Prueba Rápida - OnSite TB IgG/IgM Combo en Cassette (Suero

Prueba Rápida - OnSite TB IgG/IgM Combo en Cassette (Suero

Prueba Rápida
- OnSite TB IgG/IgM Combo en Cassette (Suero / Plasma/Sangre Entera)
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Para uso de Diagnostico y In Vitro
1.
2.
3.
4.
5.
Número de Catálogo R0060C
6.
7.
8.
Diagnostico In Vitro
9.
INTENCION DE USO
10.
11.
12.
La prueba rápida en sitio de TB IgG/IgM Combo OnSite de , es un inmunensayo cromatográfico para la
detección y diferenciación de Tuberculosis anti-mycobacterium IgM (M.TB) e IgG anti- M.TB en suero
humano, plasma o sangre entera. Tiene el propósito de ayudar en el diagnóstico de la infección M. TB.
13.
Cualquier espécimen reactivo con la prueba TB IgG/IgM Combo deberá ser confirmada con un método
alternativo y averiguación clínica.
PREPARACION DE LOS REACTIVOS E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO
RESUMEN Y EXPLICACION DE LA PRUEBA
Tuberculosis es una enfermedad crónica y comunicable causada principalmente por M. TB hominis
(bacilius de Koch), ocasinalmente por M. TB bovis. Los pulmones son la principal víctima, pero cualquier
organo puede ser infectado.
El riesgo de la infección TB se ha disminuido exponencialmente en el siglo 20. Sin embargo, la
emergencia reciente de brotes resistentes a los medicamentos, particularmente entre pacientes con
SIDA, ha devuelto el interés en el TB. La incidencia de infección ha reportado alrededor de 8 millones de
casos anuales con una tasa de muerte de 3 millones al año. La mortalidad excedió al 50% en algunos
países africanos con altos índices de VIH.
La sospecha inicial clínica y averiguaciones radiográficas, con su subsecuente confirmación de
laboratorio por examinación y cultivo son los métodos tradicionales para diagnóstico de TB activo. Sin
embargo, estos métodos ya sea que carezcan de sensibilidad o consumen mucho tiempo, en
particularmente pacientes que no son lo suficientemente capaces para producir la muestra, o pueden
tenera TB extra-pulmonar.
La prueba OnSite TB IgG/IgM Combo fue desarrollar para superar estos obstáculos. La prueba detecta
anti-M TB IgM e IgG en suero, plasma o sangre entera en 15 munutos. Un resultado IgM positivo indica
una infección M TB reciente, mientras que un resultado IgG positivo suguiere una infección previa o
crónica. Utilizando antígenos específicos M TB, también detecta IgM anti-M TB en pacientes vacunados
con BCG. Además, la prueba puede desarrollarse por personal que no haya tenido que pasar por mucha
capacitación y sin contar con equipo sofisticado de laboratorio.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
La Prueba rápida en sitio IgG/IgM de TV es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral. Esta
prueba de cassette consiste de: 1) una almohadilla con conjugado de colorante tinto que contiene
antigenos recombinantes conjugados con oro coloidal (conjugados de M.TB) y conjugados de conejo
IgG-oro, 2) una tira de membrana nitrocelulosa que contiene las 2 bandas de prueba (banda T1 y T2) y
una banda de control (banda C). La banda T1 esta previamente rociada con anticuerpo para la
detección del virus anti-TB IgM, y la banda C esta previamente rociada con cabra anti-conejo igG.
Este inserto deberá ser leído por completo antes de desempeñar el examen. No leer
las instrucciones puede llevar a tomar resultados imprecisos.
No abra el sobre laminado, hasta estar listo para llevar a cabo la prueba.
No utilice dispositivos caducos.
Introduzca todos los reactivos a temperatura de interior (15º - 30ºC) antes de usar.
No utilice componentes de cualquier otra prueba como substituto a los componentes
de este kit.
No utilice sangre hemolizada.
