático y la desertificación en las regiones más secas del planeta. tanto para el minifundio como el latifundio dedicados a la producción ovina, en la región árida del centro-norte el problema del minifundio, la ocupación de tierras fiscales y los problemas de títulos (tierras comuneras) llevan a una degradación del suelo y del bosque, lo que disminuye y aún anula la productividad y sume a los pobladores en la pobreza o los obliga a emigrar”. La ONU, como organismo guía compuesto por 192 países que trabajan juntos en pos de la paz y la seguridad de los pueblos, recomienda incluir el desarrollo de las zonas áridas en la agenda de las diferentes naciones. Para su secretario general, Ban Ki- Moon, “si logramos reorientar nuestra agenda de desarrollo para incluir el potencial de las zonas áridas podemos romper los enlaces que existen ahora entre pobreza y desertificación, sequía y degradación del terreno”. Es que, según asegura, estas zonas “tienen potencial, tanto a largo plazo como en lo inmediato, para lograr el crecimiento de las economías nacionales y el desarrollo humano sostenible”. Si a estas afirmaciones se les agrega que la biodiversidad que en ellas existe puede mitigar el calentamiento global, entonces podrían contener un potencial de desarrollo aún mayor que el imaginado anteriormente. La verdadera riqueza de las zonas secas Ver más allá; no quedarse estancado en creencias antiguas; reconocer que los conocimientos cambian y se enriquecen constantemente son cosas que habrá que tener en cuenta para traspasar las fronteras que imponen los ojos y comenzar a mirar la verdadera riqueza que tiene la tierra (todas y cada una de ellas). Más información: Donaldo Bran y Juan Gaitán INTA Bariloche. Ambos son ingenieros agrónomos y pertenecen al grupo de Evaluación, Uso y Monitoreo de Tierras del área de investigación en Recursos Naturales del INTA Bariloche. Diciembre 2012, Argentina 225 Una Visión Integral Hacia el medio rural con perspectiva de género La equidad de género es una dimensión intrínseca del desarrollo humano equitativo y sustentable. Desafíos para pensar su inclusión en las políticas de la Argentina y la región. Por Florencia Castilla Existe un escenario futuro que es de público conocimiento y que orienta las acciones y medidas implementadas por parte de los distintos gobiernos, organismos internacionales y la sociedad civil en general: la Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO, por sus siglas en inglés), estima que para el 2050 la población mundial alcanzará los 9.100 millones de habitantes y esto repercu- tirá en un aumento de un 70 por ciento en la demanda mundial de alimentos. Ahora bien, para llegar a esa situación hay muchos objetivos por cumplir presentados de manera formal por el Programa de las Naciones Unidas en su conocida Declaración del Milenio, donde se pregona una alianza mundial para reducir los niveles de extrema pobreza mediante una serie de objetivos con un plazo fijado para el año 2015. Hacia el medio rural con perspectivas de género Entre estos, la búsqueda de igualdad de género es clave ya que implica un coste real para la sociedad en términos de producción agrícola, seguridad alimentaria y crecimiento económico. Las mujeres rurales desempeñan una función fundamental en la agricultura ya que en diferentes partes del mundo participan tanto en la producción de subsistencia (a través de estrategias como los cultivos en huertas 226 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 Convención sobre la eliminación de la discriminación de la mujer - cedaw - “Hay que demoler ciertas estructuras y revisar desde el lenguaje hasta la forma de acercamiento de los extensionistas” (M. del Carmen Quiroga) Los Estados partes adoptarán todas las medidas apropiadas para eliminar la discriminación contra la mujer en las zonas rurales a fin de asegurar, en condiciones de igualdad entre hombre y mujeres, su participación en el desarrollo rural y en sus beneficios, y en particular le asegurarán el derecho a: • Participar en la elaboración y ejecución de los planes de desarrollo a todos los niveles. • Acceso a servicios adecuados a atención médica, inclusive de información, asesoramiento y servicios en materia de planificación de la familia. • Obtener todos los tipos de educación y de formación, académica y no académica, incluidos los relacionados con la alfabetización funcional, así como, entre otros, los beneficios de todos los servicios comunitarios y de divulgación a fin de aumentar su capacidad técnica. • Organizar grupos de autoayuda y cooperativas a fin de obtener igualdad de acceso a las oportunidades económicas mediante el empleo por cuenta propia o por cuenta ajena. • Obtener acceso a los créditos y préstamos agrícolas, a los servicios de comercialización y a las tecnologías apropiadas, y recibir un trato igual en los planes de reforma agraria y de reasentamiento. • Gozar de condiciones de vida adecuadas, particularmente en las esferas de la vivienda, los servicios sanitarios, la electricidad y el abastecimiento de agua, el transporte y las comunicaciones. (Fuente: MAGYP-SsAF, 2010.) familiares, recolección y procesamiento de alimentos), como en el comercio agrícola al formar parte de las diferentes etapas de la producción de alimentos a gran escala. ceso al crédito, por ejemplo, y a los medios de producción, automáticamente la producción agrícola a escala global se incrementaría entre un 20 y un 30 por ciento”. De acuerdo con estimaciones de la FAO, las mujeres representan a escala mundial el 43 por ciento de la fuerza laboral agrícola en los países en desarrollo y un 20 por ciento en América Latina y el Caribe. Sin embargo, más allá de reconocer que uno de los desafíos mas importantes que enfrentan las mujeres rurales es el acceso a diferentes recursos como la tierra, la educación, la capacitación, los créditos y las tecnologías, entre otros, asegura que ”hay un reconocimiento no sólo de la invaluable contribución que tienen las mujeres en el campo y la producción agrícola sino de la necesidad de que ese reconoci- Asimismo, el representante del organismo internacional, Alejandro Flores Nava, destaca a la Revista RIA que “si las mujeres estuvieran en igualdad de condiciones que los hombres en el ac- miento se traduzca en políticas que transformen la realidad del campo con la participación de la mujer”. Una visión regional El papel que desempeñan las mujeres en las labores agrícolas varía según las actividades, los cultivos y las producciones en las que trabaje y también de acuerdo al país y la región. Sin embargo, comparten una condición común: cuentan con un menor acceso que los varones a los recursos productivos como son los activos, insumos y servicios, señala la FAO. Diciembre 2012, Argentina El organismo internacional afirma que, las mujeres controlan menos tierras que los hombres y, en muchos casos, esas suelen ser de peor calidad y carecer de seguridad sobre su tenencia. En este sentido, el control de la tierra representa un activo importante que repercute directamente en la productividad agrícola y que condiciona el acceso a otros recursos ligados a la seguridad jurídica que ésta supone, como el acceso al crédito. “La ley es equitativa; heredan por igual varones y mujeres. Sin embargo, hay pautas culturales que hacen que la mayoría de las tierras estén muy con- 227 centradas en manos de hombres y que las mujeres vayan perdiendo esos espacios. Incluso, en muchos casos aquellas que son dueñas de las tierras no tienen el control respecto a las actividades que en éstas se desarrollan”, explica a la Revista RIA la coordinadora del Área de Inclusión y Equidad Rural de la Unidad para el Cambio Rural (UCAR), María Del Carmen Quiroga. Por otro lado, el acceso al crédito y los seguros es fundamental para mejorar la producción agrícola y representan, según datos aportados por la FAO, “una ayuda a los hogares para aumentar y diversificar los medios de vida, una mayor presencia en el mercado de trabajo, más educación y una mejor salud”. En la mayoría de los casos, las productoras necesitan adquirir maquinarias y herramientas, variedades mejoradas de plantas y razas de animales, fertilizantes, medidas de control de plagas y técnicas de gestión que son más caras y que las obligan a recurrir a los mercados crediticios u otras fuentes de dinero. En este sentido, Quiroga advierte que “en los programas de crédito rural hay un bajo porcentaje destinado a las mujeres que es otorgado como subsidio para autoconsumo y, a su vez, la La búsqueda de igualdad de género es clave ya que implica un coste real para la producción agrícola, la seguridad alimentaria y el crecimiento económico. 228 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 Números que importan En América Latina y el Caribe: 58 millones de mujeres viven en zonas rurales. 17 millones forman parte de la población económicamente activa y 4 millones y medio son productoras agropecuarias. Las mujeres rurales trabajan más y ganan menos: en México, por ejemplo, trabajan 89 horas semanales, 31 horas más que los hombres. En Brasil, la mayoría de las mujeres rurales que trabajan de forma remunerada lo hacen en el sector agrícola, mientras que en Chile son la minoría y en Argentina la participación de estas mujeres en el trabajo agrícola temporal oscila entre el 30 % y el 40 %. (Fuente: Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación) mayoría del financiamiento esta destinado a los varones aún cuando se trata de actividades que realizan las mujeres como horticultura, cría porcina y ganado menor. El acceso al crédito es una brecha importante y tiene que ver con que el técnico identifica al productor varón como interlocutor válido para recibir ese beneficio”. En función de la información relevada por la FAO, el trabajo de las mujeres rurales es económicamente invisible porque gran parte de las actividades productivas que realizan suele estar ligadas a sus responsabilidades domésticas. Más aún, a pesar de que participen en muchas actividades agrícolas orientadas hacia el mercado, éstas no suelen ser percibidas En esa línea, la técnica del INTA y miembro de la Red Nacional de Técnicas e Instituciones que Trabajan con Mujeres Rurales (TRAMA), María Elena Aradas, advierte que la plataforma de acción de la IV Conferencia Mundial de la Mujer en Beijing (1995), instó a los países a diseñar medios estadísticos apropiados para reconocer y hacer visible el trabajo de las mujeres y su contribución a la economía nacional, incluso en el sector no remunerado y en el hogar. En este sentido, Aradas destaca que “es necesario utilizar herramientas como las encuestas de uso de tiempo para visibilizar el trabajo de las mujeres, que sean registradas en las cuentas nacionales y que permitan fortalecer los presupuestos otorgados a los proyectos que trabajen la cuestión de género”. por el aporte o su significancia económica en la producción, sino como una “ayuda”. Brecha de género: desafíos para la Argentina En este sentido, el hecho de que las tareas no sean registradas en los censos agropecuarios provocaría una distorsión en la información relacionada con el sector agrícola y socavaría la posibilidad de que se formulen políticas de calidad y programas de desarrollo con perspectiva de equidad de género. En el país, la referencia legal en la cuestión de género se encuentra en la incorporación de la Convención sobre la Eliminación de todas las formas de Discriminación de la Mujer que en 1994 adquiere rango constitucional y que reafirma el derecho de las mujeres rurales al acceso a los recursos y los servicios sociales básicos. (Ver recuadro: Convención sobre….). Así, Quiroga agrega que “la falta de información en los censos sobre las actividades que desarrollan las mujeres las invisibiliza. Hay que lograr permear la cuestión de género en todas las instancias y apelar a los datos para lograr políticas concretas”. Hacia el medio rural con perspectivas de género Así, a principios de los ’90 se crearon diferentes instancias institucionales que, primero desde la Secretaría y luego desde el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca de la Nación, se orientaron a coordinar las acciones Diciembre 2012, Argentina de desarrollo rural para constituirlas en una política de Estado. En este ámbito, y debido a que se trata de instancias donde pueden articularse diferentes enfoques como la seguridad alimentaria y el desarrollo territorial, podrían ser espacios adecuados y proclives para contemplar la equidad de género. En ese sentido, el papel de los servicios de Extensión cobra importancia al contribuir a la tecnificación y el mejoramiento de la empresa agraria y la vida rural, porque es el ámbito mediante el cual puede comenzar a trabajarse el enfoque de derecho y de la cuestión de género como una política transversal de las acciones dirigidas al medio rural, en general, y al sector agropecuario, en particular. 229 “Es necesario utilizar las encuestas de uso de tiempo para visibilizar el trabajo de las mujeres y que su aporte sea registrado en las cuentas nacionales” (M. Elena Aradas) Sin embargo, para Quiroga es necesario que el trabajo de los grupos técnicos esté enmarcado en una política de equidad de género a escala institucional que permita integrarlo y que “se tengan en cuenta las brechas de género, las diferencias de acceso y oportunidad que hay para las mujeres y para los varones en todos los programas a la hora de identificar la población, diagnosticar las demandas, diseñar actividades, asistencia técnica, financiamiento y capacitación”. Según advierte, “hay que demoler ciertas estructuras y revisar desde el lenguaje hasta la forma de acercamiento de los extensionistas para conocer el famoso ‘quién hace qué’, y tenerlo en cuenta a la hora de las convocatorias y reuniones para asegurarse que todos los miembros puedan participar”. En ese sentido, otra técnica del INTA y miembro de TRAMA, María Cristina Biaggi, asegura que hay propuestas facilitadoras para el acceso equitativo de varones y mujeres como “una adecuación de horarios y reuniones porque las mujeres tienen toda la carga reproductiva y doméstica que puede dificultar su asistencia a las capacitaciones sumado al uso de formas de comunicación y metodologías participativas”. A su vez, agrega que “es importante que se brinden estrategias para ahorrar trabajo doméstico como así también es necesario que las convocatorias se hagan a cada uno de los integrantes de las unidades familiares y no creer que al identificar como destinatario al hombre jefe del hogar éste se encargará de Hacia el medio rural con perspectivas de género 230 ACTUALIDAD EN I+D El trabajo de las mujeres rurales es económicamente invisible porque sus actividades productivas suelen estar ligadas a sus responsabilidades domésticas. RIA / Vol. 38 / N.º3 transferir el asesoramiento, inclusive en lo referido a las actividades que realizan las mujeres”. En este sentido, el Ministerio de Desarrollo Social de la Nación (MDS) y el INTA implementan a través del ProHuerta, un programa que busca mejorar la seguridad y la soberanía alimentaria, y favorecer la participación y la organización de sectores vulnerables de la población en lo que podría ser identificado como un ámbito propicio para abordar la cuestión. En esta línea, Aradas asegura que “mediante la perspectiva de desarrollo territorial la institución incorporó estrategias para responder a demandas especificas de distintos actores mediante distintos proyectos en el marco del PROFEDER y, desde sus inicios, en el ProHuerta que ha sido clave en la incorporación de las mujeres como promotoras y capacitadoras en la producción de alimentos”. Además, en el marco de las diferentes experiencias que se desarrollan desde la institución algunos actores que participan en proyectos con mujeres reconocen el rol del ProHuerta Hacia el medio rural con perspectivas de género como el espacio para generar vínculos y trabajos con perspectiva de género como es el caso de las feriantes, apicultoras, teleras, hilanderas, tejedoras, horticultoras y floricultoras, entre otras. Por lo tanto, estas experiencias además de reconocer la capacidad productiva de las mujeres podrían constituirse en espacios de reconocimiento, de visibilidad y de garantía de cumplimiento de sus derechos en lo que, Quiroga, señala como “un marco político que hoy nos permite tratar estos temas y abandonar el discurso ‘adosado’ para que el tema de género se instale en todas las instancias y cambie el color de la asistencia técnica, el financiamiento y las instituciones”. Más información: Informe: El Estado Mundial de la Agricultura y la Alimentación (FAO) http://www.fao.org/docrep/013/i2050s/i205 0s.pdf Informe: Mujeres que trabajan la tierra. M. Cristina Biaggi http://www.proinder.gov.ar/productos/Biblioteca/contenidos/estinv.11.mujeres%20q ue%20trabajan%20la%20tierra.pdf Diciembre 2012, Argentina 231 Raquel Chan Retos para el futuro de los alimentos En una entrevista exclusiva con la Revista RIA, la doctora en bioquímica habla sobre la importancia de la investigación en materia de cultivos mejorados y su impacto en la producción de alimentos. Por Ana Belluscio* ““Hay que saber usar la tierra sin agotarla. En definitiva, todos nos alimentamos de plantas en los distintos eslabones de la cadena alimentaria”. ………….................…….......... Reconocida por su trabajo en tecnología agropecuaria, la investigadora y directora del Centro Científico Tecno- lógico CONICET Santa Fe, Raquel Chan, lidera un grupo de investigadores que descubrió un gen que permite obtener cultivos tolerantes a condiciones adversas como la sequía y la salinidad, como así también aumentar la productividad de los cultivos bajo estas condiciones o en condiciones no estresantes. Retos para el futuro de los alimentos En línea con los desarrollos en materia de mejoramiento de cultivos, la búsqueda de estrategias para asegurar la alimentación se transforma hoy en un desafío. En este sentido, una posible solución podría advertirse gracias a que “la Argentina tiene un potencial enorme en materia de recursos humanos y grupos de investigación 232 ACTUALIDAD EN I+D RIA / Vol. 38 / N.º3 abocados al área agropecuaria”, asegura Chan. “En la Argentina hay grupos que trabajan en el desarrollo de herramientas genéticas para la defensa contra organismos patógenos”. ¿Qué impacto tiene su trabajo en materia de desarrollo de cultivos tolerantes en un escenario de cambio de ecosistemas? Desde el punto de vista del aumento poblacional mundial, hay una realidad: hay que producir más comida. Los alimentos están actualmente mal distribuidos en el mundo, pero aunque esa situación se corrigiera, no alcanzarían para abastecer a la población creciente, que se calcula en más de nueve mil millones para 2050. Y no es sólo una necesidad de alimentos, sino también de energía. Además existe una relación con el cambio climático, que genera episodios de inundaciones o sequías con la consecuente pérdida de productividad. En ese marco, el desarrollo de cultivos tolerantes, que pueden soportar mejor los avatares climáticos, toma una importancia fundamental. ¿Cree que se debería apuntar a generar plantas tolerantes a otros factores climáticos, además de sequía y salinidad? Estamos en el camino de desarrollos también para inundaciones y freezing, es decir, heladas o temperaturas de congelamiento. Hay varios equipos que también están avanzando en biorremediación, a través del trabajo con plantas capaces de absorber los des- Retos para el futuro de los alimentos echos tóxicos que se producen a partir de los procesos industriales. Estos ejemplares serían capaces de absorber diferentes contaminantes sin morir y dejar el suelo limpio. Existen trabajos muy interesantes de remediación con bacterias, pero las investigaciones con plantas están más atrasadas. En la Argentina hay, además, grupos que trabajan en el desarrollo de herramientas genéticas para la defensa contra organismos patógenos. ¿Cuáles son los primeros desafíos que se presentan a la hora de asegurar la provisión de alimentos a futuro? Hay que saber usar la tierra sin agotarla. En definitiva, todos nos terminamos alimentando de plantas en los distintos eslabones de la cadena alimentaria. Hay que generar más en la misma superficie, porque ésta no va a aumentar y no creo que de acá a 2050 se descubran terrenos cultivables en otros planetas. Producir más tiene también que ver con investigaciones que apunten a mejorar la fotosíntesis, el proceso por el cual las plantas transforman energía solar en alimentos. ¿Hay líneas de investigación orientadas en ese sentido? Existen varios grupos que trabajan para mejorar la tasa fotosintética, que es básicamente la fijación de dióxido de carbono para generar azúcares. Pero Diciembre 2012, Argentina 233 también para optimizar el transporte de estos productos desde las hojas hacia los frutos, que en muchas plantas constituyen los alimentos que consumimos. En el caso de las leguminosas, que hacen simbiosis con bacterias que fijan nitrógeno, el mejoramiento de este proceso también es crucial para obtener una mayor productividad. cuestión. Los experimentos con plantas son en general muy lentos, especialmente aquellos que involucran métodos transgénicos. Usualmente se investiga en sistemas modelo y, cuando se encuentra una tecnología prometedora, se pasa al trabajo con especies de interés agronómico, bastante más difíciles de manipular. Del trabajo molecular en laboratorio a la mesa del consumidor…¿Cuál es el marco de tiempo promedio? ¿Y en la investigación de nuevas tecnologías para generar cultivos tolerantes? Es un ciclo bastante largo, entre 10 y 15 años desde el descubrimiento de un gen que confiere una característica beneficiosa hasta obtener un producto de mercado. Y no estamos tomando en cuenta toda la ciencia básica que hay detrás de la identificación del gen en No hay muchos desarrollos en el mercado en materia de transgénicos además de los conocidos. Están esencialmente relacionados con resistencia a insectos o con evitar que crezcan malezas que compiten con las plantas por los nutrientes. Ambos están orientados a mejorar la productividad y los rindes. A veces no hay una clara conciencia del camino que se recorre hasta llegar a una tecnología como la que desarrollaron con su grupo. ¿Cómo ve el vínculo entre investigación y desarrollo? La relación entre ciencia básica y vinculación tecnológica es un casamiento casi indisoluble. Nosotros partimos de preguntarnos cómo hace una planta para sobrevivir sin agua un tiempo, que es una pregunta típica del ámbito de la ciencia básica. De ahí pasamos a la identificación de los genes que participaban en el proceso y posteriormente a descubrir algunos de los mecanismos que permiten a las plantas tolerar el estrés hídrico. Pero el punto de partida y el desarrollo tecnológico estuvieron asociados con la primera pregunta. Después vino la vinculación entre las instituciones y “Como país, vamos a tener un rol muy importante a escala mundial en producción de alimentos y seguridad alimentaria”. Retos para el futuro de los alimentos 234 ACTUALIDAD EN I+D “Hay que saber usar la tierra sin agotarla. Tenemos que producir más en la misma superficie”. RIA / Vol. 38 / N.º3 empresas para generar productos de mercado a partir de las tecnologías desarrolladas en el laboratorio público. ¿Cómo van a trabajar desde el Centro Científico Tecnológico (CCT) CONICET Santa Fe en vinculación tecnológica? Los investigadores son libres de investigar lo que quieran y desarrollar los proyectos que presentan y son evaluados por las instituciones. El Conicet, desde su sede central y, particularmente, desde la Dirección de Vinculación Tecnológica, tiene un plan nacional para mejorar la vinculación entre los investigadores y el sector socio-productivo. El CCT Santa Fe se acopla al plan nacional del CONICET, va a fortalecer la oficina de vinculación para ayudar y asesorar a los investigadores de la región de influencia en la relación con empresas y a las empresas sobre las capacidades que tienen los investigadores e institutos. ¿Qué perspectivas a futuro le ve al país en el marco de la seguridad alimentaria? Creo que la Argentina tiene un potencial enorme en materia de recursos humanos y grupos de investigación abocados al área agropecuaria. Los subsidios a proyectos de investigación en esta disciplina han crecido considerablemente en los últimos años. Además, creo que vamos a tener un rol muy importante a escala mundial en producción de alimentos y seguridad alimentaria, por la gran superficie de terreno que tenemos con buen clima y agua. Más información: Raquel Chan – CONICET Santa Fe La investigadora es doctora en bioquímica y desempeña el cargo de directora del Centro Científico Tecnológico (CCT) CONICET, Santa Fe desde el mes de septiembre. *coordinadora del área de divulgación científica del Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). Retos para el futuro de los alimentos Diciembre 2012, Argentina 235 Pastillas Más información en http://ria.inta.gov.ar Huevos con Omega-3 Investigadores del INTA lograron producir huevos enriquecidos con Omega-3 (n-3) mediante la modificación de la alimentación de las gallinas ponedoras, al incorporar en la dieta materias primas locales con alto valor de esos ácidos grasos. Según la Organización Mundial de la Salud, los Omega-3 son ácidos grasos poliinsaturados beneficiosos para los seres humanos, ya que permiten reducir los riesgos vinculados con enfermedades cardiovasculares, entre otras enfermedades autoinmunes. Así, se logró aumentar tres veces la cantidad de Omega 3 en los huevos al utilizar lino en la alimentación y, por otro lado, pudieron aumentarla cinco veces cuando se utilizaron semillas de chía. Genes de buena madera Investigadores del INTA Castelar y Bariloche secuenciaron material genético inédito de árboles nativos patagónicos para desarrollar herramientas que permitan asistir a su mejoramiento y conservación, así como explorar su resistencia a condiciones ambientales adversas. Para ello, utilizaron marcadores moleculares para conocer tanto los genes de resistencia contra condiciones de estrés abiótico como la diversidad y evolución de la Nothofagus nervosa (comúnmente llamada “raulí”), para domesticarla y aumentar la producción de su madera. El monitoreo se realizó sobre distintas especies como la lenga, el roble y, específicamente, sobre el raulí por su potencial de domesticación y su respuesta a condiciones de estrés termo-hídrico. Nueva forma de presentar artículos en RIA El INTA, con el apoyo del CAICYT, pone a disposición de los autores una nueva plataforma de seguimiento y presentación de trabajos. Este nuevo modo de trabajo editorial facilitará los procesos a los autores que deseen publicar en la Revista de Investigaciones Agropecuarias (RIA) y repercutirá de manera positiva en el posicionamiento de la revista frente a otras publicaciones. Ahora, el proceso de publicación de los trabajos cuenta con el apoyo editorial del Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), que tiene a su cargo el Catálogo Colectivo de Publicaciones Periódicas y participa de los proyectos Scielo y Latindex. Más información genética para preservar la batata Científicos del Instituto de Patología Vegetal del INTA y del Conicet descifraron el genoma de un virus que, en combinación con otros patógenos, afecta en forma severa el rendimiento y el contenido vitamínico del cultivo de batata, lo que permitirá conocer la variabilidad y evolución de este patógeno y desarrollar estrategias para su control. El patógeno descifrado es conocido como Virus del Rizado de la Hoja de Batata (SPLCV-Ar, por sus siglas en inglés) y es capaz de disminuir en más de un 90 por ciento el rendimiento y reducir cuatro veces la vitamina A presente en el cultivo. Huevos contra enfermedad animales El INTA desarrolló huevos para combatir ciertas enfermedades que afectan a los animales de importancia productiva. La clave de esta tecnología se encuentra justamente en el corazón del huevo: a partir de las inmunoglobulinas presentes en la yema (IgY) se diseñan productos, que pueden utilizarse fluidos o en polvo como suplemento de la dieta del animal, para prevenir y tratar distintos problemas sanitarios. Para ello, “se inmunizó una gallina contra un virus en especial, lo que generó una respuesta inmune que fue transferida a los huevos, cuyos anticuerpos quedan enriquecidos contra ese agente”, explicó la coordinadora de la investigación, Viviana Parreño. 236 REVISIONES RIA / Vol. 38 / N.