Utilice ropa protectiva y guantes deshechables mientras utilice los reactivos del kit y
los especímenes clínicos. Lavese las manos con cuidado después de desempeñar la
prueba.
Usuarios de esta prueba deberán seguir las precauciones universales US CDC para
la prevención de transmisión de HIV, HBV y otros patógenos.
No fume, beba, o coma en áreas en las que los especímenes están siendo
manejados.
Deseche todos los especimenes y materiales como desechos biológicos.
Maneje los controles de la misma forma que los especímenes de pacientes.
Los resultados del examen deberán leerse dentro de 10 minutos después de que el
espécimen es aplicado a la ranura de muestra o a la almohadilla del dispositivo. Leer
después de 10 minutos puede dar resultados erróneos.
No realice la prueba en un cuarto con mucho flujo de aire, por ejemplo, con
ventiladores eléctricos o un fuerte aire acondicionado
Todos los reactivos están listos para utilizar como fueron provistos. Almacene los dispositivos sin utilizar
a temperaturas de 2º - 30º C. Los controles positivos y negativos deben guardarse a 2ºC - 8ºC,
asegúrese que el dispositivo de prueba se encuentra en temperatura de interior antes de abrir. El
dispositivo de prueba es estable hasta la fecha de expiración impresa en el sobre laminado. No congele
el kit ni lo exponga a temperaturas mayores a 30ºC.
COLECCIÓN DEL ESPECÍMEN Y MANEJO
Considere cualquier material de origen humano como infeccioso y manéjelo utilizando
procedimientos de bio-seguridad estándar.
1
Plasma
2
3
1
Coleccione el espécimen de sangre en un tubo de colección de tapa lila, azul o
verde (conteniendo EDTA, citrato o heparina, respectivamente en Vacutainer®) por
punción.
Separe el plasma por centrífuga.
Cuidadosamente retire el suero en un nuevo tubo previamente etiquetado.
Suero
Coleccione el espécimen de sangre en un tubo de colección de tapa roja (conteniendo
ningún anticoagulante en Vacutainer®) por punción.
2
Permita que la sangre se coagule.
3
Separe el suero mediante centrífuga.
4
Cuidadosamente retire el suero en un tubo nuevo previamente etiquetado.
Los especímenes de prueba tan pronto y sea posible después de colectarse. En caso de no hacer la
prueba inmediatamente, almacene los especímenes entre 2° y 8°C.
Almacene los especímenes entre 2° y 8°C por hasta 5 días. Los especimenes deberán congelarse a
-20°C para un mayor almacenaje.
Evite ciclos múltiples de congelamiento-descongelamiento. Antes de realizar la prueba, lleve los
especímenes a temperatura de interior lentamente y mezcle gentilmente. Los especimenes que
contengan materia de partículas visibles deberán ser aclarados por centrífuga antes de realizar la
prueba. No utilice muestras que contengan lipemia gruesa, hemólisis gruesa o turbiedad con el
propósito de evitar interferencia en la interpretación de resultados.
Sangre
Gotas de sangre o sangre entera puede obtenerse por punción capilar o venopunción. No utilize sangre
hemolizada para prueba. Las muestras de sangre entera deberán ser almacenadas en refrigeración (2° 8°C) si no se utilizan de inmediato. Los especímenes deberán de analizarse dentro de 24 horas
posteriores a la toma.
PROCEDIMIENTO DE ENSAYO
Paso 1:
Lleve el espécimen y los componentes de prueba a temperatura de interior si se
Paso 2:
descongelado antes de llevar a cabo el ensayo.
Estando listo para llevar la prueba, abra el sobre y retire el dispositivo. Coloque la
cassette de prueba, el espécimen migra por acción capilar a lo largo del cassette. Si el virus igM
Paso 3:
prueba en una superficie limpia y plana.
Asegúrese de etiquetar el dispositivo con el número de identificación del
anti-M-TB esta presente en el espécimen va a empatar a los conjugados M-TB. El inmuno-complejo es
entonces capturado por el reactivo rociado en la banda T1, formando una banda T1 color vino tino,
Paso 4:
encuentran refrigerados o congelados. Mezcle el espécimen bien una vez
Cuando un volumen adecuado de espécimen de prueba se dispensa en la ranura de muestra del
espécimen.
indicando un resultado positivo.
(Sangre Entera) Aplique una gota de Sangre (40-50µL) en la ranura de muestra.
Luego agregue 1 gota de diluyente de muestra inmediatamente.
El virus anti-M-TB IgG, si se presenta en espécimen, va a empatar a los conjugados de M TB. El
inmuno-complejo es entonces capturado por el reactivo previamente rociado en la banda T2, formando
una banda T2 color vino tinto, indicando un resultado de prueba positivo al virus IgG.
La ausencia de ambas bandas T (T1 y T2) sugiere un resultado negativo. La prueba contiene un control
interno (banda C) el cual debe exhibir una banda color vino tinto del inmuno-complejo de cabra anti
ratón IgG/conejo IgG-oro conjgado independientemente del desarrollo de las líneas T. De lo contrario, el
Ó
resultado de prueba es inválido el espécimen debe ser examinado con otra prueba.
REACTIVOS Y MATERIALES PROVISTOS
1.
Cada kit incluye 30 dispositivos de prueba, cada uno sellado en un sobre laminado y con tres
1 gota de sangre entera 1 gota de diluyente artículos en su interior:
a. Un dispositivo de prueba
b. Una pipeta o gotero
c. un desecante
2.
3.
(suero/plasma) Llene el gotero plástico con el espécimen. Mantenga el gotero verticalmente y
dispense 1 gotas (alrededor de 35 – 45 µl) de espécimen en la ranura demuestra, asegurando que no
hay burbujas de aire.
Después añada
Un diligente (1 vial, 5 mL)
Un Inserto (Instrucciones de Uso)
(alrededor de
35 – 50 µl) de diluyente inmediatamente.
Resultado MATERIALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS
1
2
1.
Control Positivo (1 vial, tapa roja, 1 mL, Cat # R0053-P)
Control Negativo (1 vial, tapa verde, 1 mL, Cat # R0053-N)
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS
Reloj o cronómetro
1 gota de espécimen 1 gota de diluyente 15 minutos Paso 5:
Inicie el Cronómetro
Paso 6:
Los resultados pueden leerse en 10 minutos. Resultados positivos pueden ser
visibles tan pronto como en un minuto. No lea los resultados después de 15 minutos.
Para evitar confusión, deseche el dispositivo luego de interpretar el resultado.
Prueba Rápida
- OnSite TB IgG/IgM Combo en Cassette (Suero / Plasma/Sangre Entera)
CONTROL DE CALIDAD
El uso de los cassettes individuales de prueba de TB IgG/IgM se describe en el procedimiento
de ensayo, haga un control positivo y un control negativo (provistos bajo requerimiento si los
controles de calidad no están disponibles en laboratorio) bajo las siguientes circunstancias para
monitorear el desempeño del cassette.
1
Un operador usa el kit por primera vez, antes de probar con especímenes.
2
Un nuevo kit se va a utilizar.
3
Un nuevo embarque se kits de va a utilizar.
4
La temperatura utilizada durante el almacenaje esta fuera de 2 – 30 C.
5
La temperatura del cuarto de pruebas esta fuera de 15 – 30 C.
Los resultados esperados son los siguientes
Desempeño clínico al IgG
Un total de 200 muestras de sujetos sin TP y 35 muestras de pacientes bajo tratamiento anti TB fueron puestos a
prueba con el dispositivo y con un kit ELISA IgG comercial. La comparación para todos los sujetos se muestra en la
siguiente tabla:
OnSite TB IgG/IgM– Prueba Rápida
IGG ELISA Test
Positivo
Negativo
Total
Positivo
30
5
35
Negativo
7
193
200
Total
37
198
235
Sensibilidad Relativa: 88.6%, Especificidad Relativa: 96.5%, Concordancia General: 95.3%
LIMITACIONES DE LA PRUEBA
Control Negativo Solo aparece banda C, la auSencia de cualquier color tinto en tanto la línea
T1 y T2 indica que no se detectaron anticuerpos
de anti- M TB. El resultado es negativo.