º 3 Coagulación de la leche. Desarrollo de un dispositivo para el “monitoreo” online del proceso. Avances en la Argentina SBODIO, O.A.1; REVELLI, G.R.2 RESUMEN La coagulación enzimática de la leche es una etapa fundamental en la elaboración de queso. Su control online tiene por objeto la determinación del tiempo de coagulación, la velocidad de crecimiento de la firmeza y el apropiado tiempo de corte de la cuajada. El tratamiento térmico de la leche permite incorporar al queso proteínas del suero para incrementar su valor biológico y su rendimiento. También, numerosas investigaciones reportan el agregado de Proteínas de Suero en Polvo (WPC) en la elaboración de distintos tipos de quesos. Tratamientos diversos de las proteínas del suero son utilizados para alimentos ricos en almidones. El desarrollo de un dispositivo que cumpla con los requerimientos de fortaleza, higiene en el lugar, que no impida las operaciones de corte y agitación y que no sea destructivo, será una herramienta importante en el estudio de los efectos de las variables críticas, el control de la elaboración de queso y yogurt, y en el desarrollo de nuevos productos. Una revisión histórica muestra que desde hace varias décadas los investigadores se preocupan por obtener dispositivos basados en diferentes métodos. En la Argentina, se reportan experiencias con utilización del principio del alambre caliente. En la actualidad, se construye un dispositivo innovador que puede ser aplicado en el desarrollo de nuevos productos y en tina quesera industrial. Palabras clave: leche, coagulación, enzimas, control, queso. ABSTRACT The enzymatic coagulation of the milk is a fundamental phase in the elaboration of cheese. Its control online considers object the decision of the time of coagulation, the velocity of growth of the firmness and the appropriate cutting time of the curd. The heat treatment of the milk permits to incorporate to the cheese proteins of the serum, increasing its biological value and its performance. Also, numerous investigations report the aggregate of Whey Protein Concentrate (WPC) in the elaboration of different types of cheeses. Diverse processing of the proteins of the serum are utilized for food rich in starches. The development of a device that comply with the requests of robustness, clean in place, that do not impede the operations of cut and agitation and that are not destructive will be an important tool in the study of the effects of the critical variables, the control of Instituto de Tecnología de Alimentos (I.T.A.), Facultad de Ingeniería Química, Universidad Nacional del Litoral, 1.° de Mayo 3250, Santa Fe, Argentina. Correo electrónico: [email protected]. 2 Laboratorio Integral de Servicios Analíticos (L.I.S.A.), Cooperativa Tambera y Agropecuaria Nueva Alpina Ltda., S2340ALB Ceres, Santa Fe, Argentina. 1 Recibido el 02 de febrero de 2012// Aceptado el 10 de julio de 2012// Publicado el 22 de agosto de 2012 Coagulación de la leche. Desarrollo de un dispositivo para el “monitoreo” online del proceso. Avances en la Argentina Diciembre 2012, Argentina 237 the elaboration of cheese and yoghurt, and in the development of new products. A historic review shows that for several decades the investigators worry about obtaining devices based on different methods. In Argentina, experiences utilizing the principle of the hot wire are reported. Currently, an innovative device is built that can be applied in the development of new products and in the cheese industry. Keywords: milk, coagulation, enzymes, control, cheese. INTRODUCCIÓN Coagulación enzimática El queso es un producto lácteo que ha jugado y juega un importante rol en la nutrición humana desde hace varios siglos. Desde entonces, el principal objetivo ha sido y es hoy hacer de un producto altamente perecedero, como es la leche, otro que tenga larga vida y preserve sus nutrientes. En esencia, el queso es elaborado removiendo agua o suero de la leche permitiendo que los sólidos o cuajada puedan ser manejados de una manera controlada. La recolección de la leche es el primer paso de este proceso. El segundo paso es la producción de la cuajada y el tercero es la concentración de la misma por corte, cocinado o no, salado y maduración. El proceso de elaboración del queso está caracterizado por dos etapas: la coagulación enzimática por acción de la quimosina de la leche, que constituye la etapa fundamental en la elaboración y resulta en la formación de un gel como consecuencia de cambios fisicoquímicos que tienen lugar en las micelas de caseínas. Esta, en combinación con un proceso determinado de fermentación (método apro-piado de deshidratación) resulta en una masa que pierde proteínas solubles y obviamente agua (Hinrichs, 2001). La coagulación enzimática, puede dividirse en dos partes, una primaria (hidrólisis enzimática) y otra secundaria (agregación). Durante la etapa primaria, la k-caseína es “cortada” por la acción de la enzima en el enlace Phe105Met106, formando una porción hidrofóbica: para k-caseína y una hidrofílica: caseinmacropéptido. Como resultado de esta acción se produce la reducción de la carga negativa neta y de la repulsión estérica. De esa manera, la micelas modificadas comienzan a ser susceptibles de agregarse (Zoon et al., 1988; Walstra, 1990; Lucey, 2002). Entre las fuerzas atractivas durante la agregación predominan los puentes-Ca, las fuerzas de Van der Waals, las interacciones hidrofóbicas (Walstra, 1990; Mellema et al., 1999) y puentes hidrógeno. Sinéresis La otra etapa trascendente en la elaboración del queso es la sinéresis, en donde el suero es expelido de la cuajada luego del corte de la misma. A continuación, ocurre el drenaje, moldeo, presión de la masa, salado y madurado. La sinéresis es definida como el encogimiento de un gel, que tiene lugar concomitantemente con la expulsión de líquido o separación del suero. La sinéresis espontánea es la contracción de un gel sin la aplicación de alguna fuerza externa, es relativa a la inestabilidad de la red que conforma el gel, resultando en la pérdida de la habilidad para atrapar o contener todo el suero (Walstra, 1993). La sinéresis de la cuajada es una etapa crítica, los niveles y extensión juegan un rol fundamental en determinar la humedad, el contenido mineral y de lactosa de la cuajada drenada y aún en la del producto final (Lawrence y Gilles 1980; Pearse y Mackinlay, 1989; Daviau et al., 2000). La obtención de la medida de la sinéresis puede ser utilizada para monitorear el proceso. La mayoría de las técnicas desarro-lladas para medirla, pueden ser clasificadas como métodos de separación o métodos de dilución. En los métodos de separación, la cuajada y el suero son separados y se analizados la humedad de la cuajada y el volumen del suero, para obtener una medida de la sinéresis (Marshall, 1982; Johnston et al., 1998). Las técnicas de dilución utilizan trazadores y de esa manera logran medir la humedad remanente en la cuajada (Zviedrans y Graham, 1981; Nilsen y Abrahamsen, 1985). Taifi et al. (2006), estudiaron un método no invasivo para monitorear la sinéresis utilizando una técnica ultrasónica. Sin embargo, debemos aclarar que esta experiencia determinó lo que se denomina “microsinéresis espontánea” más que la sinéresis inducida por el corte de la cuajada. Esta, observa la limitante, que podría implicar la potencial diferencia de respuesta lograda en un medio compuesto por cuajada y suero, comparada con aquella conseguida en un medio homogéneo como es un gel. Factores que afectan la coagulación Entre los más importantes factores que afectan la coagulación, se destacan aquellos generales referidos a la composición de la leche (en particular su contenido en proteínas y grasa), el estado de lactación, calidad higiénica y sanitaria, etc. Otros factores denominados críticos que caracterizan el proceso, afectan la coagulación por quimosina de la leche. La Literatura enfatiza sus efectos y su interacción (Ernstrom et al., 1958; Jen y Ashworth, 1970; Kowalchyk y Olson, 1977; Dalgleish, 1983; Okigbo et al., 1985a,b; Noël et SBODIO, O.A.1; REVELLI, G.R.2 238 REVISIONES al., 1991; Sbodio et al., 1997b). En la elaboración de queso, se identifican tres variables independientes relevantes, a saber: pH de coagulación, temperatura y concentración enzimática, a las que deberíamos agregar el CaCl2 adicionado. Las interacciones entre ellas han sido estudiadas por numerosos autores y, en el medio local, por Sbodio et al. (1997b, 2002). Desnaturalización térmica de las proteínas del suero La consideración del tema adquiere singular relevancia en función de que las modificaciones que sufren las proteínas del suero luego del tratamiento térmico hacen posible su incorporación en diferentes productos, particularmente en quesos frescos y yogurt. Después del calentamiento de la leche, las proteínas del suero, en particular, β-lactoglobulinas y α-lactoalbúmina sufren cambios estructurales. En la β-lactoglobulinas se exponen los grupos SH (etapa inicial) y éste puede formar puentes disulfuros con otras proteínas, especialmente con la k-caseína y αs2-caseína, iniciando un proceso de polimerización irreversible. Este paso inicial, en principio, se creyó que era solamente de naturaleza física pero es al final una interacción covalente (Hill, 1989; Jang y Swaisgood, 1990). La α-lactoalbúmina, que en principio no puede iniciar un proceso de polimerización debido a la ausencia de grupos SH libres, después del calentamiento forma agregados, debido a los puentes disulfuros, con la β-lactoglobulinas (Mulvihill y Donovan, 1987). Numerosos investigadores reportaron la influencia de la desnaturalización térmica de las proteínas solubles sobre la propiedad de coagular enzimáticamente. Particularmente, la unión de las proteínas del suero a la superficie de la micela, que por impedimento estérico, producen una inapropiada agregación (Singh y Waungana, 2001; Vasbinder y De Kruif, 2003a; Vasbinder et al., 2003b; Donato et al., 2007). A pesar de esta situación, el uso del tratamiento térmico ofrece importantes ventajas tales como el aumento del rendimiento y del valor nutritivo del queso (Kethireddipalli et al., 2010). El tratamiento térmico rutinario al que es sometida la leche antes del proceso de elaboración de queso, corresponde a una pasteurización (72 °C, 16 segundos o 63-65 °C, 30 minutos). Ahora bien, el tratamiento a temperaturas superiores a 70 °C por varios minutos, resulta en importantes cambios fisicoquímicos de los constituyentes de la leche. Entre los más trascendentes, desde el punto de vista de la coagulación por acción de la quimosina se destacan: desnaturalización de las proteínas del suero y agregación de las mismas, interacción de las proteínas del suero con las micelas de caseína y cambios en la distribución del calcio entre las fases micelar y sérica (Hinrichs, 2001). Específicamente, la incapacidad de coagular apropiadamente de la leche tratada térmicamente puede ser explicada por la desnaturalización de las proteínas del suero y su unión con la κ-caseína, lo cual vía repulsión estérica inhibe o dilata la fase primaria (hidrólisis) y prolonga el tiempo de coagulación. Por otra parte, la pérdida de calcio soluble en el suero debido a la precipitación sobre las micelas de caseína como fosfato de calcio in- RIA / Vol. 38 / N.º 3 soluble, también prolongan el tiempo de coagulación (Van Hooydonk, et al., 1987). Además, las proteínas del suero desnaturalizadas son altamente hidratadas y obstruyen la sinéresis por lo que se produce menor drenaje de suero durante el proceso de elaboración de queso (Lucey y Gorry, 1994). Por consiguiente, al retener más suero con el correspondiente contenido de lactosa se modifica el proceso de acidificación de la cuajada. Recientemente, en nuestro país, fueron reportadas importantes modificaciones que el tratamiento térmico moderado de la leche (70 °C, 10 minutos) produce sobre el tiempo de coagulación, el voltaje y la producción de suero (Sbodio et al., 2010). Contenido de cloruro de sodio y coagulación El contenido de NaCl de la leche, observa influencia sobre las propiedades de la coagulación. El mismo, varía entre 17 y 28 mM/kg de leche (Walstra y Jenness, 1984). En la Cuenca Lechera Central de la República Argentina, esta variación es más amplia (Sbodio et al., 1989). Zannier et al. (2002), mostraron que la variación en leche de vacas tomadas individualmente observaron un rango comprendido entre 17,40 y 42,83 mM de NaCl. A través del uso de diferentes metodologías, numerosos trabajos muestran la influencia de altas concentraciones de NaCl en la leche sobre la propiedad de coagular enzimáticamente. Algunos autores, sostenían que la tensión de la cuajada no era afectada por la adición de hasta 500 mM de NaCl (Grufferty y Fox, 1985). Sin embargo, Jen y Ashworth (1970), reportaron que cuando se agregaron hasta 100 mM la tensión se incrementaba, mientras disminuía marcadamente a concentraciones más altas. Como ambos trabajos medían la tensión de la cuajada 30 minutos después del agregado de la enzima es posible que los dispares resultados hayan sido influenciados por la dependencia del tiempo de coagulación, más que por la concentración de NaCl. Zoon et al. (1989), con la utilización de un reómetro (Den Otter Rheometer), informaron que luego de la adición del coagulante y del NaCl, a pH 6,65 y tiempo de coagulación constante, G’ (módulo de almacenamiento) no observaban diferencias significativas. Sin embargo, a tiempo de coagulación constante y adición de hasta 200 mM de NaCl, G’ se incrementó a pH 6,65. Por el contrario, a concentración constante de enzima, esto fue observado solamente hasta 100 mM de NaCl. A más altas concentraciones se retarda la formación del gel. Recientemente, Udabage et al. (2001) mostraron que la adición de NaCl incrementa el módulo de almacenamiento. En nuestro país, en un estudio realizado utilizando el método del alambre caliente para monitorear el proceso de la coagulación, Sbodio et al. (2006), mostraron que el tiempo de coagulación y el tmax fueron significativamente afectados por la concentración de quimosina a contenidos de NaCl comprendidos entre 17,3 y 39,1 mM. El estudio multifactorial, mostró que la influencia más significativa sobre el tiempo de coagulación y tmax fue la concentración enzimática y, en menor medida, la concentración final de NaCl. También se observó que, a medida que aumenta la concentración Coagulación de la leche. Desarrollo de un dispositivo para el “monitoreo” online del proceso. Avances en la Argentina Diciembre 2012, Argentina 239 de NaCl, aumentan el tiempo de coagulación y el tmax. El máximo voltaje es también afectado en el rango de 17,3 a 39,1 mM de NaCl. El estudio fue realizado en el rango de variación del contenido de NaCl en la leche que se produce en el área central de nuestro país (Zannier et al., 2002). Coagulación ácida La formación de geles de proteínas de leche también es un paso crucial en la elaboración de yogurt. Este, es formado por la fermentación lenta de la lactosa y produce ácido láctico. El desarrollo del mismo es promovido por bacterias termofílicas: Streptococcus salivarius subsp. thermophilus y Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. La fermentación bacteriana convierte la lactosa en ácido láctico, el cual reduce el pH de la leche, decreciendo desde 6,7 a 4,6. Cuando la leche es tratada a altas temperaturas, la gelación tiene lugar entre pH 5,4 y 5,2. Con el descenso del pH se desordenan las propiedades estructurales internas de las micelas de caseína, debido a la solubilización de fosfato de calcio micelar (Dalgleish y Law, 1989). A medida que las caseínas se aproximan a su punto isoeléctrico (pH 4,6) se reduce la carga neta, lo que hace disminuir la repulsión electrostática entre los grupos cargados, incluyendo los residuos de fosfoserina que se exponen cuando el fosfato de calcio micelar es solubilizado. La atracción electrostática aumenta la atracción proteína-proteína que también se incrementa a través de interacciones hidrofóbicas (Lucey, 2004; Lee y Lucey, 2010). Predominan dos tipos de yogurt: el firme “set-type” y el batido. El primero, es formado en su propio envase a medida que las bacterias lácticas fermentan la lactosa en ácido láctico dando una estructura de gel continua. En el caso de yogurt batido, es fermentado en grandes tanques, luego batido y bombeado al envase dando una textura viscosa (Tamime y Robinson, 1999). Uno de los problemas en su elaboración es la separación de suero (“wheying-off”), que es la aparición de suero en la superficie del gel, un defecto común durante el almacenamiento de productos fermentados como el yogurt. En general, los fabricantes tratan de evitar esta separación aumentar el contenido de sólidos de la leche, sometiendo la leche a un tratamiento térmico o agregando estabilizantes (gelatina, pectina, almidones, concentrado de proteínas de suero o gomas). Las propiedades reológicas del gel ácido son afectadas por la composición de la leche, tiempo y temperatura de tratamiento térmico, tipo y cantidad de fermento, temperatura de fermentación y si corresponde a un gel batido o no. En los últimos años, numerosos autores estudiaron el uso de proteínas desnaturalizadas, como ingredientes, en la formulación de yogurt (Rabiey y Britten, 2009a; Matumoto-Pintro et al., 2011), las características reológicas de yogurt producido con la adición de proteínas nativas de suero (Guggisberg et al., 2007), la optimización de las propiedades reológicas de yogurt probiótico suplementado con proteínas de leche (Marafon et al., 2011) y la adición de hidrolizados de proteínas de suero (Rabiey y Britten, 2009b) sobre las propiedades reológicas de un gel ácido. Agregado de proteínas del suero a otros productos Para minimizar la retención de agua por parte de las proteínas del suero, éstas fueron modificadas por extrusión (a temperaturas moderadas) de manera de facilitar su uso en alimentos que contienen almidón con el propósito de aumentar la retención de los niveles de nutrientes (Onwulata et al., 2010). Varios autores estudiaron las consecuencias de agregar suero concentrado, con sus diferentes tratamientos, entre algunos ejemplos se destacan: la elaboración de queso gouda usando Centri-whey Process (Berg Van Den, 1979), o suero concentrado (Zoon y Hols, 1994), o suero en quesos de pasta semidura (Santoro y Faccia, 1996), quesos frescos usando proteínas de suero “particuladas” (Steffl, 1999) y, más recientemente, suplementación de la leche para elaborar queso con proteínas de suero desnaturalizadas (Maubois et al., 2002). Experiencias en el área de producción de la Cuenca Lechera Santafesina En el Área Central de la República Argentina, numerosos estudios reportan la composición y calidad de leche, sus limitaciones, y la presencia en la misma de niveles indeseables de diversos componentes (Sbodio et al., 1985, 1989, 1997a, 1999a,b; Minetti et al., 1995; Revelli et al., 2004, 2011; Valtorta et al., 2002, 2008). A partir de la década del 90, Sbodio et al. (1997b), utilizando una geometría apropiada acoplada a un reómetro, estudiaron la interacción simultánea del pH (5,6-6,8) adición de CaCl2 (100-300 mg/L), temperatura (30-40 °C) y concentración enzimática (0,020,05 UR/mL de leche), sobre la firmeza y el tiempo de coagulación. El análisis de superficies de respuestas permitió concluir que el desarrollo de la firmeza estaba relacionado a la disminución del pH y el aumento de la temperatura y, que en las condiciones experimentales impuestas, los máximos de firmeza se obtuvieron en un estrecho intervalo de pH y temperatura. Posteriormente, Sbodio et al. (2002), utilizando un diseño rotacional central y un sensor desarrollado por el grupo de trabajo que usa el método del alambre caliente, concluyen que las óptimas condiciones para lograr la máxima firmeza de la cuajada resultan en 0,0278 UR/mL de leche de concentración enzimática, 35 °C de temperatura y 6,60 de pH. El mismo diseño fue utilizado para medir la influencia de la temperatura, pH y cantidad de enzima coagulante sobre geles formados por la acción combinada de enzimas y glucono-δ-lactona. Las respuestas tmax, Dmax y TmaxV fueron medidas por el método propuesto anteriormente. Para alcanzar pH 5,8 en 60 minutos, se utilizaron diferentes concentraciones de glucono-δ-lactona. La utilización de coagulante bovino, mostró que los principales efectos, en orden de importancia, fueron producidos por la concentración enzimática, el pH y la temperatura. En cambio, el uso de proteasa de origen microbiano observó que el orden de los efectos fueron la concentración enzimática, temperatura y pH. A partir de los modelos obtenidos para tmax (tiempo en SBODIO, O.A.1; REVELLI, G.R.2 240 REVISIONES el que se produce el cambio de signo de la derivada) y Dmax (voltaje máximo) se puede concluir que la concentración enzimática es la variable de mayor influencia positiva. Los máximos voltajes “firmeza” TmaxV (tiempo en el que se alcanza el máximo voltaje) fueron influenciados significativamente por la temperatura y la concentración enzimática de origen bovino y microbiano. La leche entera coagulada con ambos coagulantes, alcanzaron el máximo voltaje al mismo tiempo (Sbodio et al., 2005). Pauletti et al. (2005), estudiaron el desuerado de geles producido por acción de enzimas coagulantes y gluconoδ-lactona. El experimento, concluye que la concentración de la enzima, la temperatura de floculación y el pH inicial afectan significativamente el tiempo de floculación y la velocidad del desuerado. Sbodio et al. (2010), con un dispositivo similar al utilizado por Hori (1985) determinaron que un moderado tratamiento térmico de la leche (70 °C, 10 minutos) produce niveles de desnaturalización del 20% en las proteínas del suero, y que la recuperación de la coagulación a pH 6,4 y 400 mg/L de leche de CaCl2 adicionado, constituyen condiciones apropiadas para obtener queso cuartirolo, sin perder la aceptación del consumidor y con un significativo aumento del 8,9% en el rendimiento. Objetivos del desarrollo de un dispositivo para controlar la coagulación El desarrollo de un novedoso dispositivo que permita el “monitoreo” online y que cumpla con todos los requerimientos de fortaleza, de capacidad para determinar el tiempo de coagulación, la velocidad de crecimiento de la cuajada, el tiempo en el que se alcanza la máxima firmeza, el tiempo óptimo de corte y que probablemente controle y evalúe la microsinéresis, será una herramienta esencial para estudiar la influencia de las variables críticas que caracterizan la coagulación enzimática y ácida. También, a nivel académico hará posible el estudio de las variaciones de la materia prima, la presencia de componentes indeseables como ocurre con la prevalencia en el área de altas concentraciones de sales solubles y proteólisis por acción de flora indeseable. A bajo costo de inversión y de manera simple, permitirá el análisis de la influencia de diferentes agregados a la leche en la elaboración de queso y de yogurt sin necesidad de recurrir a tecnología altamente costosa como la reometría. En síntesis, la utilización de un sensor que usa el principio del alambre caliente abre un importante panorama en el estudio de diferentes alternativas en la elaboración de nuevos desarrollos y productos tanto en el agregado de aditivos espesantes en leche homogeneizada, como en yogures inoculados con bacterias probióticas, en la búsqueda de mejorar quesos con fermentos característicos (fundamentalmente en quesos frescos y otros como pategrás y queso azul). Se considera, que estos métodos resultarán muy útiles aún con la desventaja de producir limitada información sobre las propiedades reológicas. RIA / Vol. 38 / N.º 3 Antecedentes históricos. Métodos para monitorear la coagulación Desde hace más de un siglo, el quesero utiliza un método subjetivo conocido como el “dedo del quesero” o el test del cuchillo. El quesero hace un ligero corte con su dedo o cuchillo para ver si el corte es limpio y si es exudado un suero claro, esto indica que el coágulo debe ser cortado. También provee una señal de la firmeza del gel. Ahora bien, desde 1932 comenzaron a utilizarse técnicas de mediciones objetivas para el monitoreo continuo de las propiedades de los geles. Los primeros, midieron los cambios de viscosidad durante la agregación de las micelas usando varios tipos de viscosímetros (Holter, 1932; Scott Blair y Oosthuizen, 1961). Berridge (1952), determinó el tiempo de floculación de las micelas a través de la observación visual de la agregación rotando un tubo. Las imágenes de microscopía electrónica se usaron para indicar la extensión de la agregación y coagulación (Hostettler et al., 1955; Green et al., 1978). Hardy y Fanni (1981), aplicaron fotometría de reflexión utilizando un colorímetro Hunterlab y la desviación de la luz fue observada con anterioridad a la coagulación. La leche expuesta a una suave sobre presión en un tubo en U y la firmeza leída en un capilar, fue propuesta por Scott Blair y Burnett (1958). En la leche sometida a una fuerza torsional, la respuesta del gel es monitoreada por varios tipos de sensores (Burnett y Scott Blair, 1963). Los métodos tromboelastográficos o lactodinamográficos, consisten en el movimiento de un cuerpo suspendido y sumergido en la muestra de leche (Frentz, 1965; Marcais, 1965; McMahon y Brown, 1982; Gervais y Vermeire, 1983). Un alambre en forma de T unido a un viscosímetro le permitió a Richardson et al. (1971) monitorear la viscosidad. Por entonces, Steinsholt (1973), utilizó un instrumento como el Instron Universal Testing Machine, para evaluar el proceso. La medida de la conductividad eléctrica durante la coagulación, fue propuesta por Tsouli et al. (1975). Posteriormente, Dejmek (1989), midió los cambios de conductividad eléctrica durante la coagulación en comparación con medidas de viscosidad. A través de la medida de la presión (manometría) se mide la oscilación hidráulica y la presión transmitida a la leche a través de un sensor (Vanderheiden, 1976). El sistema mecánico de Vanderheiden, es conocido como el Curd Firmness Tester (CFT). Bynum y Olson (1982), encontraron que su uso en controlar la firmeza al momento del corte podría mejorar la recuperación de grasa y caseína. Garnot et al. (1982), utilizaron el dispositivo para determinar la influencia de los niveles de caseína sobre el tiempo de corte del coágulo. También, la utilización de una fuente de luz a diferentes longitudes de onda denominada reflectancia difusa (Ustunol et al., 1991). Coagulación de la leche. Desarrollo de un dispositivo para el “monitoreo” online del proceso. Avances en la Argentina Diciembre 2012, Argentina 241 La geometría oscilatoria, es considerada un método no destructivo y para ello se utiliza un reómetro para aplicar ondas de oscilación sinusoidal (Tokita et al., 1982; Bohlin et al., 1984). La utilización de luz o reflectancia en el infrarrojo cercano (NIR). Un desarrollo de esas características es el Gelograph (Anonymous, 1983; O’Callaghan et al., 2000). El método del alambre caliente es una metodología no destructiva. Hori, (1985) observó los cambios de la viscosidad durante la coagulación enzimática, y demostró que el aumento de viscosidad de un fluido es proporcional a la elevación de la temperatura del alambre. En Argentina, Sbodio et al. (2002), utilizaron la misma metodología y pudieron determinar condiciones óptimas de temperatura, pH y concentración de quimosina para establecer el tiempo de corte. En sus conclusiones, consideran que un método objetivo y no destructivo en el monitoreo de la formación del coágulo y la metodología de superficies de respuestas, pueden ser recomendados para optimizar la coagulación de la leche. calidad y la consistencia. El otro sistema, muy utilizado comercialmente, consiste en dirigir luz infrarroja a la leche, a través de un cable de fibra óptica (Fibre-optic Reflectance). Los primeros dos sistemas utilizaron tecnología CoAgulite, fueron instalados en 1993 en Kentucky (USA). Fagan et al. (2007a,b), presentaron un sensor “Novel Light Backscatter” para el monitoreo continuo online de la coagulación y la sinéresis, con el objeto de mejorar el control del contenido de humedad de la cuajada. La tecnología propuesta muestra, no solamente su utilidad para controlar la coagulación y la sinéresis, sino también que podría ser empleada en el control de la humedad de la cuajada, las pérdidas de grasa y el rendimiento de la cuajada, mejorando el control del proceso durante la elaboración de queso (Fagan et al., 2008). Taifi et al. (2006), usando un método ultrasónico no intrusivo estudiaron la caracterización de la sinéresis y de la firmeza de un gel lácteo. El test de oscilación es un dispositivo rectangular que oscila hacia arriba y abajo. La resistencia mecánica ejercida por el gel es monitoreada continuamente mediante un equipo Instron Universal Testing Machine (Van Hooydonk et al., 1986). La utilización de sensores en el infrarrojo cercano online se usan para predecir respuestas esenciales en la sinéresis, por ejemplo rendimiento de suero, grasa y sólidos en suero y el contenido de humedad en la cuajada (Fagan et al., 2008). Mateo et al. (2009), reportaron la validación de un sensor de la sinéresis en el rango de la composición de la leche y de los parámetros del proceso. Al medir la impedancia eléctrica, Li et al. (2010), pudieron caracterizar el proceso de coagulación de la leche de soja, de singular importancia en la elaboración del tofu. En la actualidad, un novedoso sistema basado en el uso de la reflexión en el infrarrojo cercano (NIR), es propuesto para la determinación automática del tiempo de corte (Lyndgaard et al., 2012). El monitoreo de los cambios en el índice refractométrico de la leche durante la coagulación, fue estudiado por Korolczuk y Maubois (1988). Avances en el desarrollo de un dispositivo en Argentina Un dispositivo que utiliza un sistema mecánico, denominado Vatimer, fue diseñado por Richardson et al. (1985) y corresponde al uso de un sensor de oscilación vertical. Años después, Riddell-Lawrence y Hicks (1988), usaron una versión modificada para investigar el efecto de la firmeza sobre el rendimiento quesero. Horne y Davidson (1990,) al utilizar espectroscopía de difusión observaron que la movilidad molecular de la dispersión disminuye a medida que la leche comienza a coagular, resultando en un incremento del tiempo de relajación. La microscopía de campo oscuro incrementa el contraste de la imagen en comparación con una luz estándar, de esa forma se observa la coagulación (Ruettimann y Ladisch, 1991). El uso de ultrasonido de alta frecuencia, mayores a 1 MHz (Benguigui et al., 1994). Wade y Beattie (1999), aplicaron a la muestra un campo eléctrico alternativo. La espectroscopía de fluorescencia fue utilizada por Herbert et al. (1999), para monitorear la fluorescencia que emiten los residuos de triptofano durante la coagulación. El ultrasonido de baja frecuencia, en el rango de 50 a 100 Hz, fue usado por Nassar et al. (2001). Los instrumentos que más desarrollo y utilización comercial han tenido corresponden a aquellos denominados métodos del alambre caliente (Hot Wire Method) y aquel que utiliza luz en el infrarrojo cercano. Con el uso del principio del método del alambre caliente, el Optiset fue instalado en más de 100 tinas queseras en los primeros años de la década del 90. Se señaló entonces, que el sistema mejora la Desde hace seis años, en el marco de un proyecto CAI+D Especial (Universidad Nacional del Litoral, Santa Fe, Argentina), un grupo de investigación bajo la dirección del Profesor Titular Bqco. Oscar A. Sbodio, del área de estudios fisicoquímicos del Instituto de Tecnología de Alimentos (FIQ-UNL), conjuntamente con profesionales de la electrónica (Laboratorio de Electrónica, INTEC-CCTCONICET, Santa Fe, Argentina) están desarrollando un novedoso dispositivo. El mismo, tiene como principal objetivo su utilización en tina quesera industrial. Para su logro, se propusieron cumplir con todos los requerimientos de fortaleza, pulido sanitario, lavado en el lugar (CIP: clean in place), tratamiento con vapor (SIP: steam in place), que no sea destructivo, que no sea removido en las operaciones características de elaboración y, fundamentalmente, que permita el monitoreo de las respuestas esenciales, a saber: Tiempo de Coagulación (Tc), tiempo en el que se produce el cambio de signo de la derivada (tmax), Velocidad de Crecimiento del Voltaje (dV/dt) (“firmeza”) y Voltaje Máximo (Vmax) (“firmeza máxima”). Para el desarrollo del prototipo se realizaron los siguientes pasos: 1.Elección y diseño de un termoelemento para la construcción de la sonda térmica. SBODIO, O.A.1; REVELLI, G.R.2 242 REVISIONES 2.Elección de un dispositivo de medición de temperatura por termorresistencia de platino. 3.Elección del electrodo de medición de pH. 4.Elección del electrodo ión selectivo de medición de actividad Ca+2 específico. 5.Diseño, desarrollo y construcción de la electrónica asociada para proveer de corriente continua ultra constante a la sonda. Medición de la variación de la resistencia de la misma, sumado a la medición de temperatura del medio, del pH y del Ca+2 específico, sus relaciones para el monitoreo y el control de las variables, que a la vez pueda funcionar “standalone” y se pueda comunicar con el medio para enviar los datos a un sistema central de manera de permitir el manejo y la toma de decisiones en forma remota. 6.Desarrollo de un programa de aplicación (software) que pueda aprender en función de los datos que recibe, a determinar el tiempo de coagulación, la velocidad de crecimiento del voltaje, el máximo voltaje, el tiempo en que se alcanza el mismo, el tiempo de corte de la cuajada y una posible estimación de la microsinéresis. Para dar cumplimiento a los pasos 1 y 2, se trabajó con la opción que utiliza un termoelemento de platino bobinado sobre cerámica de manera que el alambre pueda dilatarse libremente. El alambre se encuentra bobinado en espiral y ubicado dentro de pequeños taladros pasantes realizados en cerámica, lo que le da algunos grados de libertad para su dilatación. El análisis de sus dimensiones permitió la elección de la vaina protectora. Sumergido en leche, el termoelemento fue excitado con el paso de una corriente continua elevada (200 mA o más) para usarlo como calefactor y medir la variación de la resistencia entre sus extremos a través de la medición de la diferencia de potencial. El calentamiento del termoelemento durante el cambio de estado al momento de la coagulación, nos permite medir los cambios de voltaje en función del tiempo. RIA / Vol. 38 / N.º 3 La termorresistencia seleccionada fue alojada en una vaina de protección apropiada que cumple con las normas establecidas para su uso en alimentos, tanto las 74-03 de la organización 3 A como las del EHEDG (European Hygienic Engineering and Design Group). La vaina (thermowell), de acero inoxidable 316 L con electropulido, permite su higiene en el lugar (CIP) y posee un espesor delgado, de manera de evitar los retardos en la información. Corresponde al modelo TW810 de Intempco Controls Ltd. de Canadá. La figura 1, muestra un corte esquemático de la sonda desarrollada. No se dan detalles de los distintos componentes en virtud de que el prototipo está en trámite de patentamiento. Los primeros ensayos, con el desarrollo a escala piloto, se realizaron utilizando leche descremada reconstituida (10,45%). Las respuestas obtenidas de voltaje en función del tiempo, se ilustran en la figura 2. El Tiempo de Coagulación (Tc), el Tiempo en el que se produce el cambio de signo de la derivada (tmax), la Velocidad de Crecimiento del Voltaje (dV/dt) (“firmeza”) y el Voltaje Máximo (Vmax) (“firmeza máxima”), observan excelentes repetibilidades. El ruido de la señal es muy bajo y por consiguiente la relación señal/ruido del voltaje muestra niveles porcentuales no significativos. CONCLUSIÓN La presente revisión muestra en detalle el proceso de la coagulación enzimática, ácida y el comportamiento de las proteínas solubles sometidas o no a tratamiento térmico. También, la posibilidad de su incorporación en la elaboración industrial de queso y yogurt. Los investigadores se preocupan desde hace décadas en el desarrollo de dispositivos que permitan el “monitoreo” online de la coagulación de la leche, utilizando diversos métodos de funcionamiento. En la actualidad, los dos principios que prevalecen refieren a la utilización de la reflexión de la luz en el infrarrojo y al del alambre caliente. En Argentina, investigadores de Figura 1. Corte esquemático del sensor. Coagulación de la leche. Desarrollo de un dispositivo para el “monitoreo” online del proceso. Avances en la Argentina Diciembre 2012, Argentina 243 Figura 2. Respuestas de voltaje en función del tiempo (coagulograma) para leche descremada reconstituida al 10,45%. la Universidad Nacional del Litoral y el INTEC-CCT-CONICET desarrollaron un sensor que cumple con los requerimientos para su utilización en tina industrial. Es decir, tiene la fortaleza suficiente, no es destructivo, puede ser higienizado en el lugar, no interfiere con las operaciones de corte y agitación y cumple con los requerimientos sanitarios. Las primeras pruebas en el laboratorio y en planta piloto son positivas. Su funcionamiento es simple y su construcción de bajo costo. BIBLIOGRAFÍA ANONYMOUS. 1983. Gelograph for measurement of milk gel’s formation and hardening. North European Dairy J. 49 (5), 114-115. BENGUIGUI, L.; EMERY, J.; DURAND, D.; BUSNEL, J.P. 1994. Ultrasonic study of milk clotting. Lait. 74 (3), 197-206. BERG VAN DEN, G. 1979. Increasing cheese yield by inclusion of whey proteins. The Netherlands Milk and Dairy Journal. 33, 210-211. BERRIDGE, N.J. 1952. 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Se recolectaron hojas totalmente expandidas, sin daños ni lesiones desde los 70 a 90 días después de plena floración (Plena flor: 15/08/2008) en dos edades de hoja (hoja con fruta formada el año anterior y hoja sin fruta del año en curso). Se realizaron las determinaciones de la concentración (g nutriente/100g MS) de N, P, K, Ca y Mg foliar. Los datos se sometieron a ANOVA, se tomó variedad y edad de hoja como factores fijos y concentración del nutriente como variable dependiente. La concentración de Mg dependió de la variedad, Misty presentó la mayor concentración de este nutriente con 0.30% Mg foliar, Emerald presentó 0.24 % y Jewel la menor concentración de 0.16 %Mg (p= 0.008). Hojas de mayor edad presentaron mayor concentración de Mg (p=0.009). Es necesario considerar estas diferencias a la hora de realizar diagnósticos nutricionales. Palabras claves: macronutrientes, concentración foliar, southern highbush, blueberry, Vaccinium corymbosum. ABSTRACT It is very important to define the appropriate tissue and sample time for nutritional diagnosis in order to prevent possible mistakes in taking decisions. There is little information about the mineral composition and nutrition of blueberries varieties in the producing areas in Argentina. The aim of this study was to determine the concentration of nutrients in blueberry leaves of commercial cultivars (Vaccinium corymbosum L. cvs Misty, Jewel and Emerald) in two different stages. Sampling was performed in commercials orchards located in Concordia, Entre Ríos Argentina in 2008. Fully expanded leaves without damage or injuries were collected from 70 to 90 days after full bloom (Full Bloom: 15/08/2008) in two leaf stages (leaf located in the previous season spring flush canes with fruit and leaf located in the current spring flush canes, without fruit). Leaf nutrient concentration (g/100 g DM) of N, P, K, Ca and Mg were determined. The data were analyzed with ANOVA, with cultivar and leaf age as fixed factors and leaf nutrient concentration as the dependent variable. The con- 1 EEA INTA Concordia. Estación Yuquerí CC34. Concordia, Entre Ríos. Correo electrónico: [email protected] Recibido 06 de octubre de 2010 // Aceptado 30 de marzo de 2012 // Publicado online 23 de mayo RIVADENEIRA, M. F.1 248 ARTÍCULOS RIA / Vol. 38/ N.º 3 centration of Mg depended on the variety with Misty having the highest concentration of 0.30% Mg, Emerald 0.24% and Jewel presented the lowest concentration of 0.16% Mg (p = 0.008). Older leaves had higher Mg concentrations (p = 0.009). It is necessary to consider these differences in sampling procedures and in making nutritional diagnosis. Keywords: southern highbush, blueberry, Vaccinium corymbosum. INTRODUCCIÓN En la Argentina el cultivo de arándano ha tenido una amplia difusión, siendo Entre Ríos una de las principales zonas productoras de este fruto. El departamento de Concordia, ubicado en el Noreste de esta provincia en 2011 tenía 1158 ha plantadas de arándano, según datos de la Asociación de Productores de Arándanos de la Mesopotamia Argentina, con las variedades Misty, Jewel y Emerald entre las más importantes en cultivo (representan el 54% de la superficie plantada). Esta gran expansión dio origen a una mayor necesidad de información respecto al crecimiento y al manejo del cultivo, especialmente en estas variedades. En la práctica, el conocimiento de las necesidades de la planta permitirán un control preciso del suministro de nutrientes, especialmente si se adoptan tecnologías flexibles como la fertirrigación y se monitorea la disponibilidad de nutrientes en el suelo o en las plantas (Tagliavini et al., 2005). El conocimiento de los nutrientes es de fundamental importancia y constituye una herramienta necesaria para realizar un manejo sustentable de la fertirrigación del cultivo. El muestreo foliar es uno de los pasos más importantes, ya que la mayor variabilidad en el análisis de planta recae en él. Por esta razón es importante, a la hora de realizar diagnóstico y comparaciones nutricionales, definir el momento y el órgano adecuado de muestreo para evitar posibles errores en la toma de decisiones. A su vez, es necesario considerar que cada nutriente presenta una estacionalidad diferente, la cual puede depender también de la variedad. En el caso del cultivo de arándano, la práctica común de muestreo foliar se realiza en primavera-verano, momento en el cual se encuentran en planta hojas de diferentes edades, lo que puede llevar a errores en la toma de muestras. La composición mineral de hojas de arándanos es menor que la de otros frutales (Tamada, 2002). En el estudio de Ballinger (1966), se encontró que de los nutrientes presentes en las hojas de arándanos el N es el que estuvo presente en mayor cantidad, seguido por el K, Ca, Mg, P y Na. Mientras que Eck et al. (1989), encontraron síntomas de deficiencia de N, Mg y Fe en producciones a campo. Los arándanos tienen bajos requerimientos de Ca en comparación a otros frutales de clima templado, con valores de 0.3 a 0.8% en hoja (Hanson y Berkheimer, 2004), comparados a los 1.1 a 2.5% que posee el manzano, el cerezo y la pera; y a 1% en el durazno (Sánchez, 1999). Si bien existen numerosos estudios que determinaron el contenido de nutrientes en hoja de arándano (Ballinger, 1966; Hanson y Hancock, 1996; Yang, 2002; Tamada, 2002), éstos fueron realizados en otras regiones (muchas veces sin identificar la variedad evaluada o el tipo de crecimiento) contando con otras características climáticas y de manejo. Por eso existe poca información acerca de la composición mineral o de la nutrición de las variedades presentes en la zona productoras de este cultivo de Argentina. El objetivo de este ensayo consistió en determinar la concentración de nutrientes en hojas de arándano de diferentes edades en tres variedades comerciales difundidas en Concordia. MATERIALES Y MÉTODOS El muestreo se realizó en 2008 en dos quintas comerciales ubicadas en el departamento de Concordia (provincia de Entre Ríos, Argentina), en lotes en producción con buen estado nutricional y sanitario. Los suelos pertenecen al orden Entisol, serie Yuquerí Chico, profundos de textura areno-franca, sin distinción de horizontes, materia orgánica 0.5-0.6%, pH 4.5-5.5 y baja CIC. El manejo cultural de ambas incluyó fertirriego, control de heladas por aspersión y poda de verano. Se recolectaron dos estados de desarrollo de hojas (hoja con fruta formada primavera anterior; hoja sin fruta menor a un año). Se tomaron hojas totalmente expandidas, sin daños ni lesiones desde los 70 a 90 días después de plena floración (Plena flor: 15/08/2008). Se tomó una hoja de cada 10 plantas de la fila y se continuó con la recolección hasta alcanzar 100 hojas. Las hojas se llevaron a estufa a 65 ºC hasta obtener peso seco y, posteriormente, se realizaron las determinaciones de cada nutriente. El contenido de nitrógeno se determinó por el procedimiento Kjeldahl. Para los otros elementos (P, K, Ca y Mg), las determinaciones se realizaron de las muestras llevadas a mufla a 600 ºC por 6 h, y disueltas en HCL. El P total se determinó por colorimetría. El contenido de K se determinó por fotometría de llama; el Ca por el método EDTA y el Mg por amarillo de Tiazol. Los datos se sometieron a un análisis de varianza (ANOVA), y se tomaron variedad y edad de hoja como factores fijos y la concentración del nutriente como variable dependiente y las diferencias entre las medias se determinaron por comparación múltiple de Tukey HSD. RESULTADOS Y DISCUSIÓN No se encontraron diferencias en la concentración de N, P, K o Ca entre variedades evaluadas o desarrollo de hoja Concentración de nutrientes en hojas de diferente estado de desarrollo en arándano Diciembre 2012, Argentina 249 muestreada (tabla 1). Mientras que la concentración de Mg dependió de la variedad evaluada (p= 0.008) o del tipo de hoja muestreada (p=0.009) (tabla 2). Si bien no hay datos de concentraciones de nutrientes específicos para estas variedades, se puede mencionar que los valores encontrados se corresponden a los de la literatura para Misty y dentro del rango de suficiencia para este tipo de arándano. Sin embargo, en Jewel y Emerald estarían por encima de los niveles considerados óptimos para Ca (0.3-0.8% Hanson y Hancock, 1996). Los arándanos, de por sí, requieren bajo Ca y puede haber variaciones en la concentración de Ca foliar (Hart et N P K Ca Mg Misty Jewel Emerald 1,55 2,13 1,76 0,12 0,14 0,12 0,52 0,37 0,48 0,94 0,58 0,92 0,30 b 0,16 a 0,24 ab ES 0,26 0,04 0,08 0,13 0,02 Tabla 1. Concentración de nutrientes (g/100 g MS) en hojas de arándano. Media y Error Estándar (ES) de variedades Misty, Jewel y Emerald (n=4). Letras indican diferencias p<0.05 entre variedades. Hoja con fruto Hoja sin fruto 1,75 1,88 1,00 0,64 0,42 0,49 0,17 N P K Ca CONCLUSIONES La composición mineral N, P, K y Ca no se diferenció entre las variedades Misty, Jewel y Emerald, aunque sí la concentración de Mg. Misty presentó la mayor concentración de este nutriente y Jewel la menor. A mayor edad de hoja se presentó mayor concentración de Mg, dato a considerar para evitar errores en el órgano de muestreo. Este estudio muestra los primeros datos de concentración de nutrientes en arándano para Argentina. Debido a que se trata de datos preliminares, es necesario continuar con los muestreos para contar con información de utilidad a la hora de realizar diagnósticos nutricionales. 0,19 Mg Figura 1. Concentración de nutrientes (g nutriente/100 g MS) en hojas de diferente desarrollo de arándano: Con fruto (hojas tomadas de ramas con fruto y mayores al año) y Sin fruto (hojas de ramas sin fruto, menores a 6 meses). Media de var Misty, Jewel y Emerald (n=6). *indica p<0.05 entre desarrollo de hoja. Fuente Durante la primavera, a partir de los 70 DPF se encuentran en planta dos edades de hojas, las provenientes de ramas con fruto, formadas en la temporada anterior, y las hojas de ramas sin fruto, formadas en la primavera en curso. Las hojas de mayor edad con fruto presentaron mayor concentración de Mg (figura 1), coincidente con los resultados de Ballinger (1966), quien encontró que el Mg tiende a acumularse a medida que la hoja crece y madura. Es necesario, por lo tanto, considerar esta diferencia a la hora de realizar un muestreo en esta época del año, unificando el muestreo y recolectando solamente hojas totalmente desarrolladas formadas en la temporada. * 0,28 0,08 al., 2006). Aunque, sin ser significativos, Misty presentó un promedio de N en hoja inferior y una mayor concentración de K y Ca, la variedad Jewel presentó los mayores valores de N y P y menores de K, Ca y Mg, mientras que Emerald presentó valores intermedios de nutrientes en hoja. Suma de cuadrados AGRADECIMIENTOS A la Estación Experimental Agropecuaria (EEA) Concordia del Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) por financiar parte del trabajo. A los pasantes Gastón Arriola y Juan Pablo Luna por la colaboración en la recolección de muestras. GL Cuadrado medio Cociente-F P-Valor 0,037 0,022 2 1 0,018 0,022 12,17 14,74 0,008 0,009 0,005 0,009 0,073 2 6 11 0,003 0,002 1,69 0,262 Efectos principales A:Variedad B:hojas Interacciones AB Residuos Total (corregido) Tabla 2. Análisis de Varianza para Concentración de Mg foliar. Los cocientes F están basados en el error cuadrático medio residual RIVADENEIRA, M. F.1 250 ARTÍCULOS BIBLIOGRAFÍA RIA / Vol. 38/ N.º 3 SÁNCHEZ, E E. 1999. Diagnóstico Nutricional. Ch7. Nutrición APAMA, 2011. Censo de productores de arándano. BALLINGER, W.E. 1966. Seasonal Trends in Wolcott Blueberry (Vaccinium corymbosum L.) Leaf and Berry Composition. Tech. Bul. no. 173 (North Carolina Agricultural Experiment Station): 24 p. ECK, P.; GOUGH, R.E.; HALL, I.V.; SPIERS, J.M.; 1989. Blueberry Management. Chapter 7. Small Fruit Crop Management. Eds. GALLETA, G. J.; HIMELRICK, D. G. HANSON, E.J.; BERKHEIMER, S.F. 2004. ��������������������� Effect of Soil Calcium Applications on Blueberry Yield and Quality. 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El objetivo del presente estudio fue evaluar dos procedencias de cebadilla chaqueña (Argentina y Uruguay) para biomasa acumulada e indicadores de calidad nutritiva en dos períodos del año (verano-otoño y otoño-primavera). Se compararon cinco clones uruguayos (U) y cinco argentinos (A), dispuestos al azar en surcos distanciados a 1 m entre sí, con 10 plantas cada uno. Se determinó biomasa acumulada por planta (B) y calidad, midiendo Fibra Detergente Neutra (FDN), Proteína Bruta (PB) y Digestibilidad de la Materia Seca (DMS) en dos momentos del año. En general, la biomasa fue de baja calidad debido al momento en que se realizaron los cortes, lo que limita el alcance de los resultados. Sin embargo, las diferencias observadas entre los clones en este estado de desarrollo podrían indicar la existencia de variación entre genotipos de cebadilla chaqueña U y A en biomasa y calidad nutritiva. En biomasa acumulada no se observó efecto significativo de origen. En todas las variables de calidad evaluadas en verano-otoño, se encontraron diferencias significativas entre orígenes. En otoñoprimavera, las diferencias entre orígenes fueron significativas para DMS. Los clones U presentaron mayor PB, menor FDN y mayor DMS. Dentro de cada origen, los argentinos presentaron menos diferencias que los uruguayos, tanto en biomasa acumulada como en calidad. Para ninguno de los clones A o U se encontró coincidencia entre mayor biomasa y mayor calidad. Palabras clave: gramíneas de invierno, biomasa acumulada, fibra, proteína bruta. ABSTRACT Bromus auleticus (“chaqueña” bromegrass) may be considered as one of the most valuable forage species for the Southern Cone. This species shows variation among populations, determined in diverse vegetative characters, which could result in differences in production and forage quality. The objective of this study was to evaluate two origins of Bromus auleticus (Argentina and Uruguay) for characters of biomass accumulated and quality in two periods of the year (Summer-Autumn and Autumn-Spring). Five Uruguayan (U) and Argentine (A) clones were compared, it were randomly arranged in rows spaced one meter of each other, with 10 plants each one. Biomass accumulated per plant (B) and biomass quality were determined in two times of the year measuring neutral detergent fiber (NDF), crude protein (CP) and dry mater digestibility (DMD). In general, quality of biomass was poor due to time cuttings, limiting the scope of the results. However, differences between the clones in this stage of development could be indicating the presence of variation among genotypes Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de La Pampa, Uruguay 151, (6300) Santa Rosa, La Pampa. INTA EEA Anguil “Ing. Agr. Guillermo Covas”, CC11, (6326) Anguil, La Pampa. Correo electrónico: [email protected] 3 Facultad de Agronomía, Universidad Nacional de La Pampa, Ruta 25, Santa Rosa, La Pampa. 1 2 Recibido 07 de enero de 2011 // Aceptado 18 de mayo de 2012 // Publicado online 13 de junio de 2012 BUSTAMANTE, E.G.R.1; RUIZ, M.A.1,2; MORICI, E.1,3; BABINEC, F.J.2,3; PORDOMINGO, A.B.1,2 252 ARTÍCULOS RIA / Vol. 38 / N.º 3 of “chaqueña” prairie grass U and A in biomass and nutritional quality. Significant effect of origin for B was not observed. In all biomass quality variables evaluated in Summer-Autumn, significant differences between origins were found. In Autumn-Spring, differences between origins were significant in DMD. U clones showed more CP, less NDF and higher DMD. Within each origin, A showed less differences than U both in B and quality. Concerning A or U clones, no coincidence between high biomass and high quality was found. Keywords: winter grasses, biomass accumulated, fiber, crude protein. INTRODUCCIÓN La cebadilla chaqueña (Bromus auleticus Trin. ex Nees) es considerada una de las forrajeras más valiosas en el Cono Sur (Traverso, 2001; Millot, 2001), por lo que se recomiendasu incorporación a pasturas implantadas por su importante crecimiento en otoño-invierno y su elevada persistencia (Olmos, 1993; Costa et al., 1995; Sáenz et al., 1995; Mombelli y Spada, 1996; Romero y Ruiz, 1997; Ruiz et al., 2004). En Argentina, se extiende en una vasta área pratense, que hoy ocupa las provincias de La Pampa, Buenos Aires, Córdoba, Santa Fe, Entre Ríos y Corrientes; está presente en todo el territorio uruguayo, y en los estados brasileros de Rio Grande do Sul y Santa Catarina (Steibel et al., 1997; Gutiérrez y Pensiero, 1998; Millot, 2001). La aceptabilidad y preferencia por parte del ganado se evidencia por su disminución en la comunidad natural debido a los pastoreos intensos y continuos (Ragonese, 1985). Su forraje se ha calificado como “bueno” a “excelente” (Berreta et al., 1990; Olmos, 1993; Gasser et al., 1996). En el área ganadero-agrícola (Argentina, litoral uruguayo y sur de Brasil), ya casi ha desaparecido por efecto del laboreo continuo (Millot, 2001). La especie presenta variación entre poblaciones para características como producción de semilla (Millot et al., 1990; Ruiz y Covas, 2007, Pinget et al., 2007), vigor de plántula (Ré et al., 2006), y diversos caracteres vegetativos entre ellos pilosidad, ancho y largo de hojas y hábitos de crecimiento (Millot et al., 1990). En las accesiones del Banco de Germoplasma de la EEA Anguil del INTA se han observado diferencias en el ancho y color de las hojas (Traverso, 2001). Estos caracteres podrían traducirse en diferencias de producción y calidad de forraje (Methol y Freire, 1990); lo cual también ha sido sugerido por De Battista y Costa (1998). El objetivo de este trabajo fue evaluar dos procedencias, Argentina (A) y Uruguay (U), de cebadilla chaqueña para biomasa acumulada e indicadores de calidad nutritiva en dos períodos del año (verano-otoño y otoño-primavera). Para su eventual empleo en futuros planes de mejoramiento y en particular para su aprovechamiento como forraje diferido en pasturas asociadas y reintroducción a campo natural. de 200 clones caracterizados previamente en base a caracteres foliares, eligiéndose aquellos considerados más representativos de cada grupo: hojas de color verde glauco con un ancho de 2 a 6 mm en las poblaciones de Argentina y de color verde oscuro con 6-10 mm de ancho en las de Uruguay (Traverso, 2001). Las plantas fueron extraídas de parcelas de regeneración de materiales del Banco de Germoplasma del INTA EEA Anguil. Estas matas se transplantaron (2001) en surcos no replicados, distanciados a 1 m entre sí, dispuestos al azar; cada clon contaba con 10 plantas separadas 0,50 m. Los clones recibieron un corte de limpieza el 28 de diciembre de 2007. La temperatura media durante el primer período de acumulación de biomasa fue de 20,6 ºC y de 12,9 ºC en el segundo. Las precipitaciones ocurridas durante el transcurso del ensayo fueron de 475 mm. Las lluvias mensuales se indican en la figura 1 junto a las medias históricas; si bien el total anual fue similar al histórico (2008= 623 mm, media histórica= 664 mm), en 2008, fueron más abundantes las precipitaciones de enero y febrero y escasas las de marzo y abril. El suelo donde se ubicó el ensayo era de tipo Haplustol éntico, con 41,86 ppm de fósforo y 0,12% de nitrógeno, una capacidad de campo de 15,7% y punto de marchitez permanente de 11,6%. Figura 1. Lluvias en Anguil (La Pampa) durante 2008 y media histórica 1921-2006. Determinaciones MATERIALES Y MÉTODOS Se trabajó con cinco clones uruguayos de cebadilla chaqueña y cinco argentinos, pertenecientes a una colección Se determinó el material acumulado en cuatro plantas por clon mediante corte manual con hoz a ras del suelo. Los cortes se realizaron en dos oportunidades luego del corte de limpieza del 28 de diciembre 2007: 11 de abril Biomasa acumulada e indicadores de calidad nutritiva en cebadilla chaqueña (Bromus auleticus Trinius ex Nees) Diciembre 2012, Argentina 253 (1631 ºCd) y 29 de octubre (1466 ºCd). En adelante, ambas fechas de corte se denominarán Verano‑Otoño y OtoñoPrimavera. El material cosechado se secó en estufa a 60 ºC por 48 horas y se pesó para determinar la biomasa acumulada por planta (g MS/planta-1). Una alícuota del material secado se molió en un Molino Wiley (malla 1 mm) para análisis de calidad nutritiva: proteína bruta (PB; método Kjeldahl; AOAC, 1990), FDN y FDA (Goering y Van Soest, 1970). La digestibilidad de la MS (DMS) se calculó aplicando la fórmula DMS= 88,9 x (0,779 x %FDA), (Moore y Undersander, 2002). Análisis estadístico Como los clones no estaban replicados, se usó una metodología derivada de la recomendada para ensayos aumentados (Wolfinger et al., 1997). Los resultados se analizaron mediante un modelo mixto con efectos fijos de origen, argentino (A) y uruguayo (U), y aleatorios de clones dentro de cada origen. Para ello se utilizó el PROC MIXED de SAS (1997), empleando el cuadrado medio de clones dentro de procedencias para probar la existencia de diferencias entre orígenes (Singer, 1998). Se calcularon las medias de orígenes, que se compararon con una prueba de F; y para los clones se obtuvieron los predictores (BLUPs: Best Linear Unbiased Predictor) y sus intervalos de confianza (α=0,10), que se usaron en las comparaciones respectivas (Panter y Allen, 1995a, 1995b, Littell et al., 1996). Clon B (g/pl.) RESULTADOS Al momento de efectuar los cortes había material senescente junto con verde, sin restos de inflorescencias en otoño, mientras que en primavera las plantas se encontraban en principios de panojamiento (panoja no totalmente emergida). No se detectaron diferencias significativas entre orígenes en biomasa acumulada en ninguno de los cortes. Los clones argentinos acumularon similar cantidad de biomasa en el corte Verano‑Otoño y entre los uruguayos, U102 fue el que tuvo más biomasa acumulada, diferenciándose de U191. Los clones argentinos no difirieron entre sí en el corte Otoño‑Primavera y entre los uruguayos, U102 presentó mayor biomasa, diferenciándose del resto (tabla 1). La calidad de la biomasa acumulada (tabla 1) en el corte Verano‑Otoño difirió entre orígenes en todas las variables evaluadas. En cambio, el corte Otoño‑Primavera sólo mostró diferencias entre orígenes en DMS. Las diferencias entre orígenes para proteína bruta fueron significativas en Verano‑Otoño, los clones uruguayos fueron los de mayor proteína, mientras que los argentinos presentaron 1,37% menos. En Otoño-Primavera, no se encontraron diferencias significativas entre orígenes. En Verano-Otoño, entre los clones argentinos, el de mayor porcentaje de proteína fue A167, el cual difirió de A176. Entre los clones uruguayos, U191 fue el de mayor proteína, y difirió de U189 (tabla 1). En Otoño-Primavera, los clones argentinos de mayor proteína fueron A167 y A192, estos diMS (%) FDN (%) DMS (%) PB (%) Verano-Otoño Argentina Uruguay Otoño-Primavera Argentina Uruguay 167 71,48 69,56 78,03 47,68 6,28 176 77,55 74,35 78,45 47,70 5,07 184 71,81 68,03 76,58 48,87 6,19 192 82,79 70,19 76,45 49,49 6,06 196 90,85 70,71 78,55 48,02 5,61 102 126,43 61,39 74,45 52,41 6,93 128 94,67 61,74 75,56 51,98 7,03 130 94,83 61,04 74,19 53,07 7,46 189 89,29 66,64 77,01 50,92 6,66 191 71,30 66,13 73,42 52,28 8,02 167 22,15 41,96 75,40 54,96 11,12 176 17,28 43,67 75,04 53,49 8,94 184 21,84 45,38 74,97 56,40 10,38 192 26,02 44,59 78,01 57,42 11,00 196 17,38 42,51 76,44 56,45 10,61 102 67,13 42,38 72,96 57,90 10,19 11,23 128 44,23 42,16 73,71 59,00 130 38,18 43,48 73,47 56,60 9,52 189 24,22 43,92 77,08 58,06 11,86 191 21,44 42,79 75,19 60,14 12,07 Tabla 1. Predictores (BLUPs) para biomasa acumulada (B), proteína bruta (PB), fibra detergente neutra (FDN) y digestibilidad de la materia seca (DMS) en clones provenientes de dos orígenes de cebadilla chaqueña. BUSTAMANTE, E.G.R.1; RUIZ, M.A.1,2; MORICI, E.1,3; BABINEC, F.J.2,3; PORDOMINGO, A.B.1,2 254 ARTÍCULOS RIA / Vol. 38 / N.