1
Control Positivo La banda C y las líneas (T1 y T2)
muestran líneas coloreadas.
3
4
5
2
La aparición de cualquier color vino tinto en las líneas T1 y T2, independientemente de su
intensidad deben considerarse como la presencia de la línea.
INTERPRETACIÓN DEL RESULTADO DE PRUEBA
1
RESULTADO NEGATIVO: Si solo la línea C esta presente, la ausencia de
cualquier color tino en ambas líneas T (T1 y T2) indica que no hay detección de anticuerpos
anti-dengue. El resultado es negativo
6
7
8
9
El procedimiento de ensayo y la interpretación de los resultados del ensayo deben seguirse
de cerca al realizar pruebas de anticuerpo al virus del M TB en sangre suero o plasma de
individuos.
La prueba Onsite de TB esta limitada a la detección cualitativa del anticuerpo de dengue en
suero humano o plasma. La intensidad de la línea de prueba no tiene una correlación con la
cantidad de anticuerpo presente en el espécimen.
La prueba OnSite reconoce los anticuerpos M bovis y M. adricanum.
Un resultado positivo IgG puede ser detectado en personal vacunado con BCG.
Un resultado negativo para un individuo indica la ausencia de anticuerpo a M.TB detectable.
Sin embargo, un resultado negativo no excluye la posibilidad de exposición o la infección con
M TB.
Un resultado negativo puede ocurrir si la cantidad de anticuerpo a M.TB presente en el
espécimen esta por debajo de los límites de detección del ensayo, o los anticuerpos que se
detectan no estan presentes durante la etapa de la enfermedad en la que se colecto la
muestra.
Condiciones de Inmunodeficiencia como el HIV puede reducir la sensibilidad de la prueba. Si
se sospecha la infección, se recomienda la prueba TB Plus (R0055C) .
Algunos especímenes que contengan cantidades inusualmente altas de anticuerpos
heterofilos o factor reumatoide pueden afectar los resultados esperados.
Los resultados obtenidos en esta prueba deberán solo ser interpretados en conjunto con
otros procedimientos de diagnóstico y averiguaciones.
REFERENCIAS
2
RESULTADO POSITIVO:
2.1
Además de la presencia de la línea C, si solo la línea T1 aparece, se indica la
presencia del virus anti-TB IgG; el resultado es positivo.
2.2 Además de la presencia de la línea C, si solo la línea T2 aparece, la prueba indica la
presencia IgM anti- M.TB. El resultado es positivo.
2.3
Además de la línea C, aparece tanto las líneas T1 y T2, se indica la presencia del
IgG anti-M.TB y del IgM anti-M.TB. El resultado también es positivo.
Muestras con resultados positivos han de confirmarse con metodos alternativos y
averiguaciones clínicas antes de una determinación positiva.
3.
INVALIDO: Si no se desarrolla la línea C, el resultado es inválido
.independientemente de la presencia de cualquier línea como se indica. Repita el examen.
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PI-R0030C Rev. C Effective date: June-01-2006
Spanish Version
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CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO
Desempeño Clínico de la prueba IgM
Lea las
instrucciones.
Un total de 200 muestras de sujetos sin TP y 35 muestras de pacientes bajo tratamiento anti TB fueron puestos
a prueba con el dispositivo y con un kit IgM ELISA comercial. La comparación para todos los sujetos se
muestra en la siguiente tabla:
IGM ELISA Test
Positivo
Negativo
Total
OnSite TP IgG/IgM– Prueba Rápida
Positivo
Negativo
30
5
7
193
37
198
Total
35
200
235
Sensitividad Relativa 85.7% , Especificidad Relativa: 96.5%, Concordancia General: 94.9%