º 3 Figura 2. Relación entre biomasa y proteína bruta en clones uruguayos y argentinos. firieron de A176. Entre los uruguayos, U189 y U191 fueron los de mayor PB, y difirieron de U130. Teniendo presente que el contenido proteico de una cubierta vegetal se diluye en la medida en que aumenta la biomasa acumulada (Gastal y Lemaire, 2002), en mayor grado si hay material muerto o inflorescencias, y que esta dilución es consecuencia del incremento de la proporción de tejido estructural en detrimento de los tejidos donde se ubica la mayor parte del N, se realizó una relación entre biomasa y PB. La figura 2, muestra la relación entre la biomasa por planta y PB para los clones de los dos orígenes en ambos cortes. Puede verse que la relación sigue aproximadamente la misma tendencia, a excepción del corte Otoño-Primavera para los clones argentinos, como resultado de la escasa variabilidad en biomasa acumulada que induce una relación errática. Sólo si se consideraran en conjunto los dos cortes, la relación negativa entre biomasa y proteína es significativa. Comparados a similar biomasa los genotipos uruguayos evaluados presentaron mayor %PB (y %N) que los argentinos. La diferencia parece reducirse a bajas biomasas. Sin embargo, este tipo de comparaciones deberían hacerse a similar biomasa viva acumulada, y en este trabajo, en ambos cortes, el contenido de N observado es propio de pasturas con desarrollo avanzado y con baja proporción de láminas, donde se ubica la mayor parte del N de las plantas (Evans, 1983). Se detectaron diferencias significativas en FDN entre orígenes en el corte Verano‑Otoño, donde los clones argentinos presentaron mayor FDN que los uruguayos. En el corte Otoño‑Primavera no se detectó diferencias entre orígenes. Mientras en el corte Verano‑Otoño los clones argentinos fueron similares entre sí, el clon uruguayo U191, que difirió de U189, presentó la menor FDN. En el corte Otoño‑Primavera los clones argentinos no difirieron entre sí, en tanto que entre los uruguayos, U189 fue el de mayor FDN y difirió de 102, 128 y 130. Tanto en el corte Verano‑Otoño como en Otoño‑Primavera, la DMS fue significativamente superior en los clones de Uruguay que en los argentinos. En el primer caso los clones argentinos no difirieron entre sí en DMS y entre los uruguayos, U130 fue el de mayor DMS, y difirió de U189. En el segundo, los clones argentinos de mayor DMS fueron A184, A192 y A196, los cuales difirieron de A176. Entre los uruguayos, U191 fue el de mayor DMS, y difirió de U130. DISCUSIÓN Las forrajeras templadas de uso corriente en el país presentan una vida media foliar de entre 500 y 600 ºCd (Agnusdei et al., 1998). Esto indica que cuando el intervalo entre cosechas excede dicho lapso, la acumulación neta tenderá a alcanzar un techo como consecuencia de la muerte de las hojas más viejas. Considerando que los periodos de acumulación de esta experiencia duraron 1631 y 1466 ºCd, los valores de biomasa acumulada no deben tomarse como estimadores precisos de la productividad de los materiales. En este trabajo se han observado diferencias en biomasa acumulada en los clones uruguayos, no así entre los argentinos. Variaciones entre y dentro de un cultivar para contenidos de fibra y digestibilidad han sido reportados en otras especies como alfalfa, sugiriéndose la posibilidad de realizar mejoramiento a partir de dichos caracteres (Julier et al., 2000). Para poblaciones de cebadilla chaqueña tanto de Argentina como de Uruguay, se ha indicado la existencia de una importante variación en caracteres foliares. Entre ellos largo, ancho de hoja, pilosidad, como así también en el porte de las plantas (Methol y Freire, 1990; Millot et al., 1990; Traverso, 2001). Todos estos caracteres sugieren la existencia de diferencias entre poblaciones para biomasa y calidad nutritiva. Sin embargo, generalmente, las evaluaciones se han llevado a cabo solamente con un cultivar Biomasa acumulada e indicadores de calidad nutritiva en cebadilla chaqueña (Bromus auleticus Trinius ex Nees) Diciembre 2012, Argentina y/o población mejorada (Olmos, 1993; Costa et al., 1995; Sáenz et al., 1995; Mombelli y Spada, 1996; Romero y Ruiz, 1997; Ruiz et al., 2004). Los resultados muestran el efecto negativo que tiene la excesiva acumulación de biomasa sobre la calidad nutritiva del forraje. Por ejemplo, se detectó mayor contenido de FDN en los clones argentinos que en los uruguayos y el rango general se ubicó entre 73 y casi 79%. Se trata de niveles muy elevados, propios de un forraje en avanzado estado de madurez, con alto contenido de material senescente y fracciones estructurales. Similares consideraciones valen para los parámetros DMS (menores a 58%) y PB (rango: 5‑12%). Esto explicaría la alta proporción de FDN, baja DMS y los bajos valores de PB, los cuales son característicos de pasturas con alto contenido de material senescente. En hojas adultas, pasado su período de crecimiento, podría haber ocurrido una exportación de compuestos solubles, con un incremento de FDN (Avila et al., 2010), lo cual puede aún haberse agravado por el déficit hídrico (Fulkerson et al., 2007). De hecho, los valores de FDN hallados en este trabajo, son superiores a los reportados para otras gramíneas de invierno como Bromus inermis Leyss entre otras, y aún superiores que los reportados para especies C4 (Buxton y Redfeam,1997). Los valores de proteína y DMS, en ambos períodos, fueron también elevados comparados a otras determinaciones realizadas en gramíneas C3, entre ellas Festuca arundinacea, Dactylis glomerata y Bromus wildenowii (Fulkerson et al., 2007). Esto es debido, en Verano-Otoño, al prolongado período de acumulación de biomasa más la sequía y, en Otoño-Primavera, se suma el desarrollo reproductivo, ya que el forraje estaba en principios de panojamiento. En diferentes trabajos de Argentina y Uruguay, se ha encontrado un rango amplio de valores de PB que incluyen niveles inferiores a los requerimientos para un buen funcionamiento ruminal (8%) hasta niveles altos (21%), aunque siempre referidos a un único cultivar o población nativa (Costa et al., 1995; De Battista y Costa, 1998; Romero y Ruiz, 1997; Olmos, 2003; Ruiz et al., 2004). Una de las causas de la variabilidad observada es que algunas veces los ensayos fueron fertilizados. Si bien se han indicado diferencias en la anatomía y proporción de tejidos foliares en genotipos de cebadilla chaqueña, en dichos trabajos no se han realizado análisis de PB (Methol y Freire, 1990; Millot et al., 1990; Gasser et al., 2005). Al igual que en la Argentina, en campos naturales de Uruguay se encontraron valores de proteína entre 9% a 15% (Olmos,1993), y en pasturas cultivadas con fertilización entre 10% y 21% (Costa et al., 1995; Olmos, 1993). Los %PB de cebadilla chaqueña Pampera INTA en tres ambientes del caldenal pampeano presentaron un rango de 7 a 11% PB (Ruiz et al., 2004). Estos últimos valores, son los más cercanos a los hallados en el presente estudio, donde el suelo no fue fertilizado, ni tampoco recibió riego. Los mayores valores de los clones uruguayos VeranoOtoño posiblemente tengan su explicación en las características foliares, hoja más ancha y de un color verde más intenso, lo cual deberá confirmarse en trabajos posteriores donde se evalúe solamente la biomasa verde. 255 En cebadilla chaqueña, algunos autores han sugerido la posible existencia de variación en digestibilidad y proteína (Methol y Freire, 1990; De Battista y Costa, 1998). En este trabajo, se ha encontrado que los genotipos uruguayos presentaron mayor DMS que los argentinos, lo cual estaría relacionado con la morfología foliar; estos últimos presentaban hojas más angostas y pubescentes (Methol y Freire, 1990; Gasser et al., 2005). CONCLUSIONES La calidad nutritiva del forraje fue muy baja en todos los casos debido a los prolongados períodos de acumulación aplicados, con valores de FDN mayores a 72%, de DMS menores a 58% y de PB de 5‑12%. Se detectaron diferencias entre clones de origen uruguayo y argentino que sugieren la existencia de variación genotípica en los materiales de cebadilla chaqueña evaluados. Los clones uruguayos presentarían mayor PB, menor FDN, y mayor DMS. Dentro de cada origen, los clones argentinos fueron más similares entre sí que los uruguayos. BIBLIOGRAFÍA AGNUSDEI, M.G.; MAZZANTI, A.; COLABELLI, M.; LABREAUX, M. 1998. Fundamentos para el manejo del pastoreo de pastizales y pasturas cultivadas de la Pampa Húmeda Bonaerense. CERBAS, INTA EEA Balcarce. Boletín Técnico N.º 147. 16 p. AOAC. 1990. Official methods of análisis (15th Ed.) Washington, DC. AVILA, R.E.; DI MARCO, O.N.; AGNUSDEI, M.G.; MAYORAL, C. 2010. 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Agron. J. 89:856-859. Biomasa acumulada e indicadores de calidad nutritiva en cebadilla chaqueña (Bromus auleticus Trinius ex Nees) Diciembre 2012, Argentina 257 Efecto de la aplicación foliar de calcio sobre algunos atributos de calidad en frutos de melón BOUZO, C.A. 1; CORTEZ, S.B.2 RESUMEN La fertilización foliar puede constituir una importante práctica agronómica para incrementar la concentración de calcio de los frutos. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la utilización de algunos fertilizantes cálcicos en aspersión foliar, en diferentes ambientes, sobre la calidad de frutos de melón. Los experimentos de campo fueron realizados en cinco localidades en la región central de la Argentina (Colón, Coronda, Ángel Gallardo, Esperanza y Media Agua) durante el período 2009-2010. Las soluciones cálcicas fueron aplicadas en cinco oportunidades, desde el inicio de la fructificación, con una frecuencia semanal entre aplicaciones. Los tratamientos fueron: i) testigo sin fertilizar; ii) nitrato de calcio (3 g L-1); iii) EDTA Cálcico Amónico (5 cm3 L-1) y calcio orgánico (40 cm3 L-1). Las mediciones realizadas en los frutos luego de la cosecha fueron: Firmeza Interna (IF) y Externa (EF) (kg), Concentración de Sólidos Solubles (SSC) (%), Peso de los Frutos (W) (kg) y concentración de calcio en la corteza y pulpa (%). Excepto para Media Agua, la aplicación de nitrato de calcio permitió obtener, en promedio, incrementos de la IF y EF de 40% y 60% respectivamente, en comparación con el tratamiento testigo. Los tratamientos con soluciones cálcicas no incrementaron el SSC y W de los frutos. A excepción de Media Agua, en las otras localidades se incrementó el contenido de calcio en la corteza. Estos resultados indicarían que el uso de fertilizantes cálcicos foliares puede mejorar la calidad de los frutos de melón, aunque dependiendo de las condiciones ambientales de la localidad. Palabras clave: Cucumis melo L., fertilización foliar, firmeza de fruto, concentración de sólidos solubles. ABSTRACT Foliar fertilization plays an important role in increasing the calcium content of certain fruits. The aim of this study was to evaluate the effects of foliar application of some calcium fertilizers in different environments over melon quality and yield. The field experiments were conducted at five towns located in the central region of Argentina (Colón, Coronda, Angel Gallardo, Esperanza and Media Agua) during the 2009-2010 production season. Foliar sprays with calcium solutions were applied on five different occasions at the start of fruiting, with an approximate frequency of one application per week. The treatments were: i) control (no fertilizers); ii) calcium nitrate (3 g L-1); iii) calcium ammonium EDTA (5 cm3 L-1) and organic calcium (40 cm3 L-1). In fruits, the measurements taken after harvest were: Internal (IF) and External Flesh Firmness (EF) (kg), Soluble Solid Concentration (SSC) (%), Fruit Weight (W) (kg) and calcium content in rind and pulp (%). Except for the Media Agua locality, the application of calcium nitrate increased the IF and the EF in 40% and 60%, respectively, compared to the control treatment. Treatments with calcium solutions did not increase the SSC and the W of fruit. With the exception of Media Agua, in the other localities it was possible to observe an increase in the rind Universidad Nacional del Litoral, Facultad de Ciencias Agrarias, Departamento de Producción Vegetal, Kreder 2805, S3080HOF Esperanza, Santa Fe, Argentina. Correo electrónico: [email protected]. 2 EEA INTA Pocito, AER Media Agua, Barboza S/N, 5435, Villa Media Agua, Sarmiento, San Juan. 1 Recibido 05 de octubre de 2011// Aceptado 06 de julio de 2012// Publicado online 18 de julio de 2012 BOUZO, C.A. 1; CORTEZ, S.B.2 258 ARTÍCULOS RIA / Vol. 38 /N.º 3 calcium content. These results indicate that the effect of calcium foliar fertilizers may represent an improvement in the fruit quality of melon, though dependent on local environmental conditions. Keywords: Cucumis melo L., foliar fertilization, fruit firmness, soluble solid concentration. INTRODUCCIÓN los trastornos fisiológicos (Lötze y Theron, 2006), pero la tasa de éxito varía en función de la predisposición natural a los síntomas, la estación de crecimiento, el cultivar y las condiciones ambientales. Existe evidencia que sugiere que el aumento de calcio en frutos tras la aplicación de los aerosoles es normalmente baja (Neilsen y Neilsen, 2002) o incluso inexistente. Además, estos aerosoles no tienen ningún efecto consistente en la firmeza de la pulpa de la fruta, el contenido de sólidos solubles y la pérdida de peso natural (Lanauskas y Kvikliené, 2002). La adecuada nutrición de la planta es muy importante para su estado de salud, productividad y calidad de frutos. El contenido adecuado de nutrientes y sus relaciones con el suelo son la base del buen estado nutricional. Sin embargo, determinadas condiciones pueden interrumpir la captura de nutrientes, incluso en suelos ricos (Lanauskas et al., 2006). Los fertilizantes de aplicación foliar usualmente compensan o suplementan esta carencia (Erdal et al., 2004; Lanauskas et al., 2006). La nutrición foliar con fertilizantes con calcio juega un papel importante en el aumento de los contenidos de nutrientes en vegetales durante la fructificación. El objetivo de este trabajo fue evaluar los efectos de la aplicación foliar de algunos fertilizantes de calcio en la calidad de fruta de melón y rendimiento. El calcio (Ca), es un elemento que se diferencia de otros ya que se importa sólo en pequeñas cantidades en frutas carnosas y en concentraciones mucho menores que la de las hojas (Saure, 2005). En melón, existe evidencia de que el calcio regula el ablandamiento del fruto y senescencia a nivel de la membrana (Lester, 1996; Lamikanra y Watson, 2004). En la mayoría de las frutas, la retención de la firmeza es un parámetro de calidad importante en las frutas frescas y productos vegetales. El estado nutricional antes de la cosecha de la fruta, especialmente con respecto al calcio, es un factor importante que afecta la potencial vida de almacenamiento (Fallahi et al., 1997). MATERIALES Y MÉTODOS Sitio experimental Los experimentos de campo se realizaron en cinco localidades de la región central de la Argentina durante la temporada de producción 2009-2010, a fin de considerar las diferentes condiciones de suelos y climas: Colón (Entre Ríos) (32º 13’ S, 58º 08´ W), Ángel Gallardo (Santa Fe) (31º 32’ S, 60º 40’ W), Coronda (Santa Fe) (31º 58’ S, 60º 54’ W), Esperanza (Santa Fe) (31º 24’ S, 60º 54’ W) y Media Agua (San Juan) (31º 58’ S, 68º 25’ W). Se sembraron semillas de melón cv. ‘HD Nº1’ (Semillas Takii) en cada celda (3,5 cm de diámetro) de las bandejas de trasplante (126 celdas por bandejas) que se habían llenado con un sustrato con partes iguales en volumen de turba y perlita. El trasplante se realizó durante la primera semana de octubre de 2009 cuando las plantas tenían dos hojas. La forma más sencilla para maximizar el nivel de calcio en el fruto es por aspersión foliar (Gastol y DomagalaSwiatkiewicz, 2006). Esto, sin embargo, es en muchos casos muy difícil de alcanzar debido a la absorción y penetración restringidas del calcio hacia el fruto y su movilización dentro del tejido de la fruta (Mengel, 2002). Los aerosoles de Ca normalmente previenen la mayoría de oct-09 Localidad Década T Tx Ti ºC RH % nov-09 R WS T mm km h-1 Tx Ti ºC RH % dic-09 R WS T mm km h-1 Tx Ti ºC RH % ene-10 R WS T mm km h-1 Angel Gallardo (SF) 1 2 3 20 20 22 28 27 29 13 14 15 62 59 62 31 37 50 12 17 19 19 22 23 26 27 30 14 17 18 59 60 63 34 78 5 13 19 15 24 24 25 31 31 31 18 19 20 60 91 72 147 70 83 Colón (E.R.) 1 2 3 19 19 21 26 25 27 12 13 15 66 84 68 90 26 86 8 8 9 18 20 22 24 26 28 12 15 16 82 78 77 35 60 21 8 10 8 23 24 25 29 30 31 17 19 19 77 69 71 Coronda (S.F.) 1 2 3 21 21 22 30 28 30 14 15 16 61 61 61 27 38 12 14 14 20 20 23 24 26 30 31 15 18 18 60 60 65 29 64 9 13 19 9 25 25 26 31 31 32 Esperanza (S.F.) 1 2 3 20 21 21 28 28 29 15 15 16 69 70 69 21 46 63 6 6 7 20 22 24 27 29 34 14 16 16 69 67 69 2 0 0 6 7 5 24 24 26 Media Agua (S.J.) 1 2 3 19 21 23 29 30 31 11 13 16 32 33 35 0 0 0 16 14 16 21 24 25 30 34 34 12 15 16 31 26 34 0 0 0 15 17 17 26 27 28 Tx Ti ºC RH % R WS mm km h-1 12 13 10 26 27 28 32 32 33 21 22 23 57 64 62 0 10 40 13 16 15 40 77 68 6 7 6 25 27 27 31 32 33 20 23 22 68 1 69 30 64 120 7 8 8 19 20 21 64 59 72 116 70 65 7 11 10 27 27 28 33 33 34 22 23 24 58 61 62 0 11 47 11 15 13 34 32 36 17 18 20 71 53 79 146 78 127 5 6 5 26 26 28 37 35 40 18 20 22 66 68 68 0 8 35 5 6 6 35 37 37 18 19 19 36 36 37 18 17 17 30 30 31 38 40 41 21 22 22 32 31 34 31 6 0 16 16 17 0 0 0 Tabla 1. Promedio mensual cada diez días (década) de la Temperatura Media (T), Máxima (Tx) y Mínima (Ti), Humedad Relativa (RH), Precipitaciones (R) y la Velocidad del Viento (W) en las cinco localidades del experimento. Efecto de la aplicación foliar de calcio sobre algunos atributos de calidad en frutos de melón Diciembre 2012, Argentina 259 Información ambiental Los datos meteorológicos del ciclo de cultivo 2009-2010 permitieron observar los contrastes entre localidades (tabla 1). Los valores más bajos de temperatura máxima (Tx) fueron registrados en Colón y, los más altos, en Media Agua. En esta localidad, la humedad relativa (HR) fue la más baja: aproximadamente la mitad de la registrada en otras localidades. Además, en Media Agua no llovió (R) durante el ciclo de cultivo (sólo una pequeña cantidad en el mes de enero) y los valores más altos de velocidad media del viento se registraron en esta locación (WS). En Colón, los suelos predominantes son ricos en arcilla vertisol (figura 1) que se encoge e hincha con los cambios en el contenido de humedad y en la que hay un elevado contenido de arcilla expansiva, conocida como montmorillonita. En Ángel Gallardo y Esperanza, los suelos son molisoles (figura 1) con un alto contenido de materia orgánica en Ángel Gallardo y muy bajo en Esperanza. Se trata de suelos con una profundidad de primer horizonte usualmente de entre 25 y 35 cm. En Coronda, los suelos son una mezcla de molisoles y alfisoles, mientras que en Media Agua son principalmente entisoles (figura 1) que no presentan un perfil de desarrollo, provenientes principalmente de material parental con poca alteración. De acuerdo con los resultados de los análisis químicos, en Media Agua se determinó: Material Orgánico, MO (1,20%), Nitrógeno Total, NT (0,073%) y Fósforo, P (8 ppm). En lo que respecta a calcio y potasio, (25,0 y 5,0 meq 100 g-1, respectivamente). En Coronda: MO (0,8 %); Nt (0,047 %), P (9 ppm); Ca y K (3,2 y 0,5 meq 100 g-1; respectivamente). En Esperanza: MO (1,5 %); Nt (0,081%); P (6 ppm); Ca y K (9,6 y 0,5 meq 100 g-1, respectivamente). Figura 1. Localización geográfica y caracterización del tipo de suelo en los cinco experimentos de campo conducidos en la región central de Argentina, durante la temporada 2009-2010. En Ángel Gallardo: MO (2,27 %); Nt (0,106 %); P (45 ppm); Ca y K (8,1 y 0,8 meq 100 g-1, respectivamente). Y en Colón: MO (4,25 %); Nt (0,195 %); P (8 ppm); Ca y K (18,0 y 1,6 meq 100 g-1, respectivamente). Tratamientos y manejo de cultivos Esquema del experimento: 1.Sin fertilizantes (Control). 2.Nitrato de calcio, 3 g L-1 (Calcinit®, 15,5 % N, 26,6 % Ca). 3.EDTA Cálcico Amónico, 5 cm3 L-1 (Calcio34®, 34 % Ca). 4.Calcio orgánico, 40 cm3 L-1 (MYR® Calcio, 3,0 % N, 4,5 % Ca). El MYR® Calcio también contiene en su composición 3% de ácido húmico y 11% de aminoácidos libres. Los aerosoles foliares con la solución de calcio fueron aplicados cinco veces a partir del inicio de la fructificación con una frecuencia aproximada de una aplicación por semana. No se usó MYR® Calcio en las localidades de Colón y Media Agua. Las plantas en el tratamiento control no fueron fertilizadas pero sí rociadas con agua. Las prácticas de manejo fueron, a excepción de la fertilización foliar, las usadas habitualmente por los horticultores. Se utilizó polietileno negro acolchado, riego por goteo y fertirrigación con N, P y K de acuerdo a Bouzo et al. 2004. Mediciones y diseño experimental Los frutos fueron colectados en su punto de madurez comercial entre finales de diciembre de 2009 y principios de enero de 2010. Durante estos estudios se realizaron las siguientes mediciones en las frutas: firmeza interna (IF) y externa (EF) de la pulpa (kg), concentración de sólidos solubles (SSC) a la cosecha (%), peso de la fruta (W) (kg) y contenido de calcio en cáscara y pulpa (% del peso seco). La firmeza de la pulpa se midió utilizando un penetrómetro Effegi con un émbolo de 7,9 mm de diámetro. El EF, se midió removiendo la cáscara en lados opuestos de la fruta y la firmeza de la pulpa se calculó como la media de dos mediciones por fruto. La IF se midió cortando la fruta por la mitad y realizando mediciones en dos puntos opuestos en el medio del mesocarpio. Se tomaron dos cuñas de cada fruta y se combinaron para formar una muestra. Se extrajo el jugo de esta muestra con una prensa de mano y se filtró usando una gasa. Se midió la SSC de este jugo (%) con un refractómetro de mano (ATAGO), con compensación automática de temperatura. Las frutas fueron pesadas en balanza de precisión (± 0,01 g) y el contenido de calcio fue medido con un espectrógrafo de emisión (AOAC, 1995). En cada análisis se estudió una muestra de 15 frutos. El diseño del experimento fue de bloques aleatorizados. Cada tratamiento fue de 66 m2, con tres repeticiones, y 22 plantas cada uno. La densidad de siembra fue equivalente a 8.000 plantas por hectárea. Los datos experimentales se sometieron a BOUZO, C.A. 1; CORTEZ, S.B.2 260 ARTÍCULOS RIA / Vol. 38 /N.º 3 un análisis de varianza. Se usó un test de Tukey a P <0,05 para la separación de media. Los datos fueron analizados por ANOVA y se utilizó Statgraphics Plus para Windows para manejar los datos. RESULTADOS Y DISCUSIÓN El uso de fertilizantes foliares llevó a un incremento de la firmeza externa (EF) (tabla 2). Sin embargo, en Media Agua no se observaron diferencias entre el efecto de las soluciones de calcio (Calcinit y Ca34) en comparación con el tratamiento control. La firmeza interna (IF) se modificó por el uso de fertilizantes, pero los resultados no fueron similares en todas las localidades (tabla 2). Además, la eficacia de ciertos tratamientos para aumentar la IF no fue la misma para todas las localidades. Por ejemplo, el uso de Ca34 no causó un aumento de la IF en Ángel Gallardo mientras que Calcinit incrementó los valores de IF en todos los casos. En Media Agua no hubo diferencias en el efecto de los tratamientos (P <0,05). Medir la concentración de calcio en la fruta permitió observar la existencia de valores muy variables entre los tratamientos (tabla 5). No se observó una clara tendencia de aumento en la cáscara con los tratamientos con calcio en comparación con el control. No hubo diferencias estadísticamente significativas en la concentración de calcio de la cáscara en Media Agua (tabla 5). En la pulpa, la mayor diferencia en la concentración de calcio, en comparación con el control, fue registrada en Coronda y Ángel Gallardo (tabla 5). En Colón, los resultados fueron variados: la concentración de calcio fue incluso mayor en el tratamiento control que con los fertilizantes. Mientras que, en Esperanza y Media Agua no hubo diferencias entre los tratamientos, al igual que lo observado para la pulpa. El efecto de los tratamientos de calcio no causó un aumento en la concentración de sólidos solubles (SSC) de los frutos (tabla 3). En Media Agua se observaron los valores más altos de SSC, en todos los tratamientos, cuando se comparan los valores con aquellos obtenidos en el resto de las localidades. Diferentes condiciones pueden aumentar la deficiencia de calcio y pueden ser agrupados de la siguiente manera: absorción insuficiente de Ca por la planta por humedad inadecuada en la zona de las raíces, baja disponibilidad de calcio en el suelo y desbalance catiónico en el suelo o en la solución de fertirrigación, crecimiento pobre de las raíces y salinidad en la zona de las raíces. Otros factores pueden ser una inadecuada distribución del Ca hacia los órganos de baja tasa transpiratoria o alta tasa de desarrollo, pobre conexión xilemática, una alta tasa transpiratoria de la planta y una baja presión radical (Napier y Combrink, 2006). Cuando se midió el peso de la fruta a cosecha se determinó que, también en este caso, el uso de fertilizantes foliares no provocó diferencias en la masa de la fruta (tabla 4). En melón, hay evidencia que relaciona los efectos de la deficiencia de calcio con la evolución de la textura y poligalacturonasa (PG) (Serrano et al., 2002). El calcio es ne- Tratamientos Localidad EF Calcinit ab IF EF 2,22 ab 4,60 MYR Ca a IF 2,61 Ca34 EF a 3,52 ab IF 2,10 EF bc 2,30 Control IF b 1,63 c Angel Gallardo (S.F.) 3,21 Colón (E.R.) 6,15 a 3,97 a s/d s/d 5,75 a 2,92 b 3,83 b 2,93 b Coronda (S.F.) 5,00 a 2,25 a 4,15 ab 1,91 ab 4,72 a 2,28 a 2,65 b 1,34 b Esperanza (S.F.) 5,97 a 2,85 a 6,65 a 2,70 ab 6,97 a 3,04 a 3,56 b 2,04 b a a a a a 2,15 a Media Agua (S.J.) 4,50 2,00 s/d s/d 5,00 1,55 5,70 Tabla 2. Efecto de los fertilizantes sobre la Firmeza Externa e Interna (EF e IF, respectivamente) (kg) en frutos de melón cv. ´HD Nº 1´ en las cinco localidades del experimento. Diferentes letras indican diferencias significativas en cada fila (localidad) según la prueba de Tukey (P < 0,05). Tratamientos Tratamientos Calcinit MYR Ca Ca34 Control Ángel Gallardo Colón (E.R.) 11,0 a 9,2 a 10,4 a s/d 10,8 a 8,2 a 11,6 a 8,2 a Ángel Gallardo Colón (E.R.) Coronda (S.F.) 13,5 a a a a Esperanza (S.F.) 10,4 ab Localidad Media Agua (S.J.) 14,8 a 13,1 10,1 b s/d 13,1 9,2 b 15,3 a 14,2 11,9 a 14,0 a Calcinit MYR Ca Ca34 1,611 a 1,457 a 1,642 a 1,632 a a Coronda (S.F.) 1,957 2,239 a s/d 1,869 a a 1,782 2,000 a 1,994 a 2,017 a Esperanza (S.F.) 2,513 a 2,550 a 2,474 a 2,598 a Media Agua (S.J.) 3,614 a s/d 2,645 b 3,251 ab Localidad Control Tabla 3. Efecto de los fertilizantes sobre la Concentración de Sólidos Solubles (SSC) (%) en frutos de melón cv. ´HD Nº 1´ en las cinco localidades del experimento. Tabla 4. Efecto de los fertilizantes sobre el Peso Fresco de la fruta (W) (g) en melón cv. ´HD Nº 1´ en las cinco localidades del experimento. Diferentes letras indican diferencias significativas en cada fila (localidad) según la prueba de Tukey (P < 0,05) Diferentes letras indican diferencias significativas en cada fila (localidad) según la prueba de Tukey (P < 0,05) Efecto de la aplicación foliar de calcio sobre algunos atributos de calidad en frutos de melón Diciembre 2012, Argentina 261 Localidad Tratamiento Tejido del fruto Ángel Gallardo Colón Coronda Esperanza Media Agua Calcinit 0,81 a 0,87 b 0,59 ab 0,74 a 0,72 a MYR Ca 0,80 a 0,62 a 0,69 a s/d 0,87 a 0,63 a 0,69 a 0,75 a Ca34 Corteza s/d 1,00 a Control 0,79 b 0,85 b 0,52 b 0,65 b 0,67 a Calcinit 0,16 a 0,15 b 0,10 a 0,11 a 0,05 a 0,17 a s/d 0,11 a 0,15 a s/d a a 0,05 a 0,11 a 0,05 a MYR Ca Ca34 Control Pulpa 0,15 a 0,14 b 0,19 ab 0,21 a 0,11 0,06 b 0,15 Tabla 5. Efecto de los fertilizantes sobre la concentración de calcio en los tejidos de los frutos (corteza y pulpa) (% de peso seco) en las cinco localidades. Diferentes letras indican diferencias significativas en cada fila (localidad) según la prueba de Tukey (P < 0,05). cesario para fortalecer las paredes celulares y mantener la integridad de la membrana (Napier y Combrink, 2006). Por consiguiente, las relaciones del calcio con el tejido de la fruta se han asociado con el ablandamiento prematuro anormal. En melón, el ablandamiento del fruto puede encontrarse asociado con cambios en el contenido de las fracciones principales de la pared celular (Ranwala et al., 1992) y existe evidencia que el calcio regula el ablandamiento del fruto y la senescencia a nivel de la membrana. La aplicación directa de calcio en la fruta es el método más efectivo para aumentar el contenido de calcio en frutos (Conway et al., 2002). La mejor manera es rociar las plantas con fertilizantes de calcio (Lanauskas y Kvikliené, 2006). La importancia de comenzar el tratamiento temprano con el calcio, se relaciona con el hecho que en este cultivo la absorción máxima de nutrientes ocurre después de la formación del fruto y el calcio se acumula principalmente en las hojas durante el período de mayor crecimiento de la hoja (Bemadac et al., 1996; Rincón Sánchez et al., 1998). Sin embargo, no se observó un claro efecto de la aplicación de fertilizantes con calcio en la firmeza del fruto durante este trabajo. El caso más extremo fue el de Media Agua donde no se observó ningún efecto en ninguno de los tratamientos (tabla 2). De acuerdo con los resultados, no se registró ninguna mejora significativa en las características de calidad del melón. Al parecer, una concentración mayor de Ca o dos aplicaciones por semana podría resultar en una mejor relación entre la aplicación y la calidad. Por otra parte, cabe destacar que estos resultados debieran ser considerados como preliminares debido a que, si bien hubo diferencias en la concentración de Ca entre los diferentes suelos, en ningún caso fueron limitantes para el crecimiento de los cultivos. El melón tiene un gradiente de contenido de calcio, con una concentración mayor en la piel y menor en la pulpa (Wang et al., 1996). En este trabajo, con excepción de lo obtenido en Media Agua, esto fue observado. Aunque hubo excepciones en algunos tratamientos, el calcio foliar causó un aumento (tabla 5). Sin embargo, en Media Agua no se registraron diferencias entre tratamientos cuando se com- pararon la cáscara y la pulpa. Un hecho notable fue que la relación de la concentración de calcio en la cáscara y pulpa era varias veces superior en comparación con otras localidades. Estos resultados probablemente indican un efecto indirecto del ambiente en la menor incorporación de calcio al fruto, principalmente en la pulpa. Esto puede ser debido al hecho de que en Media Agua la baja humedad relativa del aire y la mayor velocidad del viento (tabla 1), pueden haber incidido en un aumento de la tasa de transpiración del cultivo. La translocación de calcio a la fruta se ve afectada por la presión parcial del vapor de agua atmosférico y por la relación hoja a fruta, además del tamaño de los frutos (Ferguson y Watkins, 1983). Estos resultados podrían indicar, o bien que las aplicaciones de calcio fueron ineficaces para revertir esta situación, o que las condiciones ambientales podrían haber evitado la absorción efectiva de las soluciones de calcio aplicadas. La literatura informa que la translocación de calcio es muy difícil de conseguir debido a la absorción y la penetración restringidas de calcio en la fruta y su movilización dentro del tejido de la fruta (Mengel, 2002). Por otro lado, al comparar el contenido de calcio y firmeza de la fruta, se observó que la concentración de calcio medida en la pulpa no se correlacionó con el aumento de IF, como ocurrió en Colón y Esperanza (tablas 2 y 5). En Coronda, además, la concentración de calcio en la pulpa aumentó con todos los fertilizantes, pero no aumentó la IF medida. Esto indicaría que el Ca aplicado externamente se encuentra probablemente en el espacio libre, y no estaba implicado en el mantenimiento de la estructura y la función celular como en la fruta de manzana (Fergurson y Watkins, 1983). CONCLUSIONES El uso de fertilizantes cálcicos no tuvo un efecto similar sobre el contenido de calcio en frutos de melón en los diferentes sitios experimentales durante un año. En todas las localidades, excepto en Media Agua, se observó un incremento del contenido de calcio en la cáscara. BOUZO, C.A. 1; CORTEZ, S.B.2 262 ARTÍCULOS No se observó, sin embargo, un claro efecto de la aplicación de fertilizantes de calcio en la firmeza del fruto. Los tratamientos con soluciones de calcio no incrementaron la concentración de sólidos solubles o el peso fresco de la fruta. El uso de fertilizantes cálcicos no tuvo un efecto similar sobre el contenido de calcio en frutos de melón en los diferentes sitios experimentales. AGRADECIMIENTOS El trabajo recibió el apoyo de CAI+D (Universidad Nacional del Litoral). Queremos agradecer la colaboración de los Ingenieros Agrónomos Juan C. Favaro, Juan Valiente y Cristian Pernuzzi. BIBLIOGRAFÍA LANAUSKAS, J.; USELIS, N.; VALIUSKAITE, A.; VISKELIS, P. 2006. Effect of foliar and soil applied fertilizers on strawberry healthiness, yields and berry quality. Agronomy Research 4, 247-250. ERDAL, Ü.; KEPENEK, K.; KIZILGOZ, Ü. 2004. 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E.1; GONZÁLEZ, C.1,3; GUIDI, S.1 RESUMEN El pardeamiento enzimático, catalizado principalmente por la Enzima Polifenol Oxidasa (PPO), es uno de los principales problemas que afectan la calidad y limitan la vida útil de frutas y hortalizas mínimamente procesadas. Los compuestos tradicionalmente utilizados para inhibir la PPO, son los sulfitos. Sin embargo, se ha desalentado su utilización en la industria alimentaria debido a que se han registrado casos de reacciones alérgicas, especialmente en individuos asmáticos. Como consecuencia, en la actualidad, se evalúa la utilización de otros compuestos como potenciales inhibidores de la enzima, para garantizar productos frescos y naturales. En el presente trabajo, se analizó la evolución de la actividad de la enzima PPO y las características cromáticas de la pulpa de rodajas de manzanas cv. Granny Smith, tratadas por inmersión en una solución de aditivos. Los tratamientos utilizados fueron: I. 2% ácido ascórbico + 1% ácido cítrico + 0,5% EDTA, II. 1% ácido ascórbico + 0,5 % ácido cítrico + 0,25% EDTA y III. agua, empleada como control. Durante el almacenamiento, se evaluaron las coordenadas de color del espacio CIE L*a*b* de las rodajas y se demostró que los tratamientos I y II fueron efectivos en evitar el pardeamiento de la fruta. La evaluación espectrofotométrica de la actividad enzimática de la PPO, en extractos de manzanas sometidas a los distintos tratamientos, mostró que el más severo (I) fue el que produjo el mayor grado de inhibición de la enzima, en todos los tiempos analizados. Se propone evaluar a futuro, la efectividad de estos inhibidores “in vitro”, a efectos de compararlos con los resultados obtenidos en rodajas de manzana. Palabras clave: polifenol oxidasa, ácido ascórbico, ácido cítrico, EDTA, procesamiento mínimo, manzanas. ABSTRACT Enzymatic browning, which is mainly catalyzed by the enzyme poliphenol oxidase (PPO), is one of the major problems affecting quality and limiting shelf life of fresh cut fruits and vegetables. Traditionally, sulfites are used to inhibit the enzyme. However, its presence in the food has induced allergenic reactions, particularly in asthmatic persons. Consequently, it has been evaluated the effect of other PPO inhibitors in order to obtain fresh and natural products. In the present work, the evolution of PPO activity and the chromatic characteristics of the Instituto Tecnología de Alimentos- CIA, INTA-CC.77, B1708WAB-Morón, Bs. As, Argentina. Tel: +541146210446. Correo electrónico: [email protected] 2 Pasante de la Universidad de Morón, Cabildo 134 (B1708JPD) Morón, Prov. de Buenos Aires. CONICET - Av. Rivadavia 1917 (C1033AAJ), CABA, Argentina 3 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas, Conicet 1 Recibido 21 de noviembre de 2011// Aceptado 27 de julio de 2012// Publicado online 23 de octubre de 2012 DENOYA, G. I.1; ARDANAZ, M.2; SANCHO, A. M.1; BENÍTEZ, C. E.1; GONZÁLEZ, C.1,3; GUIDI, S.1 264 ARTÍCULOS RIA/ Vol. 38/ N.º 3 pulp were evaluated in cv. Granny Smith apple slices. The slices were submitted to three treatments: I. 2% ascorbic acid + 1% citric acid + 0.5% EDTA; II. 1% ascorbic acid + 0.5% citric acid + 0.25% EDTA; and III. water, used as control. During the storage, parameters of the CIE L*a*b* color space of the slices were evaluated, indicating that both treatments containing additives were effective in preventing browning. The specific activity of PPO was determined spectrophotometrically in apple extracts obtained from each treatment. The results indicated that the stronger treatment (I) had induced the most effective inhibition of the enzyme. On view of the present results, It is proposed to evaluate the “in vitro” effectiveness of the inhibitors in order to compare these results with the ones obtained with apple slices. Keywords: poliphenol oxidase, fresh cut fruit, ascorbic acid, citric acid, EDTA, apples. INTRODUCCIÓN Últimamente, la producción de frutas y hortalizas mínimamente procesadas (FyHMP) ha crecido notoriamente tanto en cantidad como en variedad (Watada, 1996), debido a que proporcionan al consumidor un producto similar al fresco con una vida útil relativamente prolongada y, al mismo tiempo, garantizan su inocuidad, calidad nutritiva y sensorial (Wiley, 1997). La apariencia, determinada principalmente por el color, es uno de los atributos más utilizados por los consumidores para evaluar la calidad de FyHMP. El color, se debe a los pigmentos naturales, como las clorofilas, los carotenoides y las antocianinas, o a los pigmentos que resultan de las reacciones de pardeamiento enzimático. Este proceso, relacionado con la actividad de la enzima PPO, no ocurre en células de la planta intacta debido a que los sustratos (compuestos fenólicos) están contenidos en vacuolas celulares citoplasmáticas, separadas de la enzima. Una vez que el tejido celular es dañado, ya sea por la propia manipulación o por el corte de la fruta, se pierde la compartimentalización, se pone en contacto la enzima y el sustrato, y se desencadenan las reacciones de pardeamiento (Toivonen & Brummell, 2008). La Comisión de Enzimas (EC-Enzyme Comission) del Comité de Nomenclatura de la Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular (NC-IUBMB), clasifica a la PPO como EC 1.10.3.1., perteneciente a las oxidoreductasa que actúan sobre los difenoles con el oxígeno como aceptor (Nevin, 2009). Esta enzima, actúa sobre dos tipos de sustratos, los monohidroxifenoles (ejemplo p-cresol), hidroxilándolos en posición orto con respecto al grupo hidroxilo original (EC 1.14.18.1), y sobre los o-dihidroxifenoles (ejemplo catecol) oxidándolos a benzoquinona por remoción del hidrógeno del grupo hidroxilo (EC 1.10.3.1) (Ramírez and Whitaker, 2003; Ayaz et al., 2007). A su vez, se produce la formación no enzimática de melaninas (compuestos poliméricos que dan coloraciones marrones, rojas y/o negras). La característica estructural más importante de la PPO es la presencia, en su centro activo, de dos átomos de cobre unidos a histidina. Alrededor de ellos, se sitúan aminoácidos hidrofóbicos con anillos aromáticos, importantes para su unión a los sustratos (Calvo, 2007). La primer metodología utilizada para controlar el pardeamiento enzimático, consistió en la adición de sulfitos (Sapers, 1993) que actúan como agentes reductores transformando las o-quinonas en difenoles menos reactivos para prevenir el desarrollo de melaninas. Si bien de esta forma se previene el pardeamiento enzimático, recientemente, su utilización ha sido restringida en vegetales y frutas por la Administración de Fármacos y Alimentos de EEUU (Langdon, 1987). En nuestro país, la Resolución Conjunta 57/2010 y Modificación 548/2010 de la Administración Nacional de Medicamentos, Alimentos y Tecnología Médica (ANMAT), desalienta el uso de esta sustancia porque hubo casos de reacciones alérgicas en individuos, especialmente asmáticos, que consumieron alimentos que contenían este agente reductor (Pizzocaro et al., 1993). Las reacciones de pardeamiento enzimático pueden, también controlarse mediante métodos físicos que incluyen la reducción de temperatura y/o de la disponibilidad del oxígeno molecular, el uso de atmósferas modificadas o recubrimientos comestibles y tratamientos con irradiación gamma o altas presiones hidrostáticas. Por otro lado, puede utilizarse métodos químicos basados en la utilización de compuestos que inhiben la enzima, reducen la disponibilidad del sustrato y/o de los productos de la catálisis enzimática que evitan la formación de productos coloreados. Su aplicación en los alimentos está restringida debido a consideraciones relevantes tales como la toxicidad, la salubridad y el efecto que puede causar sobre el sabor, la textura o eventualmente por el costo. Entre los agentes reductores utilizados en la actualidad, se encuentra el ácido ascórbico que reduce las o-benzoquinonas a o-difenoles (Whitaker and Lee, 1995). Dado que durante la reacción este compuesto se consume por oxidación, la protección que confiere es sólo temporal y también pueden aplicarse los ácidos orgánicos para controlar el pardeamiento enzimático que logran disminuir el pH y garantizar la inocuidad microbiológica. Además, algunos de ellos, pueden actuar como fungicidas/fungistáticos y como inhibidores del crecimiento de gran parte de la flora de deterioro. Los acidulantes se utilizan frecuentemente en combinación con otros agentes de antipardeamiento, debido a que es muy Efecto de la aplicación de tratamientos combinados de aditivos sobre la inhibición del pardeamiento enzimático (...) Diciembre 2012, Argentina difícil lograr una inhibición completa del oscurecimiento únicamente por el control del pH. El más utilizado es el ácido cítrico que reduce el pardeamiento capturando o quelando el cobre del sitio activo de la PPO, y potencia el efecto de compuestos tales como el ácido ascórbico (Wiley, 1997). Otro compuesto de interés es el ácido etilendiamino tetraacético (EDTA) que inactiva a la enzima y forma complejos con iones de metales pesados tales como el cobre de la PPO. En concordancia con lo expresado, el objetivo del presente trabajo es evaluar la actividad de la PPO, las características cromáticas y su evolución durante el almacenamiento refrigerado (1,5 ºC) por 16 días, en rodajas de manzanas cv. Granny Smith, tratadas por inmersión con una combinación de aditivos (ácido cítrico, ácido ascórbico y EDTA) en diferentes proporciones. MATERIALES Y MÉTODOS Material vegetal Se utilizaron manzanas cv. Granny Smith, categoría elegido, adquiridas en el Mercado Central de Buenos Aires, Argentina y procedentes del Alto Valle del Río Negro cuyo peso medio por fruto fue de 180 gramos. 265 se analizaron mediante un diseño factorial balanceado de dos factores: tratamiento (I, II y III) y tiempo (1, 7 y 16 días) en donde cada bandeja contuvo rodajas de manzanas como una unidad experimental. El análisis aplicado se llevo a cabo mediante el paquete estadístico SPSS® versión 12 (SPSS Inc., Illinois). En el caso de los datos correspondientes a la determinación de actividad de la PPO, se aplicó la transformación de Taylor para homogeneizar los datos. Determinaciones analíticas Todas las evaluaciones fueron realizadas a los 0, 7, y 16 días de almacenamiento en refrigeración. Características cromáticas Las características cromáticas del espacio CIE L*a*b* fueron evaluadas con un colorímetro Konica Minolta modelo CR-400, Iluminante D65. Las determinaciones se efectuaron sobre la cara expuesta de las cinco rodajas de manzana superiores de cada bandeja tomando cuatro valores en cruz (total: 20 determinaciones por muestra y por fecha). Actividad de la PPO Procesamiento Las frutas fueron prelavadas por inmersión durante dos minutos en una solución de hipoclorito de sodio (200 ppm) fueron peladas,descorazonadas y cortadas en rodajas. Posteriormente, los lotes de la fruta fueron sometidos durante cinco minutos a un baño de inmersión con distintos aditivos. Los tratamientos aplicados fueron: I. 2% ácido ascórbico + 1% ácido cítrico + 0,5% EDTA; II. 1% ácido ascórbico + 0,5 % ácido cítrico + 0,25% EDTA y III agua, utilizada como control, para lo cual, en cada tratamiento, se realizaron tres réplicas. Posteriormente, las rodajas fueron escurridas, acondicionadas en bandejas de polietileno (10 rodajas con aproximadamente 200 g por bandeja) y cubiertas por un film de grado alimenticio (70% de resina de policloruro de vinilo (PVC), de espesor 9 µm, permeabilidad al O2 de 1536 cm3/ m2.24 h.1 atm y al CO2 de 3690 cm3/m2.24 h.1 atm medidas a 0% HR y 23ºC y la permeabilidad al vapor de H2O 99 g/ m2.24 h medida a 50% HR y 23ºC). Las rodajas se ubicaron apiladas en cinco pares por bandeja y posteriormente fueron almacenadas durante 16 días en cámara climatizada a 1,5 ºC, cuyo contenido en sólidos solubles en las rodajas al inicio del tratamiento fue de 9,9 °Brix, con acidez málica de 7,6 g/l, y el pH de 3,32. Diseño experimental Los datos obtenidos en el estudio de las características cromáticas y en la determinación de la actividad de la PPO, La extracción de la enzima para la determinación de su actividad, se hizo según el método de Yemenicioğlu et al. (1997). Para ello, se pesaron 200 g de rodajas de manzana, se cortaron en pequeños trozos y se les adicionó 250 ml de acetona fría (-20 °C). El preparado fue homogeneizado en una procesadora Waring Blender durante 2 minutos a máxima velocidad. El homogenato fue filtrado a través de un embudo Buchner, utilizando papel Whatman N.°1, y el residuo obtenido fue extraído nuevamente con 200 ml de acetona fría y filtrado en las mismas condiciones. Este procedimiento, fue repetido tres veces más, obteniéndose finalmente un polvo de acetona que se secó en estufa de vacío durante cuatro horas a temperatura ambiente, y posteriormente se almacenó a -20 °C hasta su utilización. Para la extracción de la PPO, se tomaron 2 g de polvo de acetona y se suspendieron en 120 ml de buffer fosfato de potasio 0,05 M y pH 6,8. La suspensión fue homogeneizada por agitación durante 30 minutos a 4 °C. Luego, el extracto fue clarificado por filtración con gasas y, posteriormente, la solución fue centrifugada a 3000 x g durante10 minutos a 4 °C. El sobrenadante obtenido, fue utilizado como fuente de enzima para todas las mediciones realizadas. La actividad de la PPO fue evaluada a 420 nm con el uso de un espectrofotómetro UV-visible Perkin Elmer, modelo Lambda Bio 20. Los valores obtenidos fueron registrados en varios intervalos de tiempo, durante tres minutos y el resultado de cada medición enzimática correspondió al promedio de tres mediciones. Las condiciones del ensayo para la determinación de la actividad de la PPO, fueron: 0,4 ml del extracto enzimático, 0,1 ml de catecol (17 mM), buffer acetato de sodio 0,05 M pH 5,2 csp un volumen final de 2,5 ml. Todas DENOYA, G. I.1; ARDANAZ, M.2; SANCHO, A. M.1; BENÍTEZ, C. E.1; GONZÁLEZ, C.1,3; GUIDI, S.1 266 ARTÍCULOS RIA/ Vol. 38/ N.º 3 las determinaciones se llevaron a cabo a 30 °C, por triplicado. Se definió la actividad enzimática (UE) como la cantidad de enzima que cataliza el aumento de 0,1 unidades de absorbancia (UA), por minuto a 420 nm y a 30 ºC (Flurkey and Jen, 1978). La actividad enzimática, fue calculada de la porción lineal de la curva y la concentración de proteína del extracto enzimático fue determinada por el método de Lowry et al. (1951) utilizando BSA (0,2 mg/l) como patrón. La actividad específica (AE), se definió como la actividad enzimática por unidad de proteína (UE/mg proteína). Tratamientos Almacenamiento (días) 1 7 16 2 % AA + 1% AC + 0,5% EDTA -5,08 ab -4,65 b -4,79 b 1 % AA+0,5 %AC+ 0,25%EDTA -5,42 a -4,90 ab -5,03 ab Agua (control) -3,48 c -2,61 d -2,39 d Tabla 2. Medias obtenidas para el parámetro a* en rodajas de manzanas cv. Granny Smith sometidas a distintos tratamientos durante el almacenamiento refrigerado Ref. AA (ácido ascórbico), AC (ácido cítrico). Las letras distintas indican diferencias estadísticamente significativas en el efecto interacción Tratamiento-Tiempo (Tukey, p < 0,05). RESULTADOS Y DISCUSIÓN Características cromáticas En la tabla 1, se observan los resultados promedio obtenidos para el parámetro L* (luminosidad) en rodajas de manzanas cv. Granny Smith sometidas a los distintos tratamientos durante el almacenamiento refrigerado. El análisis estadístico indicó que la interacción tratamiento-tiempo no fue significativa (p>0,05). Por lo tanto, la comparación entre las medias de los factores Tratamiento y Tiempo de conservación se realizó en forma independiente. Tratamientos Almacenamiento (días) 1 7 16 2 % AA + 1% AC + 0,5% EDTA 93,16 Aa 87,28 Ab 88,0 Ab 1 % AA+0,5 %AC+ 0,25%EDTA 92,41 Aa 87,53 Ab 88,3 Ab Agua (control) 90,64 Ba 84,46 Bb 84,8 Bb Tabla 1. Medias obtenidas para el parámetro L* (luminosidad) en rodajas de manzanas cv. Granny Smith sometidas a distintos tratamientos durante el almacenamiento refrigerado Ref. AA (ácido ascórbico), AC (ácido cítrico). Las letras mayúsculas y minúsculas indican diferencias estadísticamente significativas al efecto Tratamiento y efecto de Tiempo, respectivamente (Tukey, p < 0,05). Los tratamientos I y II, no fueron significativamente diferentes entre sí (p>0,05) y ambos mostraron diferencias significativas (p<0,05) respecto del control para todos los tiempos analizados. Las rodajas de manzanas sometidas a los tratamientos I y II (combinación de aditivos), mostraron una mayor luminosidad respecto de las muestras utilizadas como control (inmersión en agua). Una disminución en el valor de luminosidad (L*) se asocia a un aumento del pardeamiento enzimático (Rocha and Morais, 2003). En las muestras sometidas a los tratamientos que utilizan combinaciones de aditivos, el valor de L* fue significativamente mayor (p<0,05) que en la muestra control, inmediatamente después de tratadas, lo que indicó una coloración más clara. En lo que respecta a la evolución de este parámetro durante el almacenamiento refrigerado, se observó que al primer día (tiempo=0), los valores de L* de todas las muestras fueron los mayores (p<0,05). A partir del día 7, los valores de L* disminuyeron significativamente (p<0,05), sugiriendo que las muestras fueron tomando una coloración más oscura. Estos valores se mantuvieron sin cambios (p> 0,05) hasta el final del período analizado. La tabla 2, muestra los resultados promedio obtenidos para el parámetro a*(componente verde-rojo) donde las muestras sometidas a los tratamientos I y II tuvieron valores de a* significativamente menores (p<0,05) que aquellas muestras sometidas al tratamiento control en todo el período estudiado. No se observaron diferencias significativas entre ambos tratamientos con aditivos para lo cual funcionó como indicativo del cambio de cromaticidad del verde (valores negativos) al rojo (valores positivos) que está correlacionado en forma positiva con los cambios de color de las manzanas frescas (Goupy et al., 1995). El pardeamiento enzimático también se evidencia por un aumento del parámetro a*, al indicar una mayor tendencia hacia el color rojo (Rocha and Morais, 2003) que fue observada sólo en las muestras control (III). Durante el período estudiado, las manzanas tratadas en agua mostraron cambios hacia valores menos negativos (de -3,48 a -2,39). Mientras que, las muestras sometidas a los tratamientos I y II, no mostraron cambios significativos en a* durante la conservación frigorífica. Determinación de la Actividad de la PPO Tratamientos Almacenamiento (días) 1 7 16 2 % AA + 1% AC + 0,5% EDTA 0,16 Bb 0,71 Ba 1,25 Ba 1 % AA+0,5 %AC+ 0,25%EDTA 5,10 Ab 6,41 Aa 7,78 Aa Agua (control) 6,02 Ab 7,37 Aa 7,87 Aa Tabla 3. Medias obtenidas para la Actividad específica de la PPO (UE/mg proteína) para cada combinación Tratamientos y Tiempo de almacenamiento Ref. AA (ácido ascórbico), AC (ácido cítrico). Las letras mayúsculas y minúsculas indican diferencias estadísticamente significativas al efecto Tratamiento y efecto de Tiempo, respectivamente (Tukey, p < 0,05). La tabla 3, muestra los resultados promedio obtenidos en la determinación de la actividad específica (AE) de la PPO en cada uno de los tratamientos aplicados donde la interacción tratamiento-tiempo no fue significativa (p>0,05). Sin embargo, la comparación entre las medias de los factores tratamiento y tiempo de conservación se realizó en forma independiente. Al comparar los resultados de los tratamientos entre sí, se observó que la actividad de la enzima en tratamiento I fue significativamente menor (p<0,05) que la correspondiente a los tratamientos II y III en todos los tiem- Efecto de la aplicación de tratamientos combinados de aditivos sobre la inhibición del pardeamiento enzimático (...) Diciembre 2012, Argentina pos evaluados (0, 7 y 16 días) y que sugirió un mayor grado de inhibición de la enzima. Al cabo de 16 días, la comparación de los tres tratamientos demostró que las concentraciones de aditivos en el tratamiento II, no fueron suficientes para inhibir la enzima en la totalidad de la fruta, en consecuencia, la AE de la enzima aumentó, de forma similar a la AE obtenida en la fruta control. CONCLUSIONES Al comparar la AE de la enzima con el análisis instrumental del color en las rodajas de manzanas, para los distintos tratamientos y tiempos de conservación, se advirtió que existe una cierta disparidad en los resultados obtenidos. En el análisis instrumental, aquellas rodajas que estuvieron inmersas en los tratamientos I y II no mostraron evidencias de pardeamiento enzimático. Contrariamente, los resultados obtenidos en la medición de la AE de la PPO mostraron que el único tratamiento que resultó efectivo en lograr la inhibición de la enzima fue el tratamiento I. Los resultados obtenidos en el presente estudio, inducen a encarar a futuro ensayos para probar la efectividad de los inhibidores directamente sobre extractos que se obtienen de la enzima, a propósito de la determinación de actividad, y que permitiría relacionar estos resultados con los obtenidos en las rodajas de manzana. Otro aspecto de importancia es realizar a futuro un análisis sensorial del producto mediante panelistas entrenados para evaluar y determinar si existen diferencias en propiedades sensoriales de los frutos, diferentes del color, debido a los tratamientos aplicados. Es importante poder ofrecer en el mercado un producto que se preserve en el tiempo mediante la reducción o supresión del pardeamiento enzimático pero también, es importante, que conserven sus propiedades sensoriales originales, y las características de “fresco” para lograr así una mejor aceptabilidad por parte del consumidor. AGRADECIMIENTOS Esta investigación fue financiada por el proyecto INTA - AETA PE 1671. Se agradece la colaboración de los auxiliares del Instituto Tecnología de Alimentos del CNIA-INTA Castelar. 267 BIBLIOGRAFÍA ANMAT http://www.anmat.gov.ar/alimentos/normativas_alimentos_caa.asp (Verificado: febrero 2011) AYAZ, F.A.; DEMIR, O.; TORUN, H.; KOLCUOGLU, Y.; COLAK, A. 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Su potencialidad productiva y la disponibilidad de tierras para su cultivo permiten proyectar la continuidad de su uso en plantaciones comerciales, para lo que es indispensable asegurar la provisión de semillas de adecuada calidad genética. Las semillas utilizadas en la última década se produjeron en una serie de rodales mediante ensayos para evaluar su descendencia. El objetivo del presente trabajo es evaluar estos rodales ensayando su descendencia. En este primer reporte presentamos los resultados de una evaluación en etapa de vivero. Se ensayaron 31 procedencias locales seleccionadas (Áreas Productoras de Semillas, APS) en dos sitios, midiendo altura y diámetro a la altura del cuello en plantines de 2 años de edad. A través de análisis de la varianza se probó un claro efecto de interacción entre las APS y los sitios, y también diferencias entre las APS dentro de cada sitio. Seguidamente, se establecieron rankings de las APS por sitio y variable evaluada. A través de comparaciones de a pares se formaron grupos homogéneos. También se estimó la estabilidad genotípica de las APS por medio del cálculo de sus ecovalencias. Los resultados son aún preliminares, pero el haber probado diferencias en tan temprana edad nos alerta sobre la importancia de la procedencia de las semillas a utilizar para la producción comercial. Se espera que estas diferencias se acentúen en edades más avanzadas. Para probarlo, ya se han establecido ensayos de plantación. Palabras clave: procedencias locales, ranking, ecovalencias. ABSTRACT Ponderosa pine (Pinus ponderosa Dougl. ex Laws) is the main forest tree species cultivated in Patagonia without irrigation. Its productive potentiality and the surface available for afforestation with it indicate the species will continue to be among the first forest tree alternatives in the region, what makes essential to assure the availability of seeds with adequate genetic quality. In the last decade, a set of commercial stands acted as seed sources although they have never been genetically tested. The aim of the present study is to evaluate those stands by testing their progeny. In this first report we present the results at the nursery stage. We assayed 31 local seed sources in two sites. Total height and stem diameter at the root collar were measured in two-year-old seedlings. Provenance X site interaction was shown by means of ANOVA, and also differences among seed sources within each site. Rankings were subsequently built for each trial and trait separately. Pair-wise comparisons were performed, and homogeneous groups were built. Genotypic stability of each seed INTA Estación Agroforestal Trevelin, Aldea Escolar, Chubut. INTA Campo Forestal General San Martín, Las Golondrinas, Chubut. 3 INTA Estación Experimental Agropecuaria Bariloche, CC 277 (8400) S.C. Bariloche, Río Negro, Argentina. 4 Investigador del CONICET. *Autor de correspondencia – [email protected] 1 2 Recibido 21 de octubre de 2011 / Aceptado 27 de julio de 2012 / Publicado online 15 de agosto de 2012 Evaluación genética en etapa de vivero de áreas productoras de semillas (APS) de Pino Ponderosa en Nordpatagonia Diciembre 2012, Argentina 269 source was estimated by calculating their ecovalence. Results are still preliminary, however, finding significant differences at such an early age alert us about the importance of the seed source for commercial production. We expect these differences will increase with age, and field trials have already been planted in order to test this expectation. Keywords: local seed sources, ranking, ecovalence. INTRODUCCIÓN Entre las especies forestales implantadas comercialmente en la Patagonia argentina se destaca claramente el Pino Ponderosa (Pinus ponderosa Dougl. ex Laws). Esta conífera originaria de Norteamérica fue introducida en el país a comienzos del siglo XX, pero fue a partir de la década del 70 que su plantación extensiva adquirió un gran impulso fomentada por diversas políticas de promoción del Estado Nacional, en primera instancia, y, luego de los estados provinciales (Loguercio y Deccechis, 2006a; Monte y Laclau, 2010). Entre las mayores virtudes productivas del Pino Ponderosa debe contarse su gran adaptabilidad a condiciones ambientales rigurosas que resultan limitantes o al menos marginales para otros cultivos forestales en secano. Su alta tasa de crecimiento para los estándares esperables en climas templados, aún con regímenes de precipitación por debajo de los 700 mm anuales y con el azote constante de los fuertes vientos patagónicos, permite planteos productivos rentables en sitios de la Patagonia que se muestran vedados para otros cultivos sin riego. En los últimos 40 años se ha logrado establecer en las provincias patagónicas de Neuquén, Río Negro y Chubut, una masa forestal con Pino Ponderosa que ronda las 70.000 ha (Loguercio y Dececchis, 2006b; CFI et al., 2009), constituyéndose en la principal especie forestal implantada en secano de la región. Pero el potencial del Pino Ponderosa no se acaba en esta superficie. A través de una estimación regional para las tres provincias, se ha calculado una superficie apta para el establecimiento de forestaciones con pino de unas 2 millones de ha (Loguercio y Deccechis, 2006a). Asimismo, en un cálculo más reciente y de mayor detalle, se estimó un área apta de 279.000 ha en sólo dos departamentos de la provincia de Neuquén, los de mayor vocación forestal (Monte y Laclau, 2010). En el marco de esta realidad y potencialidad mencionadas, en el año 1998 el INTA comenzó a desarrollar un programa de mejoramiento genético de Pino Ponderosa con base en San Carlos de Bariloche y Esquel y con financiamiento de la entonces Secretaría de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimentación de la Nación (SAGPyA) (Mondino et al., 2003; Martinez-Meier et al., 2005). El producto central del plan de mejora del INTA fue la creación de huertos semilleros, para los que se seleccionaron masalmente 86 individuos a lo largo de unas 1.500 ha de plantaciones comerciales de al menos 18 años de edad, distribuidas en las tres provincias del norte patagó- nico (Martinez-Meier et al., 2005). Como resultado de este trabajo, se cuenta actualmente con tres huertos clonales y dos de progenies, que suman una superficie de 7,7 ha y que se espera que entren en producción en 2016 con un rendimiento total de entre 100 y 150 kg de semillas por año. Este volumen alcanzaría para la producción de plantines necesaria para una tasa anual de forestación de unas 2.000 ha. El pico histórico de forestación en la región se alcanzó en el año 1999, con unas 5000 ha/año, para caer dos años después a 2000 ha/año (Loguercio y Deccechis, 2006a). Sin embargo, el plan de mejora del INTA también contempló desde su inicio la definición de áreas productoras de semillas (APS) y su posterior intervención (raleo de los genotipos inferiores) para su transformación en rodales semilleros (RS). Las APS y más aún los RS son fuentes habituales de semillas en los primeros años de un programa extensivo de forestación en el que la población de propagación de su programa de mejora aún no ha entrado en producción (White et al., 2007). Con conocimiento de la demora de los huertos hasta su entrada en producción, y también anticipándose a una posible demanda de semillas que sobrepasara su capacidad productiva, el programa del INTA incluyó la selección de rodales comerciales en tres sitios para conformar APS de la especie, que permitió sumar una superficie de 21,4 ha en total. Esta selección se fundamentó en criterios de accesibilidad, productividad de semillas y cualidades de la masa que coinciden con las reglamentadas en la resolución 207 del año 2009 del Instituto Nacional de Semillas de la Argentina (INASE, 2009). Para valorar estas cualidades se llevó a cabo una caracterización general de los rodales candidatos mediante caracteres fenotípicos de los individuos (de vigor y forma) expresados en los propios rodales en evaluación. Actualmente, estos rodales son algunos de los proveedores habituales de las semillas de Pino Ponderosa en la región. Sin embargo, existen viveristas y forestadores que utilizan semillas que proceden de otros rodales, muchas veces sin ningún tipo de selección más que su accesibilidad para disminuir los costos en la producción de plantines. Existen casos, incluso, en que se cosechan semillas en rodales que fueron raleados por lo tanto, en donde fueron extraídos los mejores árboles en el aprovechamiento comercial. La selección de las APS en base a características fenotípicas generales de sus árboles es más o menos incierta hasta tanto no se pruebe con ensayos que las progenies resultantes son superiores a la media de la de cualquier SCHINELLI, T.1; BASIL, G.2; TEJERA, L.1; HONORATO, M.1; GALLO, L.A.3; MONDINO, V.1 Y OTROS 270 ARTÍCULOS RIA / Vol. 38 / N.º 3 rodal comercial. En todo caso, si se pretende que los viveristas y forestadores le otorguen un valor a la procedencia de las semillas, debe demostrarse que no es lo mismo proveerse de ellas de cualquier rodal comercial, y que vale la pena invertir, al menos, en no utilizar las semillas de los malos, aún cuando estos sean los más fáciles de cosechar. El INASE, a través de la Resolución 256/99 (INASE, 1999), fija las normas para la certificación, producción, comercialización e importación de semillas de especies forestales en nuestro país. En su capítulo II define los tipos de materiales básicos, es decir, de los grupos de árboles de los que se obtiene el material de propagación para la producción comercial de plantas y el establecimiento de plantaciones productivas (APS, RS y varios tipos de huertos semilleros). En el capítulo XI, a su vez se definen distintas categorías de los materiales básicos según el grado de mejora genética que incorporen. La categoría más baja es “de fuente identificada”, aplicable sólo a las APS, en la que no se registra ningún grado de mejora, sino que se limita a distinguir la procedencia de las semillas. El resto de las clases de materiales básicos se reconocen como “de fuente certificada” y comprenden las categorías “seleccionado”, “calificado” y “ensayado”, en orden de menor a mayor grado de mejora. Registro en INaSe En la actualidad esta categorización ha cobrado un valor adicional, ya que el Estado Nacional otorga por la Resolución 102 de la SAGyP del año 2010 un aumento del 10% en el apoyo económico no reintegrable de la Ley 25.080 modificada por la Ley 26.432 por el uso de semillas de fuente certificada en las forestaciones. Más allá de esta auspiciosa decisión de fomentar plantaciones de mejor calidad genética, la categorización que propone el INASE señala el camino hacia dónde dirigir los esfuerzos en la mejora genética forestal. De este modo, se vuelve esperable que así como hoy se fomenta el uso de semillas certificadas de cualquier tipo, en un futuro próximo haya un fomento diferencial para las de las máximas categorías. El objetivo del presente trabajo es ensayar comparativamente las APS de Pino Ponderosa que se han utilizado en los últimos años como fuente de la semilla comercial en la Patagonia argentina. Se ha propuesto una evaluación preliminar en vivero con plantas de dos años y dos evaluaciones en plantación, a los cuatro y los seis años de edad. Este primer reporte se refiere a la evaluación de vivero. El objetivo no es estimar valores de crecimiento per se en forma absoluta, sino comparar las APS para poder valorarlas en forma relativa. Una evaluación tan temprana puede contribuir a ponderar la capacidad adaptativa de las distintas Año plantación Precip. mm/año Prov. Año cosecha 1. IFONA 85 Nqn 2008 AFR Manzano Amargo no inscripto 1985 8,7 36º 44' 22'' 70º 46' 32'' 1350 780 2. El Manzano Rodal 16 Nqn 2001 Viv. Prov.Huinganco 12Q7334KP 1978 11,0 37º 07' 07'' 70º 37' 04'' 1220 680 3. San Pedro Rodal 2 Nqn 2001 Viv. Prov.Huinganco 13Q7334KP 1980 3,2 37º 09' 48'' 70º 37' 21'' 1230 680 4. San Pedro Rodal 1 Nqn 2008 Viv. Prov.Huinganco 13Q7334KP 1978 2,6 37º 09' 55'' 70º 37' 02'' 1230 680 5. Abra Ancha Rodal 10 Nqn 2008 CORFONE 6Q2264LP 1977 27,6 39º 19' 21'' 70º 57' 26'' 1180 750 6. Abra Ancha Rodal 1 Nqn 2008 CORFONE 6Q2264LP 1977 20,0 39º 19' 13'' 70º 57' 50'' 1260 750 7. Abra Ancha Rodal 5 Nqn 2005 CORFONE 8Q2264LP 1976 10,2 39º 18' 31'' 70º 56' 47'' 1200 750 8. Abra Ancha Rodal 8 Nqn 2008 CORFONE 6Q2264LP 1977 72,8 39º 19' 35'' 70º 56' 44'' 1150 750 9. Junín Rodal 12 Nqn 2004 CORFONE no inscripto 1976/78 23,6 39º 57' 13'' 71º 05' 45'' 900 550 10. Junín Rodal 6 Nqn 2007 CORFONE 5Q2264LP 1976 23,8 39º 57' 16'' 71º 05' 31'' 850 550 11. Junín Rodal 10 Nqn 2004 CORFONE 5Q2264LP 1976 19,7 39º 57' 21'' 71º 05' 45'' 950 550 12. Lolog Rodal 2 Nqn 2008 CORFONE 2Q2264LP 1975 8,5 40º 04' 53'' 71º 20' 34'' 1200 1200 13. Ea. Cacique Foyel RN 2008 privado 8R5513JP 1975 17,1 41º 38' 17'' 71º 27' 17'' 790 1400 14. Los Repollos RN 2008 privado no inscripto 1976 1,8 41º 43' 58'' 71º 26' 57'' 850 950 15. El Foyel RN 2008 privado no inscripto 1976 20,0 41º 39' 36" 71º 27' 27" 850 1300 16. Mallín Ahogado RN 2008 privado no inscripto 1981 5,0 41º 51' 51" 71º 29' 13" 600 950 17. Cuesta del Ternero RN 2008 Servicio Ftal. Andino 12R5513JP 1984 8,2 41º 54' 45'' 71º 24' 41'' 790 900 18. CFGSM Parcela 30 Ch 2008 INTA no inscripto 1954 0,3 41º 59' 35" 71º 31' 28" 380 950 19. Va. Turismo RN 2008 privado no inscripto ? 112 41º 59' 04" 71º 29' 52" 680 950 20. Las Golondrinas Ch 2008 DGByP Chubut 9U5513KP 1967 17,0 42º 02' 17'' 71º 32' 43'' 370 890 21. Club Hípico Ch 2008 Municipio El Maitén 23U5513JP 1980 21,7 42º 04' 10'' 71º 10' 11'' 700 470 22. Epuyén Ch 2008 privado no inscripto 1980 105,0 42º 13' 56" 71º 25' 12" 400 1200 23. EAFT Rodal 3 Ch 2008 INTA 6U5531KP 1956 7,1 43º 06' 36'' 71º 31' 36'' 375 1000 24. EAFT Rodal 7b Ch 2008 INTA 11U5531KP 1956 0,9 43º 07' 01'' 71º 31' 54'' 370 1000 25. EAFT Rodal 61 Ch 2008 INTA 2U5531KP 1955 0,4 43º 07' 05'' 71º 31' 45'' 365 1000 26. EAFT Rodal 21 Ch 2008 INTA 7U5531KP 1955 0,3 43º 07' 38'' 71º 33' 34'' 370 1000 27. EAFT Rodal 17e Ch 2008 INTA 3U5531KP 1956 0,5 43º 07' 43'' 71º 33' 30'' 370 1000 28. EAFT Rodal 17b Ch 2008 INTA 3U5531KP 1961 0,7 43º 07' 45'' 71º 33' 22'' 360 1000 29. EAFT cortina Ch 2008 INTA no inscripto 1955 0,4 43º 07' 45'' 71º 33' 20'' 360 1000 30. EAFT Rodal 23 Ch 2008 INTA 13U5531KP 1958 0,5 43º 07' 51'' 71º 33' 29'' 375 1000 31. EAFT Rodal 27 Ch 2008 INTA 14U5531KP 1956 2,0 43º 07' 58'' 71º 33' 45'' 365 1000 APS Propiedad Superf. ha Latitud Longitud Altitud Tabla 1. Áreas Productoras de Semillas (APS) de Pino Ponderosa incluidas en los ensayos de Las Golondrinas (Campo Forestal Gral. San Martín, INTA) y Trevelin (Estación Agroforestal Trevelin, INTA), con datos de su ubicación, regímenes pluviométrico y de propiedad, años de plantación y cosecha para los ensayos, y código de registro en el Instituto Nacional de Semillas. Evaluación genética en etapa de vivero de áreas productoras de semillas (APS) de Pino Ponderosa en Nordpatagonia Diciembre 2012, Argentina APS y, en caso de comprobar marcadas diferencias entre ellas, orientar las futuras evaluaciones. También se propone evaluar la estabilidad de la performance de las APS a través de distintos sitios de siembra y, en un futuro, de distintos sitios de plantación. Esta cualidad es importante al momentoal momento de seleccionar el material genético a propagar, ya que es deseable que la buena performance se repita en cualquiera de los sitios potenciales de plantación. MATERIALES Y MÉTODOS Ensayos Se cosecharon semillas de 31 rodales comerciales de Pino Ponderosa que en la última década han actuado como fuente semillera de la producción comercial de plantines para la región, y por lo tanto, pueden todos considerarse APS de fuente identificada según la definición del INASE (1999). Doce de estas APS se encuentran en la provincia de Neuquén, seis en la de Río Negro y trece en la de Chubut (tabla 1). Lamentablemente, se desconoce la localidad de origen de la semilla que dio lugar a cada uno de estos rodales comerciales. Las cosechas se realizaron en su mayoría en el año 2008 (25 de las 31 APS) siguiendo los modos habituales en la producción comercial de semillas a granel en la región. Así, se recolectaron los conos antes de su apertura, con pértigas o trepando a los árboles altos y se evitaron los de borde (salvo el rodal nombrado como “EAFT cortina”), los oprimidos y los mal formados o con problemas de sanidad. 271 En Las Golondrinas la siembra se hizo sin diseño experimental, en surquillos transversales al almácigo de siembra. Del 5 al 7 de octubre de 2009 se realizó el repique del almácigo de siembra a un almácigo de cría, disponiendo las plantas también en surquillos transversales, en un diseño experimental de parcelas completamente aleatorizadas con tres repeticiones. Cada parcela tuvo una dimensión de 70 plantas dispuestas en 7 filas y 10 columnas, donde las 40 plantas centrales fueron las de ensayo y el resto conformaron una bordura de una planta de ancho (figura 1). El distanciamiento entre plantas fue de 8 cm en la fila y 15 cm entre filas. Las plantas repicadas no fueron seleccionadas (sólo se descartaron las malformadas), y durante esta operación se realizó una poda manual de raíces. A comienzos de septiembre de 2010 se midió en cada planta de ensayo la altura total (h, con una aproximación de 0,5 cm) y el diámetro a la altura del cuello (d, con una aproximación de 0,01 mm) con la ayuda de un calibre electrónico. En Trevelin la siembra se realizó en 7 surcos longitudinales al almácigo, separados entre sí unos 15 cm. Ya que las plantas no serían repicadas, se dispuso el diseño experimental desde la siembra, que también fue en parcelas completamente aleatorizadas. Por escasez de semillas, dos de las 31 APS no pudieron ser ensayadas en Trevelin. El 12 de marzo de 2009 se realizó la poda de raíces en el sitio, con una cuchilla subsoladora tirada por un tractor a una profundidad de 15 cm. En la semana siguiente se llevó De cada uno de los 31 lotes de semillas se tomaron muestras que se dividieron en mitades para su siembra y manejo en dos sitios distintos y bajo dos sistemas de cultivo diferentes, utilizados tradicionalmente en la producción de plantas de pinos en la región. El sistema I se implementó en el vivero del Campo Forestal Gral. San Martín del INTA en el paraje Las Golondrinas al noroeste de Chubut (41º 59’ 55’’ S, 71º 31’ 35’’ W, 400 m snm), y consistió en una siembra en surquillos en almácigos a la intemperie, repique al año y cultivo por un año más en cancha de cría. El sistema de producción de plantas II se utilizó en el vivero de la Estación Agroforestal Trevelin del INTA (43º 7’ 19’’ S, 71º 33’ 43’’ W, 380 m snm), y consistió en una siembra en almácigo como en el sistema I pero a menor densidad para cultivar las plantas en el mismo lugar durante los 2 años de cría, sin un repique intermedio. Este sistema, requiere al año una poda de raíces sin descalce por medio de una cuchilla subterránea movida con tractor. Bajo este sistema, las plantas usualmente logran un mayor tamaño por tener un crecimiento más continuo. Para ambos sistemas de cultivo el tratamiento pre-germinativo fue el mismo: se pusieron las semillas en remojo por dos días, luego se estratificaron en frío por 40 días y finalmente se sembraron en ambos sitios el 7 de octubre de 2008. También las condiciones generales fueron equivalentes en cuanto al suelo y al manejo del riego, y en ninguno de los dos casos se fertilizó. Figura 1. Ensayo de APS de Pino Ponderosa establecido en el Campo Forestal Gral. San Martín del INTA, en Las Golondrinas. Plantas recién repicadas, con 1 año de edad. SCHINELLI, T.1; BASIL, G.2; TEJERA, L.1; HONORATO, M.1; GALLO, L.A.3; MONDINO, V.1 Y OTROS 272 ARTÍCULOS a cabo un raleo de plantas, para lo cual se dejaron 30 plantas de ensayo a un distanciamiento en la línea de unos 5 cm. Al igual que en Las Golondrinas, las plantas no fueron seleccionadas y sólo se descartaron las malformadas. La primera y la séptima línea de plantas actuaron como bordura, y en el cambio de una parcela a la siguiente también se dejó un par de plantas sin medir. A fines de mayo de 2010 se midieron las plantas de ensayo del mismo modo que en Las Golondrinas, aunque el diámetro con una precisión de 0,1 mm. Análisis de datos Se realizó un análisis de la varianza (ANOVA) para cada una de las dos variables por separado mediante el siguiente modelo estadístico lineal mixto: RIA / Vol. 38 / N.º 3 y ijkm µ γ i α j γ iα j pijkm eijk donde yijkm es una observación de la variable en consideración para la mésima planta del iésimo ensayo de la jésima APS ubicada en la késima parcela; µ es la media general de la variable en consideración; γi es el efecto (fijo) del iésimo ensayo; αj es el efecto (fijo) de la jésima APS; γi αj es el efecto (fijo) de la interacción entre el iésimo ensayo y la jésima APS; pijkm es el error de la subparcela NID(0, σ2p) y eijk es el error de la parcela principal NID(0, σ2e). Las pruebas estadísticas se llevaron a cabo con el procedimiento MIXED de SAS 9.1 (SAS/STAT® software), que utiliza algoritmos REML, y los parámetros descriptivos de media y dispersión de los datos con el procedimiento MEANS del mismo programa. Los gráficos de barras se confeccionaron con el programa R (R Development Core A B Figura 2. Promedio y su correspondiente desvío estándar para el diámetro y altura de las plántulas de Pino Ponderosa según sitio de ensayo y APS (barras oscuras: ensayo de Las Golondrinas, barras grises: ensayo de Trevelin; ver tabla 1 para identificación de APS). Evaluación genética en etapa de vivero de áreas productoras de semillas (APS) de Pino Ponderosa en Nordpatagonia Diciembre 2012, Argentina 273 Team, 2011). Los supuestos de normalidad fueron comprobados a través de histogramas y gráficos de probabilidad normal de los residuales, y la homocedasticidad con gráficos de residuales vs. valores predichos por el modelo. Para llevar a cabo todas las comparaciones posibles de a pares entre las APS, se realizó una prueba de Bonferroni para cada variable por medio del macro PDMIX800 de SAS (Saxton, 1998). Con el orden de las medias predichas por el modelo se confeccionaron los rankings para altura y diámetro. Con la ayuda del procedimiento CORR de SAS 9.1 se calculó la correlación entre ambas variables y entre ambos rankings. En el caso de verificarse interacción entre las APS y los sitios, resulta relevante estimar la estabilidad de su performance, o sea, el grado en que su condición de buena o mala APS se mantiene de un sitio a otro (e.g. Alia et al., 1995; Marlats et al., 2004). Para esto, se utilizará la aproximación de Wricke (1962) a través del cálculo de las ecovalencias (W). Este parámetro, mide la contribución de una Ensayo Golondrinas Altura Total APS Ensayo Trevelin Diámetro al Cuello Grupos APS Altura Total APS Gr. Junín R10 A Golondr A SanPe R1 Junín R12 A Junín R10 A Junín R12 Golondr A B AbraAn R5 A EAFT R17e Diámetro al Cuello APS Grupos Grupos SanPe R1 A SanPe R2 A B B MallinAho A B B C EAFT R17e A B A B AbraAn R8 A B SanPe R1 A B SanPe R2 AbraAn R5 A B C Epuyén A B IFONA 85 B C EAFT R21 A B SanPe R2 A B C D El Foyel A B Epuyén B C D CaciqFoyel A B EAFT R7b A B C D EAFT R17e A B Va. Turismo B C D E EAFT R23 A B C EAFT R61 A B C D MallínAho A B Junín R6 B C D E Epuyén A B C AbraAn R1 A B C D EAFT cort A B Lolog R2 B C D E EAFT R17b A B C D EAFT R21 A B C D Junín R12 A B EAFT R21 B C D E F ClubHípico A B C D E B C D EAFT R21 A B CaciqFoyel B C D E F AbraAn R1 B C D E Junín R6 AbraAn R10 B C D CuestaTern A B EAFT R17b B C D E F CuestaTern B C D E F EAFT cort B C D IFONA 85 A B MallinAho B C D E F AbraAn R5 B C D E F El Foyel B C D EAFT R17b A B AbraAn R1 B C D E F EAFT R61 B C D E F G EAFT R23 B C D EAFT R61 A B LosRepollos B C D E F IFONA 85 B C D E F G CFGSM P30 B C D SanPe R2 A B ClubHípico B C D E F AbraAn R8 B C D E F G CuestaTern B C D AbraAn R1 A B CuestaTern B C D E F LosRepollos B C D E F G IFONA 85 B C D EAFT R27 A B EAFT R61 B C D E F EAFT R7b C D E F G H LosRepollos B C D EAFT R23 A B ElManz R16 B C D E F Lolog R2 C D E F G H EAFT R17b B C D CFGSM P30 A B AbraAn R10 B C D E F EAFT cort C D E F G H B C D E F Junín R12 C D E F G H C D E F G H ClubHípico B C D AbraAn R8 A B AbraAn R8 ElManz R16 B C D EAFT R7b A B AbraAn R5 C D E F EAFT R3 EAFT R17e B C D Va. Turismo A B Junín R10 C D E F El Foyel Epuyén B C D CaciqFoyel A B EAFT R3 Junín R6 E F G H E F Junín R10 E F G H D E F D E F G H CaciqFoyel B C D LosRepollos A B El Foyel MallínAho B C D EAFT R3 A B EAFT cort E F Va. Turismo F G H Lolog R2 B C D ClubHípico A B EAFT R23 E F AbraAn R10 F G H SanPe R1 B C D Junín R6 A B EAFT R27 E F EAFT R7b F EAFT R27 C D AbraAn R10 A B A B EAFT R3 D Lolog R2 Va. Turismo D ElManz R16 EAFT R27 ElManz R16 G H H B Tabla 2. Ranking de APS de Pino Ponderosa según media de altura total y diámetro al cuello de plantas en los ensayos de Las Golondrinas y Trevelin. Letras distintas indican diferencias significativas en las comparaciones de a pares. SCHINELLI, T.1; BASIL, G.2; TEJERA, L.1; HONORATO, M.1; GALLO, L.A.3; MONDINO, V.1 Y OTROS 274 ARTÍCULOS RIA / Vol. 38 / N.º 3 determinada entidad genética ensayada (las APS en este caso) a la interacción genotipo X ambiente. Esto toma la siguiente expresión matemática: J Wi ∑ (Yij − Yi. − Y. j Y.. ) 2 × N i J j 1 donde W es la ecovalencia de la APS i; Yij es la media de la APS i en el ensayo j, Yi es la media de la APS i en ambos ensayos, Yj es la media de todas las APS en el ensayo j: Y es la media de todas las APS en ambos ensayos, Ni es el Ecoval altura % APS Ecoval diámetro % EAFT R21 0,02 CuestaTern 0,04 AbraAn R10 0,04 AbraAn R8 0,06 AbraAn R1 0,05 EAFT R61 0,14 EAFT R3 0,06 EAFT R3 0,17 CuestaTern 0,10 Junín R6 0,27 Junín R6 0,16 Epuyén 0,33 LosRepollos 0,27 AbraAn R1 0,33 ClubHípico 0,36 IFONA 85 0,39 EAFT R27 0,40 EAFT R7b 0,54 EAFT R61 0,41 LosRepollos 0,56 EAFT R17b 0,58 AbraAn R10 0,78 SanPe R2 0,65 Lolog R2 1,35 CaciqFoyel 1,27 EAFT R17b 1,54 Junín R12 1,27 AbraAn R5 2,11 MallínAho 1,73 EAFT R17e 2,82 Lolog R2 2,18 EAFT R23 2,95 Epuyén 2,45 EAFT cort 2,99 IFONA 85 2,47 EAFT R21 3,41 EAFT R23 3,00 Junín R12 3,55 El Foyel 3,01 MallínAho 3,73 AbraAn R8 3,09 Va. Turismo 3,79 EAFT cort 3,12 ClubHípico 6,16 Va. Turismo 3,68 El Foyel 6,27 ElManz R16 4,04 ElManz R16 6,92 AbraAn R5 4,44 EAFT R27 7,44 EAFT R17e 4,73 SanPe R2 7,46 AEFT R7b 7,90 SanPe R1 8,58 Junín R10 17,39 CaciqFoyel 11,56 SanPe R1 31,12 Junín R10 13,75 Tabla 3. Valores de ecovalencia para cada una de las APS de Pino Ponderosa incluidas en los ensayos de Las Golondrinas y Trevelin. número total de plántulas de la APS i incluidas en los dos ensayos, y J es el número de sitios de ensayo, en este caso 2. Valores cercanos a 0 sugieren estabilidad genética. Los valores de Wi se presentan en términos de porcentaje (Wi %) de la sumatoria de las ecovalencias de todas las APS, lo que es equivalente a la suma de cuadrados para la interacción. RESULTADOS Y DISCUSIÓN En el ensayo de Trevelin, bajo el sistema de cultivo II, las plantas lograron un mayor tamaño (media general del ensayo: hTrev = 13,6 cm; dTrev = 5,05 mm) que en el ensayo de Las Golondrinas, bajo el sistema I (media general del ensayo: hGol = 9,3 cm; dGol = 3,31 mm) (figura 2). El repique, probablemente, es la causa de la menor performance en valores de crecimiento inicial, ya que este procedimiento podría estar actuando como un factor de estrés del que estaría exento el sistema de cultivo II. Asimismo, la dispersión de los datos en el ensayo de Trevelin fue menor que en el ensayo de Las Golondrinas, tanto para la altura como para el diámetro (figura 2). La media entre las APS de los coeficientes de variación para altura en Trevelin fue: CVhTrev = 15,3 y para diámetro CVdTrev = 16,6; mientras que en Las Golondrinas fue: CVhGol = 19,4 y CVdGol = 23,8. Esto puede deberse también a los distintos sistemas de cultivo. Es posible que en el caso de Las Golondrinas la siembra sin diseño experimental y la manipulación de las plantas en el proceso de repique agreguen fuentes de variación ambiental adicionales que provoquen esta mayor dispersión. Los ANOVA permitieron probar para ambas variables una interacción significativa entre el efecto de los sitios y las APS (PhEnsa*APS < 0,001; PdEnsa*APS < 0,001), y se determinó que la diferencia entre las APS fue distinta en cada sitio. Con la apertura de esta interacción, se comprobaron diferencias significativas entre las APS dentro de cada sitio para las medias de ambas variables (en Las Golondrinas: PhAPS < 0,001; PdAPS = 0,011; en Trevelin: PhAPS < 0,001; PdAPS < 0,001). Este resultado central del estudio indica que no es lo mismo utilizar semillas de cualquier rodal comercial y que, aun sin mayor esfuerzo de selección, se verifican diferencias entre las APS a tan temprana edad. El resultado de las comparaciones de a pares se presenta en la tabla 2. Lo que se observa en general en estas comparaciones es que las APS que se diferencian son pocas. Sólo una o unas pocas de ellas son significativamente mejores o peores que algunas otras, dependiendo incluso de las variables y de los ensayos. Por lo tanto, algunas APS que resultaron buenas según su crecimiento en altura no lo fueron según su crecimiento en diámetro (e.g. Junín Rodal 12 en el ensayo de Trevelin) o viceversa (e.g. San Pedro Rodal 1 en el ensayo de Las Golondrinas). Existe una correlación significativa entre altura y diámetro, pero moderada (P < 0,001; r = 0,64). Asimismo, también se observó que algunas que resultaron buenas en un ensayo no lo fueron en el otro (e.g. San Pedro Rodal 1 para altura). Evaluación genética en etapa de vivero de áreas productoras de semillas (APS) de Pino Ponderosa en Nordpatagonia Diciembre 2012, Argentina Sin embargo, pese a la baja diferenciación descripta entre APS, en el ensayo de Trevelin pueden distinguirse algunas APS consistentemente ubicadas entre las mejores y otras entre las peores para ambas variables. Esta observación se verifica con el cálculo de la correlación entre los rankings establecidos por altura y diámetro, que aunque baja (r = 0,44) es significativa (P = 0,016). Así, tenemos para ambas variables a las APS San Pedro Rodal 1, San Pedro Rodal 2 y EAFT Rodal 17e entre las mejores, y a EAFT Rodal 27 y El Foyel entre las peores. En el caso del ensayo de Las Golondrinas, no se pudo probar correlación entre los rankings de ambas variables (P = 0,088). En la tabla 3 se presentan las ecovalencias calculadas para cada una de las APS (excepto las ensayadas sólo en Las Golondrinas). Se puede asumir que aquellas con valores porcentuales de ecovalencia menores a 2 muestran una alta estabilidad genotípica, ya que su aporte a la interacción genotipo X ambiente es muy bajo. Al combinar los rankings por altura y diámetro con los valores de ecovalencia se pueden destacar algunas APS. EAFT Rodal 3 y EAFT Rodal 27, están entre las peores, tanto para altura como para diámetro, y también entre las más estables (salvo la segunda para diámetro). San Pedro Rodal 1 y San Pedro Rodal 2, están entre las mejores para ambas variables en Trevelin, pero no sucede lo mismo en Las Golondrinas, lo que se ve reflejado en su baja estabilidad. Junín Rodal 12 es una de las APS con mayor crecimiento en altura en ambos ensayos, por lo que el valor de su ecovalencia acusa una alta estabilidad, pero en cuanto a diámetro promedia el ranking con una ecovalencia moderada. Algo similar ocurre con EAFT Rodal 21, con una mejor performance en su crecimiento diamétrico. Adicionalmente a los rankings establecidos entre las 29 APS ensayadas en ambos sitios, se destaca una de las dos que pudieron ser incluidas sólo en el ensayo de Las Golondrinas: la homónima Las Golondrinas y CFGSM P30. De ellas, Las Golondrinas resultó ser la de diámetro más grueso y tercera en el ranking de altura. Aunque no se puede evaluar su estabilidad, su buena performance amerita a que sea particularmente tenida en cuenta en futuros ensayos. Finalmente, las observaciones comparativas logradas mediante estos dos ensayos sirven para interpretar tendencias, pero la escasa diferenciación entre las APS ensayadas y la dispersión de datos inflada en uno de los ensayos indican que estos resultados son preliminares. Con estas plantas, se han establecido recientemente ensayos de plantación que permitirían, en los próximos años, lograr una mayor precisión en la discriminación entre las APS. Sin embargo, haber probado diferencias en tan temprana edad alienta a esperar probarlas de un modo más contundente en edades más avanzadas. CONCLUSIONES En base a los resultados, pudieron probarse diferencias significativas entre las APS. Entre las locales más promisorias se encuentran Junín Rodal 12, EAFT Rodal 21 y San 275 Pedro Rodal 1. No obstante, aún restan algunos años más de estudio para contar con conclusiones que permitan hacer recomendaciones útiles para la selección y el uso de las APS locales de Pino Ponderosa. AGRADECIMIENTOS Agradecemos a Silvia Focarazzo y a Matías Fariña por la provisión de semillas de algunas de las APS ensayadas. Este estudio ha sido financiado con el proyecto nacional de INTA “Mejoramiento genético de pinos subtropicales y templados para usos de alto valor” (PNFOR1201). BIBLIOGRAFÍA ALIA, R.; GIL, L.; PARDOS, J.A. 1995. Performance of 43 Pinus pinaster Ait. provenances on 5 locations in Central Spain. Silvae Genetica 44: 75-81. 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J. 2; DEL PARDO, C.1 RESUMEN El objetivo de este trabajo fue evaluar la incidencia del sistema de manejo y la textura del suelo sobre el desarrollo del sistema radicular y el diámetro de tronco del duraznero cv Dixiland cultivado sobre un Argiudol vértico de la Serie Ramallo bajo condiciones de secano, en el norte de la provincia de Buenos Aires, Argentina. Se ensayó con tres sistemas de manejo del suelo: labores mecánicas, sin labranza con control químico de malezas y cobertura vegetal. Se caracterizó la distribución de raíces en sentido horizontal y vertical por medio del número de raíces obtenido con el método de “trinchera”. Se determinó la densidad aparente con el método del cilindro, la textura de los horizontes del suelo hasta los 75 cm de profundidad y el diámetro de tronco. Los resultados obtenidos mostraron que, tanto el laboreo mecánico como el no laboreo del suelo con control químico de malezas, están asociados a un mayor desarrollo del diámetro del tronco y del sistema radicular en los primeros 40 cm. de profundidad respecto del tratamiento con cobertura vegetal. El desarrollo del estrato superficial de raíces se ve restringido, tanto por el laboreo mecánico como por la cobertura vegetal del suelo y la textura explica su desarrollo en profundidad. Palabras clave: Prunus persica L., raíces, labranzas, textura. ABSTRACT The objectives of this work were to evaluate the effect of three soil management systems and soil texture on root system growth and trunk diameter of Dixiland peaches grown in an Argiudol vértico, Ramallo Series soil in Northern Province of Buenos Aires, Argentina. Three soil management systems were tested: mechanical tilling, no tilling with chemical weed control and plant coverage. Horizontal and vertical root distribution was evaluated by determining the number of roots by the “trench” method. Apparent density was determined by the cylinder method. Texture of soil horizons was determined up to 75 cm deep, and trunk diameter was measured. The results showed that both mechanical tilling and no tilling with chemical weed control were associated to a higher trunk diameter and root system development in the first 40 cm of soil, as compared to the plant coverage system. Mechanical tilling and plant coverage restrained superficial root development, while root indepth development was associated to soil texture. Keywords: Prunus persica L., roots, tilling, texture. EEA INTA San Pedro. Ruta 9, km 170 (2930), San Pedro Provincia de Buenos Aires. Argentina. Correo electrónico: [email protected] 2 UBA, Facultad de Agronomía. Av. San Martín 4453 Buenos Aires, Argentina. 1 Recibido 28 de febrero de 2012// Aceptado 22 de agosto de 2012// Publicado online 02 de octubre de 2012 Desarrollo radical en plantas de duraznero sometidas a diferentes manejos del suelo Diciembre 2012, Argentina INTRODUCCIÓN El efecto que ejercen los sistemas de manejo y la textura del suelo sobre el patrón de distribución de raíces de especies arbóreas fue estudiado por diversos autores con distintos enfoques. Schaller et. al. (1999), observaron que en especies maderables de crecimiento rápido, como Eucalytus deglupta y Cordia alliodora, la presencia de gramíneas modifica la simetría horizontal del sistema radicular. Yocum (1937), encontró que el maíz cultivado entre hileras de manzano restringe el desarrollo de las raíces del manzano en sentido horizontal y lo aumenta en el sentido vertical. Borges de Carvalho et al. (2006), trabajaron en cítricos y papaya y encontraron que la presencia de malezas, el empleo de cobertura vegetal y el laboreo del suelo modifican el desarrollo en sentido horizontal y vertical del sistema radicular de los frutales. Sotomayor et al. (2004), establecieron que las plántulas de duraznero Nemaguard presentaron un menor desarrollo radicular cuando son cultivadas en suelos con problemas de alelopatía. Aruani y Behmer (2004), estudiaron el efecto de la textura del suelo sobre la distribución de raíces en manzano y encontraron que en suelos de granulometría media la resistencia a la penetración es mayor que en los de granulometría gruesa. El presente trabajo tuvo por objetivo evaluar el efecto de los sistemas de manejo y la textura del suelo sobre el desarrollo del sistema radicular y el diámetro de tronco del duraznero en condiciones de secano. MATERIALES Y MÉTODOS El ensayo se realizó en el campo experimental del INTA San Pedro, en la zona norte de la provincia de Buenos Aires. Se trabajó sobre una plantación de duraznero, variedad Dixiland sobre porta injerto cuaresmillo, con un marco de plantación de 5 x 6 m. Según Strahler (1969), la caracterización climática de la zona de influencia de la EEA San Pedro corresponde a un clima subtropical húmedo con precipitaciones abundantes en primavera y verano e inviernos fríos. El régimen térmico presenta una máxima de 23,9 ºC en enero y una mínima de 10,3 ºC en julio. El régimen pluviométrico se caracteriza por presentar máximas de 1531,8 mm (1978), mínimas de 715,5 mm (2005) y un promedio anual de 1065,9 mm (Uviedo, 1990). El suelo sobre el que se realizó el ensayo es un Argiudol vértico, Serie Ramallo, de textura superficial franco-arcillolimoso, escurrimiento lento y baja permeabilidad, ligeramente plástico y adhesivo. El ensayo se extendió durante 10 años en condiciones de secano y los tratamientos aplicados fueron los siguientes: Laboreo Mecánico (LM): se controlaron las malezas en el espacio interfilar en primavera-verano, con rastra de discos 277 Horizonte Profundidad Limo Arcilla Arena Clase textural (cm) (%) (%) (%) A1 00-30 56 35 9 Franco-arcillo-limoso B1 30-40 46 46 9 Arcillo limoso B2 40-80 38 56 6 Arcilloso Tabla 1. Clase textural para cada horizonte del suelo. a 12 cm de profundidad y alomado en la fila con arado de reja y vertedera. La vegetación naturalizada cubre el suelo durante el período de receso otoño-invernal. Sin Labranza (SL): se controlaron las malezas con glifosato 48 % y terbacil PM 80 % en toda la superficie. Cobertura Vegetal (CV): se aplicaron herbicidas en la fila hasta la proyección de la copa, glifosato CE 48 % y terbacil PM 80 %. En el terreno entre filas, la vegetación naturalizada compuesta por gramón (Cynodon dactylon), trébol blanco (Trifolium repens), cebadilla criolla (Bromus unioloides) y pasto miel (Paspalum dilatatum) se dejó crecer sin intervención y se realizaron solamente cortes periódicos para mantenerla a baja altura. No se realizó fertilización en ninguno de los tratamientos. Se trabajó sobre los horizontes A1; B1 y B2, se determinó la textura para cada horizonte (tabla 1) y la densidad aparente por el método del cilindro a 0-10; 10-20 y 20-30 cm de profundidad, con nueve repeticiones por cada tratamiento. Se determinó el número de raíces por el método de “trinchera”, mediante el empleo de un marco vertical de 1 m de ancho y 75 cm de profundidad, dividido en cuadrículas de 5 x 5 cm. Para los tratamientos LM y SL, se realizaron “trincheras” en tres posiciones diferentes respecto del tronco: a 0,5 m en la dirección de la fila y a 0,5 m y 2 m en la dirección entre filas. Para el tratamiento CV, sólo se realizaron “trincheras” en la posición 2 m entre filas, por considerar que las determinaciones a 0,5 m en la fila y en el espacio entre filas serían similares a las de los otros dos tratamientos. Se contó el número de raíces en intervalos de 5 cm desde la superficie hasta los 75 cm de profundidad y se sumaron las observaciones de las 20 cuadrículas para obtener el total de cada intervalo. También se determinó el diámetro de tronco para cada tratamiento. Las observaciones se realizaron luego de la caída de hojas, durante el mes de mayo. Se empleó un diseño experimental completamente aleatorio con tres tratamientos y tres repeticiones, con dos árboles por repetición. Las medias de los tratamientos se compararon por medio de un análisis de varianza con un nivel de significancia del 5 % y se clasificaron con el test de Tukey. También se realizó un análisis de regresión y correlación lineal para determinar el grado de asociación entre el número de raíces y el diámetro de tronco. Para analizar la distribución de raíces, se agruparon los datos obtenidos en dos categorías: raíces totales (0-75 cm) y superficiales (0-15 cm), a la vez, se compararon las distintas posiciones dentro de cada tratamiento y los tratamientos entre sí para la posición de 2 m entre filas. GONZALEZ, J.1; FERNÁNDEZ, J. R.2; SANTANATOGLIA, O. J. 2; DEL PARDO, C.1 278 ARTÍCULOS RESULTADOS Análisis de raíces totales y superficiales En el análisis del total de raíces (0-75 cm) se realizaron dos comparaciones. Por un lado se contrastó el total de raíces entre las distintas posiciones respecto del tronco para los tratamientos LM y SL, sin diferencias significativas (P>0,05) en ningún caso. Por otra parte, se contrastó el total de raíces entre tratamientos dentro de cada posición RIA/ Vol. 38/N.º 3 y se encontró que para LM y SL no hay diferencias significativas (P>0,05) en las posiciones 0,5 m fila y 0,5 entre fila. A su vez, para la posición 2 m entrefila, el tratamiento CV presentó un menor número de raíces respecto de LM y SL, pero estas últimas no se diferenciaron significativamente entre sí (P>0,05). El análisis del estrato superficial de raíces (0-15 cm) entre las posiciones respecto del tronco para cada tratamiento, indicó que LM tuvo menor número de raíces en la Figura 1. N.º de raíces totales bajo distintos tratamientos del suelo en diferentes posiciones respecto del tronco de los árboles. Las líneas horizontales corresponden a la media y las barras verticales al desvío típico. Figura 2. N.º de raíces superficiales (0-15 cm) bajo distintos tratamientos del suelo en diferentes posiciones respecto del tronco de los árboles. Las líneas horizontales corresponden a la media y las barras verticales al desvío típico. Desarrollo radical en plantas de duraznero sometidas a diferentes manejos del suelo Diciembre 2012, Argentina 279 74 y 75 % del total de raíces, en tanto que el tratamiento CV acumuló el 60 % del total de raíces. También, se observó que no se modificó la densidad aparente en el horizonte superficial (A1) ya que no se apreciaron diferencias significativas (P>0,05) entre tratamientos para esta propiedad (tabla 2). Número de raíces y diámetro de tronco La comparación del diámetro de tronco entre tratamientos (figura 5), indicó que los tratamientos LM y SL presentaron un mayor diámetro de tronco respecto del tratamiento CV, pero no se diferenciaron significativamente (P>0,05) entre sí. Se analizó el grado de asociación entre el número de raíces y el diámetro de tronco mediante un análisis de regresión lineal y correlación (figura 6). Se observó una correlación significativa (P<0,05), si bien el grado de ajuste (R2 = 0,3532) es bajo. DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES Los resultados obtenidos mostraron que los sistemas de manejo del suelo ensayados a lo largo de 10 años afectaron de manera diferencial el desarrollo de las raíces del duraznero. Figura 3. Distribución vertical de raíces totales bajo distintos tratamientos del suelo. Las barras horizontales corresponden al desvío típico. A1; B1 y B2: horizontes del suelo. posición 2 m entrefila respecto de las posiciones 0,5 m fila y 0,5 m entrefila, en tanto que SL no presentó diferencias significativas (P>0,05) entre posiciones. Las comparaciones entre tratamientos en la posición 2 m entrefila mostraron que, SL presentó mayor número de raíces superficiales respecto a CV y LM, pero estas últimas no se diferenciaron significativamente entre sí (P>0,05). Distribución vertical de raíces, textura y densidad aparente El análisis de la distribución vertical de raíces mostró que las diferencias en el número de raíces entre tratamientos se expresaron con mayor nitidez en los horizontes con textura franco-arcillo-limoso (A1) y arcillo limoso (B1), correspondientes al estrato de 0-40 cm de profundidad. Por otro lado, en el horizonte con textura netamente arcillosa (B2), correspondiente al estrato de 40-75 cm de profundidad, las diferencias entre tratamientos se van reduciendo progresivamente. En la figura 3, se observa que el tratamiento SL presentó una mayor concentración de raíces respecto de los tratamientos LM y CV hasta aproximadamente los 15 cm de profundidad. A partir de allí, las diferencias entre tratamientos se van reduciendo a medida que profundizamos en el perfil del suelo. En la figura 4, se observa que a los 40 cm de profundidad los tratamientos LM y SL acumularon el El tratamiento con cobertura vegetal viva, mantenida con cortes periódicos, ocasionó un menor desarrollo del sistema radical y del diámetro de tronco respecto de los tratamientos basados en el laboreo mecánico o sin laboreo pero con control químico de las malezas (figuras 1 y 5). Esto, probablemente, a causa de la competencia interespecífica por los recursos edáficos. El resultado, contrasta con lo observado por otros autores como Borges de Carvalho et al. (2006), quienes observaron que la incorporación como abono verde de la cobertura vegetal mejora las propiedades físicas, químicas y biológicas del suelo al favorecer el crecimiento radicular de frutales. De manera similar, Aruani et al. (2006) encontraron que la cobertura vegetal empleada como cobertura muerta mejora la fertilidad del suelo pero no informan sobre el comportamiento de las raíces en manzano. En ambos casos, se produce la supresión de la competencia por los recursos edáficos por parte de la cobertura vegetal viva de manera similar al efecto producido por los tratamientos LM y SL que mantuvieron libre de vegetación espontánea la entrefila por medios mecánicos (LM) o químicos (SL). Adicionalmente, el tratamiento SL al no producir el daño mecánico permitió un mayor desarrollo del estrato superficial de raíces (figura 2). En el Argiudol vértico del ensayo, la mayor densidad de raíces se concentró en el estrato de 0-40 cm de profundidad (figura 3), con una textura que varió de franco-arcillolimoso (horizonte A1) a arcillo-limoso (horizonte B1). Mientras, el resto de las raíces se desarrollaron en el estrato de 40-75 cm, con textura netamente arcillosa (horizonte B2). EL efecto de los tratamientos LM y SL se observa con mayor nitidez en los primeros 30 cm del perfil del suelo donde la densidad aparente se mantiene sin variaciones signifi- GONZALEZ, J.1; FERNÁNDEZ, J. R.2; SANTANATOGLIA, O. J. 2; DEL PARDO, C.1 280 ARTÍCULOS RIA/ Vol. 38/N.º 3 Figura 4. Porcentaje acumulado de raíces totales bajo distintos tratamientos del suelo. En intervalos de 5 cm de profundidad. A1; B1 y B2: horizontes del suelo. Tratamientos Profundidad Densidad aparente (cm) (g cm-3) 0-10 Labranza mecánica 10-20 20-30 0-10 Sin labranza 10-20 20-30 0-10 Cobertura vegetal 10-20 20-30 Tukey 5% C.V % 1,279 n.s. 9,9 1,315 n.s. 2,9 2,2 1,31 n.s. 1,248 n.s. 9,9 1,249 n.s. 2,9 2,2 1,312 n.s. 1,308 n.s. 9,9 1,299 n.s. 2,9 1,311 n.s. 2,2 Tabla 2. Densidad aparente del horizonte A1 bajo distintos tratamientos del suelo. En intervalos de 10 cm de profundidad. Figura 5. Diámetro de tronco bajo distintos tratamientos del suelo. Las líneas horizontales corresponden a la media y las barras verticales al desvío típico. Figura 6. Correlación y regresión lineal entre N.º de raíces totales (variable independiente) y diámetro de tronco (variable dependiente). Desarrollo radical en plantas de duraznero sometidas a diferentes manejos del suelo Diciembre 2012, Argentina cativas (tabla 2). A partir de los 40 cm de profundidad las diferencias entre tratamientos se diluyen progresivamente, coincidiendo con el aumento en el contenido de arcilla del horizonte B2 (tabla 1). Estos resultados, sugieren que la distribución de raíces en profundidad estuvo condicionada por la textura del suelo. Esto sucede de manera similar a lo observado por Avilan et al. (1981) y Hodge et al. (2009), quienes encontraron que la textura, entre otros factores físicos y químicos del ambiente edáfico, condicionan la distribución radical en el perfil del suelo. Aruani y Behmer (2004), encontraron que la resistencia a la penetración del suelo se incrementa a medida que la granulometría se hace más fina. La comparación de la densidad de raíces entre las distintas posiciones respecto del tronco en el tratamiento SL mostró que no hay diferencias significativas tanto en el total como en el estrato superficial de raíces (figuras 1 y 2). Esto se debió, probablemente, a que el marco de plantación utilizado (5 x 6 m) limitó los efectos alelopáticos entre las raíces del duraznero. Este resultado, contrasta con lo hallado por Gutiérrez Acosta (2002), quien observó que la densidad de raíces tiende a disminuir a medida que nos alejamos del tronco. Por su parte, Gómez y Gómez (2011), encontraron que la densidad de plantación condiciona la expresión de los efectos alelopáticos que existen entre las raíces del duraznero (Sotomayor et al., 2004). El ensayo también mostró que el desarrollo radical se correlacionó positivamente con el diámetro de tronco (figura 6), que es un evaluador del crecimiento y la productividad en durazneros (Valentini y Arroyo, 2011). Los tratamientos que presentaron mayor desarrollo radical (LM y SL) también tuvieron mayor diámetro de tronco respecto del tratamiento con menor desarrollo de raíces (CV). BIBLIOGRAFIA ARUANI, M. C.; BEHMER, S. 2004. Efecto de la Granulometría y la compactación del suelo sobre la distribución de raíces en manzano. Revista de Investigaciones Agropecuarias, Vol. 33 N.º 2. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, Buenos Aires, Argentina. 281 ARUANI, M. C.; SÁNCHEZ, E.; REEB, P. 2006. Cambios en las propiedades de un suelo franco bajo producción orgánica de manzano utilizando coberturas vegetales. Ciencia del Suelo, Vol. 24 (2), 131-137. Argentina. AVILÁN, L. R; MENESES, L; SUCRE, R Y FIGUEROA, M. 1981. Distribución del sistema radical del níspero (Manilkara achras Mill.) Fosberg. Agronomía Tropical, 31 (1-6): 247-254. Venezuela. BORGES DE CARVALHO, J. E; J. E., LEONE AZEVEDO, C. L; OLIVEIRA REZENDE, J. 2006. 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GONZALEZ, J.1; FERNÁNDEZ, J. R.2; SANTANATOGLIA, O. J. 2; DEL PARDO, C.1 282 ARTÍCULOS RIA/ Vol. 38/ N.º 3 Cinética de degradación y persistencia de clorpirifós en mandarinas y naranjas del Noreste argentino (NEA) KULCZYCKI, C.1; NAVARRO, R.2; TURAGLIO E.2; BECERRA, V.2; SOSA, A.1 RESUMEN Las normativas legales sobre residuos de plaguicidas son cada vez más exigentes. Con frecuencia, hay una reducción significativa en el Límite Máximo de Residuos (LMR) y en casos severos una prohibición de su uso. La estrategia de control fitosanitario debe tener en cuenta los niveles de residuos que quedan en la fruta y la cinética de disipación que disminuye los riesgos toxicológicos y comerciales. El clorpirifós es un insecticida utilizado en cítricos para el control de diversas plagas. La legislación argentina establece un LMR de 0,3 mg/kg para fruta entera y un Período de Carencia (PC) de 21 días. Este valor coincide con el exigido por la Unión Europea (UE), excepto en mandarinas, y por la Federación de Rusia. En el presente trabajo se estudió la cinética de degradación y persistencia del clorpirifós en dos variedades de naranjas y tres de mandarinas. Los ensayos se realizaron con clorpirifós 48% (concentrado emulsionable) en la preparación de un caldo con 120 cm3 cada 100 L de agua. Se utilizó una pulverizadora de turbina y un volumen de 2000-2500 l/ha. La degradación de residuos en frutas se estudió durante 120 días con toma de muestras periódicas. Los datos experimentales se utilizaron para establecer un modelo matemático de degradación en función del tiempo. En todos los casos, los residuos iniciales superaron el LMR y la disipación siguió un modelo logarítmico. Hasta el PC la eliminación fue rápida, con una reducción del 69 al 82% de los residuos. Luego continuó una fase de eliminación más lenta con niveles al final del ensayo entre 0,03 mg/kg y 0,01 mg/kg. En el PC se cumple con el LMR fijado por la legislación nacional y de los países compradores. La aparición de residuos en el final del ensayo indica una gran persistencia del clorpirifós. Palabras clave: residuos de plaguicidas, curva de degradación, legislación. ABSTRACT Legal normatives for pesticides residues are becoming more restrictive. Frequently, significant reductions are applied to the Maximum Residue Levels (MRL), including in some cases, prohibition of their use. Modern phytosanitary strategies must consider insecticide residue levels as well as dissipation rates in fruits in order to overcome increasing pesticide restrictions and reducing both toxicological and commercial risks. Argentine legislation for chlorpyrifos, a widely used insecticide for controlling different citrus pests, establishes MRL of 0.3 mg/kg for whole fruits including a Pre-Harvest Interval (PHI) of 21 days. These values coincide with those established by the European Union (EU), except for mandarins, and also with those of the Russian Federation. In this paper, degradation rates and persistence of chlorpyrifos were studied on two orange and three mandarin varieties. Assays were performed using chlorpyrifos 48 (emulsifiable concentrate), suspending 120 cm3 in 100 L of water using an air blast sprayer and volumes of 2000 to 2500 l/ha. Pesticide degradation in fruit Estación Experimental Agropecuaria Concordia INTA - Estación Yuquerí s/n. C.C. 34. E3200AQK.Concordia, Entre Ríos. Correo electrónico: [email protected] 2 Estación Experimental Agropecuaria Mendoza INTA. -Mendoza. San Martin 3853 (5507), Luján de Cuyo, Mendoza. 1 Recibido 29 de marzo de 2012// Aceptado 03 de Octubre de 2012// Publicado online 30 de octubre de 2012 Cinética de degradación y persistencia de clorpirifós en mandarinas y naranjas del Noreste argentino (NEA) Diciembre 2012, Argentina 283 was studied for a 120-day period since insecticide application and fruit samples were taken a different time intervals. Experimental data were used to perform a mathematical model where degradation was considered as a function of time. In all cases, initial residue levels were found above MRL established for the national legislation, while dissipation followed a logarithmic model. Dissipation of chlorpyrifos followed a fast rate till PHI was reached, with 69 to 82% of insecticide residues being eliminated. Since then, dissipation rates were slower than initially, reaching at the end of the experiment levels of 0.03-0.01 mg/kg. Residue levels of chlorpyrifos were below the MRL of Argentina´s and export countries legislation at the moment PHI was reached. However, presence of residues at the end of the assay showed great persistence of chlorpyrifos in citrus fruit. Keywords: pesticide residues, dissipation curve, legislation. INTRODUCCIÓN La creciente demanda de alimentos inocuos ha generado, desde hace más de una década, una situación compleja y problemática en lo que respecta a la producción de agroalimentos “libres de residuos”. Las normativas legales internacionales son cada vez más exigentes. En muchos casos han provocado una reducción sustancial de los LMR a valores de “límites de detección” y, en casos extremos, una prohibición de su uso. La UE, principal mercado de exportación de cítricos argentinos, reconsideró todos los principios activos registrados en la directiva 91/414/CEE (Legislación comunitaria, 1991). Desde el año 2005 fueron expuestos a una dinámica revisión que provocó el retiro de la lista positiva de más de 500 plaguicidas (Legislación comunitaria, 2008). Además, quedaron 167 con tolerancia “transitoria” hasta su disposición final (Legislación comunitaria, 2005). El segundo mercado en importancia es la Federación de Rusia que tiene su propia legislación de residuos de plaguicidas (Servicio Federal de Control Veterinario y Fitosanitario, 1978). A veces, los valores de LMR adoptados presentan grandes divergencias con lo estipulado por el Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA). En este contexto de complejidad hay que mencionar los requisitos extra-regulatorios para la comercialización de frutas y hortalizas frescas. Por ejemplo, algunos supermercados no aceptan que los productos tengan más de 3 a 5 residuos de plaguicidas o que los niveles de residuos superen el 50% del LMR fijado por la autoridad sanitaria. La presencia de residuos de plaguicidas en cítricos junto a las plagas cuarentenarias constituye la principal restricción de ingreso a los diferentes mercados. Los permanentes cambios deben ser analizados por todos los actores vinculados al sector citrícola para conocer el impacto de las reformas y establecer las estrategias de control fitosanitario más adecuadas (Coscollá, 1998). A pesar de esto, es escasa la información sobre los niveles de residuos de plaguicidas. El clorpirifós es un insecticida organofosforado que se utiliza en la citricultura para el control de diversas plagas. La legislación argentina (SENASA, 2010) establece un LMR de 0,3 mg/kg para fruta entera y un PC de 21 días. El valor coincide con lo establecido por la Federación de Rusia (Servicio Federal para el control en el ámbito de la protección de los derechos de los consumidores y el bienestar de la persona, 2010) para naranjas y mandarinas. Mientras que la UE (Legislación comunitaria, 2005) estipula un LMR para mandarina de 2 mg/kg y de 0,3 mg/kg para naranja. La finalidad del trabajo es ofrecer al sector citrícola nacional información sólida que les permita predecir niveles de residuos desde el momento de aplicación de clorpirifós y prevenir excesos de residuos (INTA, 2009). El objetivo fue estudiar la cinética de degradación y persistencia del clorpirifós en mandarinas y naranjas de la región del NEA. MATERIALES Y METODOS Características de las plantaciones Los experimentos se realizaron en lotes ubicados en la Estación Experimental Agropecuaria (EEA) Concordia del INTA, en tres variedades de mandarinas: Satsuma Owari (MOW), Nova (MNO) y Ortanique (MOR) y dos variedades de naranjas: Valencia Midknight (NVA) y Salustiana (NSA). Variedad Edad Distancia de N° de Diámetro platación plantas de copa Altura MOW 40 7x7 84 4,0 4,1 MNO 17 4x6 19 2,1 2,3 MOR 21 4x6 19 3,3 2,6 NVA 17 4x6 20 3,3 3,3 NSA 21 4x6 18 3,2 2,8 Tabla 1. Características generales de lotes experimentales en Satsuma Owari (MOW), Nova (MNO), Ortanique (MOR), Valencia Midknight (NVA) y Salustiana (NSA). Tecnología de pulverización y condiciones climáticas Las aplicaciones se realizaron bajo buenas prácticas agrícolas con pulverizadora de turbina “Jacto Arbus 2000”. El caldo se preparó con clorpirifós 48% concentrado emulsionable adicionando 120 cm3 de producto por cada 100 L de agua. El volumen aplicado se reguló con la velocidad de avance constante y el caudal por pico. Las condiciones climáticas afectan los niveles de residuos y la cinética de degradación, especialmente durante los primeros días. En cada ensayo se midió la temperatura KULCZYCKI, C.1; NAVARRO, R.2; TURAGLIO E.2; BECERRA, V.2; SOSA, A.1. 284 ARTÍCULOS RIA/ Vol. 38/ N.º 3 Vel. Fecha Vol. de T. inicial Viento Variedad Hum. r. de inicio caldo (l/ha) (°C) (km/h) MOW 08-03-10 2000 24,7 5,2 71 MNO 31-05-10 2560 12,9 5,3 63 MOR 13-07-10 2560 8,6 5,6 51 NVA 13-07-10 NSA 31-05-10 2560 2560 8,6 5,6 51 12,9 5,3 63 Tabla 2. Condiciones de la pulverización en Satsuma Owari (MOW), Nova (MNO), Ortanique (MOR), Valencia Midknight (NVA) y Salustiana (NSA). (°C), radiación solar (W/m ) y precipitaciones (mm) a través de una estación meteorológica automática “Adcon Telemetry” ubicada en la EEA Concordia. 2 Toma de muestras La misma se realizó al inicio del experimento, a los 21, 28, 35, 42, 49, 65, 80, 100 y 120 días, (123 para MNO y NSA). De cada lote se seleccionaron ocho plantas centrales y se cosecharon, aproximadamente, 5 kg de fruta. La recolección se hizo a una altura de 1.5 ± 0,50 m seleccionando frutas sanas y de tamaño uniforme. Índice de madurez, porcentaje de jugo y diámetro ecuatorial de fruta Durante el desarrollo de los frutos se produce la dilución de los residuos que da lugar a una “eliminación aparente” (Coscollá, 1993). Para evaluar esta situación en cada toma de muestra se midió el diámetro ecuatorial de 15 frutas. Los resultados fueron analizados estadísticamente por comparación de medias utilizando el software Statgraphics Plus 5.1. Además se midieron los parámetros de calidad interna para conocer el Indice de Madurez (IM) de la fruta definido como la relación sólidos solubles/acidez y también el porcentaje de jugo. Los sólidos solubles se determinaron con refractómetro digital Reichert r2 mini, los resultados se expresaron en ºBrix corregido. La acidez titulable se determinó por potenciometría usando NaOH 0,1 N. Los resultados se expresaron en gramos de ácido cítrico anhidro por 100 ml de jugo. Para la determinación del porcentaje de jugo se siguió la metodología oficial argentina (SENASA, 2001). Análisis de residuos En base a las recomendaciones del Códex Alimentarius (1999) de cada muestra se eligieron al azar 10 frutas que fueron trituradas con una picadora “Moulinex AD 56” hasta alcanzar una pasta homogénea. Se tomó una muestra de 500 g y se almacenó en freezer a -18 °C hasta el análisis cromatográfico. Los análisis se realizaron en el laboratorio de pesticidas del Centro de Estudios de Fitofarmacia de la EEA Mendoza del INTA. La extracción del plaguicida se realizó con el método de extracción para organofosforados (AOAC 985.22, 1995) modificado y validado por el laboratorio. La determinación analítica se hizo con un cromatógrafo “Agilent Technologies 6890 N” con inyector automático Agilent Technologies 7683 B” y detector NPD. El límite de cuantificación fue de 0,03 mg/kg y el límite de detección fue de 0,01 mg/kg. Para determinar el mejor ajuste de los datos se probaron diferentes modelos tales como exponencial, potencial y logarítmico con el programa Microsoft Office Excel 2007 para una probabilidad p=0.05. RESULTADOS Y DISCUSIÓN La recuperación del método de análisis presentó valores entre 85-90%. En las figuras 1 y 2, se presentan las curvas de degradación de clorpirifós en mandarinas, como naranjas durante 120/123 días, excepto para mandarina Satsuma Owari, de 65 días (la fruta madura no resistió mucho tiempo en el árbol). El nivel de residuos inicial fue más alto para MNO, de 0,81 mg/kg y para NSA, con 0,76 mg/kg. Le siguieron, MOR con 0,65 mg/kg, NVA con 0,51 mg/kg y MOW que presentó el nivel de residuos más bajo, con 0,39 mg/kg. La degradación de los residuos presentó características similares tanto en mandarinas como en naranjas. En todos los casos el modelo de disipación logarítmico fue el más adecuado, con altos valores de correlación (R2>0,98) (tabla 3). Esto significa que hay dos fases de disipación, la primera de eliminación fue rápida con una reducción de los residuos del 69-82% al cumplirse el PC. Luego, una fase de eliminación más lenta con valores que tendieron a una asíntota. La cinética de degradación confirma los resultados encontrados en naranja Valencia (González, 2002; Iwata et al., 1982), en naranja Navelina (Montemurro et al., 2002) y en limones (Lacina et al., 2010). Diámetro (mm)* MOW inicial 67 a MNO 67 bc MOR 73 a NVA 77 NSA c 75 bc 21 64 a 73 c 73 a 76 bc 81 c 28 68 a 67 b 71 a 73 bc 74 a 35 64 a 70 bc 71 a 73 bc 73 a 42 64 a bc a a 76 bc 49 67 a 69 bc 73 a 74 bc 74 a 65 67 a 70 bc 72 a 76 c 75 a 80 --- 67 b 73 a 74 bc 73 a 100 --- 61 a a c 72 a 120 --- --- 123 --- 71 67 b 70 72 72 77 73 a 73 bc --- --- --- 76 bc Tabla 3. Modelo matemático de disipación de plaguicida y coeficiente de correlación (R2) en Satsuma Owari (MOW), Nova (MNO), Ortanique (MOR), Valencia Midknight (NVA) y Salustiana (NSA). * Letras distintas en una misma columna indican diferencias significativas Cinética de degradación y persistencia de clorpirifós en mandarinas y naranjas del Noreste argentino (NEA) Diciembre 2012, Argentina 285 0,90 0,80 Residuos de clorpirifós (mg/kg) 0,70 MOW 0,60 PC 0,50 LMR (excepto UE de 2mg/kg) 0,40 MNO 0,30 0,20 MOR 0,10 0,00 0 20 40 60 80 100 120 Días después de la pulverización Figura 1. Curvas de degradación de clorpirifós en mandarina Satsuma Owari (MOW), Nova (MNO) y Ortanique (MOR). 0,90 Ressiduos de clorpirifós (mg/kg) 0,80 0,70 NVA 0,60 PC 0,50 0,40 LMR 0,30 NSA 0,20 0,10 0,00 0 20 40 60 80 100 Días después de la pulverización Figura 2. Curvas de degradación de clorpirifós en naranja Valencia Midknight (NVA) y Salustiana (NSA). KULCZYCKI, C.1; NAVARRO, R.2; TURAGLIO E.2; BECERRA, V.2; SOSA, A.1. 120 286 ARTÍCULOS RIA/ Vol. 38/ N.º 3 2 Variedad Ecuación R MOW y = -0,0657Ln(x) + 0,2717 0,9966 MNO y = -0,1203Ln(x) + 0,5962 0,9942 MOR y = -0,1016Ln(x) + 0,4782 0,9818 NVA y = -0,0788Ln(x) + 0,367 0,9912 NSA y = -0,1162Ln(x) + 0,5404 0,9865 Tabla 4. Resultados del diámetro ecuatorial en Satsuma Owari (MOW), Nova (MNO), Ortanique (MOR), Valencia Midknight (NVA) y Salustiana (NSA). Los valores de residuos en el PC estuvieron por debajo del LMR establecido por la normativa nacional, UE y Federación de Rusia. En MNO 0,23 mg/kg, NSA y MOR 0,20 mg/kg, NVA 0,14 mg/kg y MOW 0,07 mg/kg. Sin embargo, esta información debe tenerse en cuenta cuando los clientes exigen niveles de residuos no superiores al 50% del LMR fijado por la autoridad sanitaria. Hacia el final del ensayo, los residuos de clorpirifós continuaron presentes, si bien con niveles muy bajos entre 0,01-0,03 mg/kg, indicaron una gran persistencia en la fruta en las cinco variedades. Este comportamiento fue bien explicado por Coscollá 60 300 55 50 250 40 200 35 30 150 25 20 100 Precipitaciones Irradiancia (W/m2) Temperatura (ºC) Precipitaciones (mm) 45 Temperatura media diaria 15 10 50 Radiación solar media 5 0 1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66 71 76 81 86 91 96 101 106 111 116 121 0 Días después de la pulverización 120 115 110 105 100 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 300 250 Precipitaciones 200 150 100 50 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 Irradiancia (W/m2) Temperatura (ºC) Precipitaciones (mm) Figura 3. Datos climatológicos del ensayo en naranja Salustiana (NSA) y mandarina Nova (MNO). Precipitaciones (mm), temperatura (ºC) y radiación solar media (W/m2). Temperatura media diaria Radiación solar media diaria 0 Días después de la pulverización Figura 4. Datos climatológicos del ensayo en mandarina Satsuma Owari (MOW). Precipitaciones (mm), temperatura (ºC) y radiación solar media (W/m2). Cinética de degradación y persistencia de clorpirifós en mandarinas y naranjas del Noreste argentino (NEA) Diciembre 2012, Argentina 287 40 400 36 360 32 320 28 280 24 240 20 200 16 160 12 120 8 80 4 40 0 1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66 71 76 81 86 91 96 101 106 111 116 121 Irradiancia (W/m2) Temperatura (ºC) Precipitaciones (mm) Precipitaciones Temperatura media diaria Radiación solar media 0 Días después de la pulverización Figura 5. Datos climatológicos del ensayo en naranja Valencia Midknight (NVA) y mandarina Ortanique (MOR). Precipitaciones (mm), temperatura (ºC) y radiación solar media (W/m2). (1993), al señalar que “los plaguicidas lipofílicos penetran en la corteza de las frutas cítricas y quedan retenidos provocando una mayor persistencia”. En cuanto a los datos climáticos (figuras 3, 4 y 5), la lluvia fue escasa en los primeros días y se presentó entre los 4-12 días de iniciados los ensayos. La comparación estadística del diámetro ecuatorial indicó que no hubo crecimiento a través del tiempo (tabla 4). Por lo tanto, se descarta la disipación por crecimiento de la fruta. El ratio varió en el tiempo con valores crecientes. Las frutas reúnen las exigencias de calidad exigidas legalmente para su comercialización (SENASA, 2001). CONCLUSIONES Al cumplirse el PC estipulado por SENASA, los niveles de residuos de clorpirifós en naranjas y mandarinas, cumplieron con las legislaciones de la Argentina, UE y Federación de Rusia. Al finalizar los ensayos, se detectaron residuos de clorpirifós que indicaron una gran persistencia, aunque con valores ínfimos. BIBLIOGRAFÍA AOAC, 1995. 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El objetivo de este trabajo fue determinar el requerimiento de frío y de calor en cinco cultivares de duraznero mediante un método de correlación, con datos de fecha de plena floración y temperatura del aire de siete años, en el este de Mendoza. El requerimiento de frío varió entre 914 y 1262 unidades de frío, mientras que el de calor fluctuó entre 2177 y 6490 horas grado de crecimiento. Excepto en cv. “Prima”, la variabilidad entre años del requerimiento de frío (coeficiente de variación, CV: 18,3 a 18,9%) fue mayor que la correspondiente al requerimiento de calor, (CV: 6,9 a 13,9%). Los requerimientos de calor disminuyeron en años de mayor acumulación de frío e indicaron una compensación. El modelo utilizado, permite disponer de información más precisa sobre los requerimientos térmicos de los cultivares, y así poder realizar una zonificación que racionalice el cultivo y maximice su aprovechamiento, en las áreas agroclimáticamente adecuadas. Palabras clave: dormancia, fenología, heladas, quiescencia, temperatura. ABSTRACT Deciduous fruit trees have a rest period between vegetative cycles. For winter dormancy release, buds need to accumulate chill (endodormancy) and then heat (ecodormancy). The aim of this study was to determine chilling and heat requirements of five peach cultivars by means of a correlation model, with full bloom and temperature data collected during seven years, in eastern Mendoza. Chilling requirement ranged from 914 to 1262 chill units, whereas heat requirement fluctuated between 2177 and 6490 growing degree hours. Except in cv. “Prima”, chill requirement variability between years (CV: 18.3 to 18.9%) was greater than that of heat requirement (CV: 6.9 to 13.9%). Heat requirement diminished in years of high chilling accumulation. The model proposed in this study provides more accurate information about thermal requirements of cultivars in order to rationalize crop distribution in the environment. Keywords: dormancy, phenology, freeze, quiescence, temperature. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Estación Experimental Agropecuaria Junín, Mendoza Isidoro Busquets s/n (5572). La Colonia, Junín, Mendoza Correo electrónico: [email protected] 1 Recibido 07 de julio de 2012// Aceptado 05 de septiembre de 2012// Publicado online 06 de noviembre de 2012 CHAAR, J1.; ASTORGA, D¹. 290 ARTÍCULOS INTRODUCCIÓN Las plantas perennes se distinguen de otras en su capacidad de suspender y retomar el crecimiento recurrentemente en respuesta a condiciones ambientales, a menudo estacionales. La posibilidad de formar yemas y experimentar ciclos de crecimiento y dormancia ha sido una adaptación evolutiva de suma importancia (Rohde y Bhalerao, 2007). Dentro de las plantas perennes, los árboles frutales de hoja no persistente poseen un período de reposo que coincide en nuestras latitudes, en la provincia de Mendoza, con parte del otoño, el invierno y comienzos de la primavera, según la especie y cultivar. Para salir de dicho reposo, las yemas (florales y vegetativas) deben primero estar expuestas a temperaturas bajas, en el período considerado de acumulación de frío, y luego a temperaturas moderadas, en el período de acumulación de calor. Estas dos etapas diferenciadas, son conocidas como endodormancia y ecodormancia, respectivamente (Lang et al., 1987). La endodormancia, es liberada mediante la exposición a bajas temperaturas a largo plazo. La acumulación de frío restablece la capacidad de crecer pero no promueve el crecimiento (Rohde y Bhalerao, 2007). Posteriormente, un vez que la yema acumuló la cantidad de calor necesaria (propia del cultivar), se desencadenan los procesos de floración o de brotación vegetativa, según el tipo de yema. La disponibilidad de agua y nutrientes también regulan la salida de la ecodormancia (Lang et al., 1987). Para florecer, es necesario que la yema cubra los requerimientos cuantitativos en cada una de las dos etapas. Mientras que en zonas geográficas con climas de invierno poco riguroso ciertos cultivares pueden no cubrir su requerimiento de frío, el requerimiento de calor generalmente se satisface, variando la fecha de floración en función de la velocidad de acumulación. Por ello, los cultivares más plásticos, en cuanto a posibilidad de lograr cosechas aceptables en zonas geográficas diversas, son aquellos que poseen bajo requerimiento de frío y elevado requerimiento de calor. Mientras que el bajo requerimiento de frío les permite poder satisfacerlo aún en zonas con inviernos poco fríos, el elevado requerimiento de calor se manifiesta en la floración tardía, lo cual posibilita evadir heladas tardías. Existen diversos métodos para estimar las necesidades térmicas para la salida del reposo invernal en especies caducifolias, con antecedentes tanto a campo (Anderson et al., 1986; Alonso et al., 2005), como en laboratorio (Citadin et al., 2001; Naor et al., 2003; Gariglio et al., 2006; Alburquerque et al., 2008; Aslamarz et al., 2009; Rahemi y Pakkish, 2009; Harrington et al., 2010). Debido a la falta de conocimiento de los mecanismos bioquímicos y fisiológicos que controlan el requerimiento de frío, casi todos los modelos han sido desarrollados empírica o estadísticamente para ajustar las respuestas (principalmente las fechas de floración) de especies arbóreas a condiciones climáticas locales (Fan et al., 2010). En cada cultivar, la determinación de la fecha de comienzo de la ecodormancia, y mediante ésta la estimación de los requerimientos de frío y de calor, puede realizarse a través de RIA/ Vol. 38/ N.º 3 la relación entre la temperatura media promedio de cierto período (dentro del período de reposo) y la fecha de plena floración, considerando una serie de años. Si bien no hay un límite abrupto entre los períodos de acumulación de frío y de acumulación de calor, puede considerarse que el comienzo de la ecodormancia ocurre cuando las bajas temperaturas retrasan la fecha de floración (Alonso et al., 2005). Excepto para cerezo (Prunus avium L.), (Tersoglio y Naranjo, 2009; Naranjo y Tersoglio, 2010) no existe a nivel local información sobre las necesidades térmicas otoño-invernales de los frutales cultivados, entre ellos el duraznero. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue determinar el requerimiento de frío y de calor en durazneros conserveros mediante un método de correlación, en el este de Mendoza. MATERIALES Y MÉTODOS Sitio y material experimental El estudio se llevó a cabo en la Estación Experimental Agropecuaria Junín INTA, ubicada en La Colonia, Junín, Mendoza (33° 6’ 57,5” Sur; 68° 29’ 4” Oeste; 653 msnm), en una colección de cultivares de duraznero para conserva, durante el período 1998-2007 (excepto los años 2001 y 2005). Los cultivares evaluados fueron: “Dee-Six”, “Maria Serena”, “Ouro”, “Prima” y “Ross”. El marco de plantación era de 5 m x 5 m, siendo el portainjerto “Nemaguard” (Prunus persica L. Batsch.) y las plantas conducidas en vaso. Determinación de la fecha de plena floración (PF) En cada uno de los años de estudio, para cada cultivar se promedió información de cuatro plantas, determinándose la fecha de plena floración mediante la estimación visual a nivel de planta entera del 50% de flores abiertas, en el estadio F según Baggiolini (1952). Registro de temperatura del aire Para cada uno de los años de estudio, los datos de temperatura horaria de abril a septiembre se obtuvieron a partir de una estación meteorológica ubicada a 300 m de la parcela experimental, perteneciente a la Dirección de Agricultura y Contingencias Climáticas del Gobierno de Mendoza. Estimación de la fecha de transición entre endodormancia y ecodormancia Se utilizó el método propuesto por Alonso et al. (2005), con los datos de la fecha de plena floración y de la temperatura media del aire de los años 1998, 1999, 2000, 2002, 2003, 2004 y 2006. El fundamento del método se basa en el efecto diferente de las temperaturas frías y templadas sobre la fecha de plena floración, según su incidencia sea durante la endodormancia o la ecodormancia. Se considera iniciada la ecodormancia cuando el coeficiente de correlación de Pearson entre la fecha de plena floración y el Determinación del requerimiento de frío y de calor en duraznero (Prunus persica L. Batsch.) mediante un modelo de correlación Diciembre 2012, Argentina 291 promedio de temperaturas medias del período considerado (5, 10, 15, 20, 25 o 30 días) es significativo, luego de una serie continua de coeficientes negativos. Los coeficientes de correlación menores de -0,754 son significativos (α = 0,05), debido a que las correlaciones se han obtenido de un conjunto de datos de siete años (Hoshmand, 1988). Cálculo de los requerimientos de frío y de calor A partir de las temperaturas horarias se calcularon las unidades de frío (UF) y las horas grado de crecimiento (GDH ºC), mediante el modelo de Richardson et al. (1974). El primer día de acumulación de frío se consideró el día siguiente a la última acumulación diaria negativa de UF (la fecha media de inicio de la endodormancia fue el 6 de mayo), mientras que el último día de acumulación fue el estimado por el modelo de correlación. El promedio de las UF de los siete años se consideró como la necesidad de frío de cada cultivar. Las GDH ºC se calcularon desde la fecha de transición entre endo-ecodormancia y la fecha de plena floración, promediando los valores de siete años para determinar los requerimientos de calor de cada cultivar. Una GDH ºC, se define como una hora a una temperatura 1 ºC por arriba de la temperatura base de 4,5 ºC. Las temperaturas por encima de 25 ºC se asumen iguales a 25 ºC, y es la mayor acumulación posible por cada hora de 20,5 GDH ºC (Alonso et al., 2005). Validación del modelo Se utilizaron datos correspondientes al año 2007, los cuales no se incluyeron para la elaboración del modelo. Análisis estadístico El análisis estadístico de los datos se realizó con el programa InfoStat/Profesional (Universidad Nacional de Córdoba, 2006), mediante las herramientas de análisis de correlación de Pearson y análisis de regresión lineal. RESULTADOS Y DISCUSIÓN La distribución de los coeficientes de correlación de Pearson entre la fecha de plena floración y el promedio de temperaturas medias varió según la longitud del período considerado. En la figura 1, se observa dicha variación para el cultivar “Maria Serena”. Para la estimación de los requerimientos térmicos se utilizó el período de 20 días, donde todos los cultivares evaluados presentaron coeficientes de correlación negativos significativos. Mediante la observación de los coeficientes de correlación entre la temperatura media promedio y la fecha de plena floración, se pudo determinar el momento de transición entre endodormancia y ecodormancia (figura 2). En los cultivares evaluados se observó un mismo patrón de variación del coeficiente de correlación. En la etapa “I”, las yemas se encontraron en paradormancia y la inhibición del creci- miento se originó a partir de una señal bioquímica proveniente de otra parte de la planta (Lang et al., 1987). El coeficiente de correlación positivo significa que cuanto menor es la temperatura, antes ocurre la floración en la siguiente primavera, debido al adelantamiento de la caída natural de hojas y consecuentemente la salida de la paradormancia (entrada prematura a la endodormancia). La etapa “II”, coincidió temporalmente con la caída natural de hojas, evento que representa la transición entre para y endodormancia (Cesaraccio et al., 2004). En la etapa “III”, los coeficientes de correlación positivos indicaron un atraso de la siguiente floración cuando las temperaturas fueron elevadas y señalaron que las yemas se encontraban en endodormancia. La etapa “IV”, es transicional, mientras que en “V” ocurría la ecodormancia, donde temperaturas elevadas promueven el proceso de apertura floral, en la etapa“VI” (figura 2a). Si bien en el cv. “Prima” el coeficiente de correlación negativo fue significativo recién el 26 de agosto (un mes después que los demás cultivares evaluados), a fines de julio presentó un pico de correlación negativa, de manera similar a los otros materiales (figura 2d). Por lo tanto, la fecha de transición entre la endodormancia y la ecodormancia fue similar en los cinco cultivares, ocurrido en el último tercio del mes de julio. En la figura 3, se puede observar el significado del coeficiente de correlación negativo y significativo entre la temperatura media del período considerado y la fecha de plena floración para el cv. “Ross”. A medida que aumenta la temperatura media del período, se adelanta la floración, lo que indica que la yema ya superó la etapa de acumulación de frío y se encuentra en la ecodormancia. Sin embargo, y de manera similar a lo encontrado por Alonso et al. (2005), la correlación entre las variables evaluadas vuelve a fluctuar luego del inicio de la ecodormancia (etapa “V”, figura 2a). La disminución en la magnitud del coeficiente de correlación puede deberse a que el efecto de adelantamiento de la floración, provocado por temperaturas elevadas a la salida del invierno, es proporcionalmente menor que el de temperaturas moderadas. En efecto, según Richardson et al. (1974), las temperaturas superiores a 25 ºC sólo acumulan 20,5 GDH ºC, estando a 25 ºC la óptima acumulación (mayor cociente GDH ºC / ºC). Luego, el coeficiente de correlación comienza a ser positivo (aunque no significativo) y, posiblemente, durante este período de fluctuación ocurran otros procesos no contemplados por los autores, en donde la relación entre el momento de floración y los períodos de temperatura media esté influida por otros factores ambientales o intrínsecos de la planta. Al respecto, Cesaraccio et al. (2004), mencionan que ninguno de los modelos estudiados para Populus tremula L. y Salix chrysocoma Dode predijeron bien la ruptura de las yemas, por lo cual es probable que algún otro factor distinto a la temperatura esté involucrado en la salida de la dormancia. Excepto en cv. “Prima”, la variabilidad entre años del requerimiento de frío (coeficiente de variación, CV: 18,3 a 18,9%) fue mayor que la correspondiente al requerimiento de calor (CV: 6,9 a 13,9%). Según Fan et al. (2010), los requerimientos de frío y de calor de un determinado cultivar CHAAR, J1.; ASTORGA, D¹. 292 ARTÍCULOS RIA/ Vol. 38/ N.º 3 Figura 1. Distribución de los coeficientes de correlación de Pearson entre la fecha de plena floración y el promedio de temperaturas medias, según la amplitud del período considerado. Duraznero cv. “Maria Serena”. La línea discontinua corresponde al mínimo valor significativo (r = -0,754). Determinación del requerimiento de frío y de calor en duraznero (Prunus persica L. Batsch.) mediante un modelo de correlación Diciembre 2012, Argentina 293 Figura 2. Distribución de los coeficientes de correlación de Pearson entre la fecha de plena floración y el promedio de temperaturas medias de 20 días. a) cv. “Maria Serena”; b) cv. “Dee-Six”; c) cv. “Ouro”; d) cv. “Prima”; e) cv. “Ross”. La línea discontinua corresponde al mínimo valor significativo (r = -0,754). CHAAR, J1.; ASTORGA, D¹. 294 ARTÍCULOS RIA/ Vol. 38/ N.º 3 Figura 3. Relación entre la temperatura media promedio de 20 días desde el inicio de la ecodormancia y la fecha de plena floración, en duraznero cv. “Ross”. Requerimiento de frío (UF) Días desde el inicio de la acumulación de frío Fecha media de transición endo-ecodormancia Coeficiente de correlación Requerimiento de calor (GDH) Dee Six Maria Serena Ouro Prima Ross 926 946 926 1262 914 76 78 76 111 75 22-7 24-7 22-7 26-8 21-7 -0,767 -0,756 -0,780 -0,757 -0,796 5284 6490 6206 2177 5294 Días desde la salida de la endodormancia 43 48 48 12 43 Fecha media de plena floración 3-9 10-9 8-9 7-9 2-9 Tabla 1. Fecha media de transición entre endo y ecodormancia, requerimiento de frío y de calor, y fecha media de plena floración de los cultivares de duraznero evaluados, según el modelo de correlación (Alonso et al., 2005). no son constantes, sino que dependen de la interacción genotipo x ambiente y varían con la evolución de las temperaturas de cada año y de cada lugar. Factores como luz, temperatura y nutrición pueden alterar los requerimientos de frío y calor entre años (Rahemi y Pakkish, 2009). Sin embargo, al promediar una serie de años es posible diferenciar cultivares en base a sus requerimientos térmicos medios. El requerimiento de frío medio en cuatro de los cultivares de duraznero evaluados varió entre 914 y 946 UF (tabla 1). El requerimiento de frío determina, en gran medi- da, los límites climáticos para el adecuado desempeño del cultivo. Además de la variación geográfica en cuanto a la oferta de frío otoño-invernal, la acumulación de frío podría verse afectada a futuro debido al aumento de las temperaturas mínimas (Cesaraccio et al., 2004; Altieri y Nicholls, 2009; Minetti, 2010). Alonso et al. (2005), mencionan requerimientos de 358 a 481 UF en almendro, cumpliéndose la endodormancia en apenas 32 a 40 días, según el cultivar. Por el contrario, la necesidad de calor en almendro fue muy superior a los valores observados en duranzero (tabla Determinación del requerimiento de frío y de calor en duraznero (Prunus persica L. Batsch.) mediante un modelo de correlación Diciembre 2012, Argentina 295 Figura 4. Evolución de la acumulación de Unidades de Frío (según Richardson et al., 1974) en los años estudiados. Junín, Mendoza. Figura 5. Relación entre el calor (GDH ºC) y el frío (UF) acumulados en los años estudiados, según cultivar de duraznero. 1) variando entre 5345 y 9352 GDH ºC. Alburquerque et al. (2008), encontraron en cerezo requerimientos térmicos de 397 a 1001,5 UF y de 7326 a 9450 GDH ºC. Rahemi y Pakkish (2009), observaron requerimientos de calor en pistacho (Pistacia vera L.) de 8852 a 15420 GDH ºC. La variabilidad del requerimiento de calor fue mayor que la de la necesidad de frío (CV: 34% y 15%, respectivamente), al comparar entre los distintos cultivares estudiados. A pesar de la similar fecha de transición de endo a ecodormancia entre los cultivares evaluados, la mayor variabili- CHAAR, J1.; ASTORGA, D¹. 296 ARTÍCULOS RIA/ Vol. 38/ N.º 3 Figura 6. Requerimiento de frío, requerimiento de calor y fecha de plena floración de los cultivares de duraznero evaluados. dad en el requerimiento de calor determina diferencias en la fecha de plena floración. Esta información es importante cuando se requiere utilizar cultivares de floración más tardía, para evitar o disminuir el daño causado por heladas primaverales. Similares resultados fueron observados por Alonso et al. (2005). Al validar el modelo con los datos climáticos y de fecha de plena floración correspondientes al año 2007 (observaciones a campo, datos no incluidos en la elaboración del modelo), se encontró un estrecho ajuste (y = 2,1983 x – 49316; R2= 0,95). Sin embargo, la fecha de plena floración estimada mediante el modelo fue entre 6 y 14 días más Determinación del requerimiento de frío y de calor en duraznero (Prunus persica L. Batsch.) mediante un modelo de correlación Diciembre 2012, Argentina 297 atrasada que la observada a campo, según el cultivar. Por lo tanto, el modelo debería modificarse en lo que respecta al criterio del comienzo de acumulación de frío. En la figura 4, se observa que el comienzo de acumulación de frío al utilizar el modelo de Richardson et al. (1974) es ampliamente variable entre años. En años en que hay acumulaciones negativas de frío ya entrado el otoño (4 de mayo de 2007; -2,5 UF), el modelo de correlación atrasa la fecha de plena floración estimada con respecto a lo observado a campo. Posiblemente, las plantas entren en la endodormancia previamente a la última acumulación negativa de UF, por lo que no es suficiente un pequeño período de temperaturas cálidas para anular el frío acumulado. Según el modelo dinámico (Fishman et al., 1987), que asume una base bioquímica de la ruptura de la endodormancia, un primer paso produce un intermediario reversible de la sustancia para la salida de la endodormancia, y el segundo paso fija el intermediario mediante una transición irreversible, por lo cual el frío acumulado previo a un período cálido puede ser efectivo. Otro criterio para establecer el inicio del reposo invernal es mencionado por Cesaraccio et al. (2004), mediante un modelo cuyo comienzo de acumulación de frío coincide con determinada etapa fenológica, como la caída natural de hojas en otoño. En la figura 5, se observa que el cv. “Prima” posee una relación entre el calor y el frío acumulados distinta al resto de los materiales (según los datos obtenidos mediante el modelo de correlación), por lo cual no se incluyó en el siguiente análisis. A pesar de la débil relación entre las UF y las GDH ºC acumuladas (R2=0,36), se observó una tendencia a disminuir los requerimientos de calor en años de mayor acumulación de frío. Similares resultados, fueron encontrados por Couvillon y Erez (1985). De manera similar a lo mencionado para almendro (Alonso et al., 2005), la fecha de plena floración en duraznero dependió principalmente del requerimiento de GDH ºC. En la figura 6, se observa cómo la fecha de plena floración se atrasa al aumentar el requerimiento de calor en duraznero (excepto en el cv. “Dee-Six”), mientras que el bajo requerimiento de frío se relaciona con una floración temprana sólo cuando el requerimiento de calor también es bajo. Por lo tanto, cuando hubo una menor acumulación de frío y el requerimiento de calor fue mayor, se retrasó la fecha de plena floración. La menor duración de la endodormancia (debida al retraso en la salida de la paradormancia) podría ser beneficiosa para disminuir el riesgo de daño por heladas tardías. A partir de la variabilidad interanual encontrada en los requerimientos de frío y de calor de un mismo cultivar en un mismo sitio, se manifiesta la importancia de evaluar los materiales vegetales con respecto a la relación entre sus requerimientos térmicos (ya que no son constantes), o bien promediar los valores obtenidos de una serie extensa de años. CONCLUSIONES El modelo utilizado posibilita disponer de información más precisa sobre los requerimientos térmicos de los cul- tivares, y así poder realizar una zonificación que racionalice el cultivo y maximice su aprovechamiento en las áreas agroclimáticamente adecuadas. Adicionalmente, la determinación de la variación interanual en los requerimientos de frío y de calor y su relación con las condiciones de temperatura media del aire, permitirían diseñar prácticas de manejo tendientes a retrasar la floración y, consecuentemente, a disminuir el riesgo de daño por heladas tardías. AGRADECIMIENTOS A la Dirección de Agricultura y Contingencias Climáticas del Gobierno de Mendoza, por el suministro de los datos climáticos. BIBLIOGRAFÍA ALBURQUERQUE N.; GARCÍA-MONTIEL F.; CARRILLO A.; BURGOS L. 2008. Chilling and heat requirement of sweet cherry cultivars and the relationship between altitude and the probability of satisfying the chill requirements. Environ. Exp. Bot. 64, 162-170. ALONSO J. M.; ANSÓN J. M.; ESPIAU M. T.; SOCIAS I COMPANY R. 2005. 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