Aplicaciones - Ingenieria Genetica

Plásm idos
Moléculas de DNA doble cadena que replican independientemente
del cromosoma bacteriano que llevan información no indispensable
para la supervivencia pero si que le confiere una ventaja adaptativa
Ej: Resistencia a antibióticos, enzimas de restricción, enzimas para degradar sustratos poco comunes,
toxinas etc.
El replicar independientemente, ser pequeños y de fácil manejo
(se pueden aislar y transferir a otras bacterias facilmente) los
hacen candidatos ideales para utilizar como vectores para
transportar informción genética.
Aplicaciones
Transferir material genético
Aislar y estudiar genes
Amplificar Fragmentos de DNA
Transcripción in vitro
Expresar proteínas
Secuenciar
Generar alelos de un gen, mutaciones.
Tipos de plásmidos
 Clonado
 Expresión
Suicidas
Killer
Shuttle
Características generales
MCS
R
Ori
Plásm idos
Sitio múltiple de clonado
Plásm idos
Región donde se agrupan secuencias de reconocimiento para
enzimas de restricción. Estas secuencias no se repiten en
ningún otra lugar del vector
Origen de replicación
 Copia única
 Bajo número de copias (15-20 copias)
Intermedio número de copias (50-100 copias)
Alto número de copias (500-700 copias)
Los replicones que más se usan son los derivados de pS101, pBM1 o
colE1. pS101 pertenece a un grupo de compatibilidad diferente que
pBM1 y colE1
Plásm idos
Antibióticos
 Ampicilina, B-lactámicos. Inhibe pared celular.
Bacteriostático.
R: b-lactamasa
 Kanamicina, aminoglucósidos. Interfiere en la
síntesis proteica (interactúa con proteínas ribosomales y
con algunas bases del 30S). Bactericida
R: fosfotransferasa
Tetraciclina, Tetraciclinas. Interfiere en la síntesis
proteica (interrumpe
Bactericida.
R: antitransportadora
la
unión
codón-anticodón).
Cloranfenicol. Interfiere en la síntesis proteica
(inhibe peptidil transferasa). Bactericida.
R: acetiltransferasa
Plásm idos
Pásmidos de clonado
Segundo sistema de selección: sistema de selección de inserto
pBR322
BamHI
SpHI
SalI
Amp R= MCS
Cepa: AmpS, TetS
Tamaño: 4361 pb
ColE1, no
Relajado
Tet R
Plásm idos
Series pUC
LaqI
BamHI
EcoRI
Frag α LacZ
5-ATG AAT GGA TCC CCC GAA TTC CAG CAT TAG-3
5-CAT TTA CCT AGG GGG CTT AAG GTC GTA ATC-3
p Lac
O Lac
Cepa: AmpS, ∆M15
DH5α, Xl1Blue
Amp R
ColE1, no
Relajado/
relajado
Tamaño: 3162 pb
Plásm idos
pBlueScript SK/KS
LaqI
KpnI
SacI
Frag α LacZ
p Lac
O Lac pT7
pT3
pT7
3´
5´
3´
ColE1,
relajado
Amp R
5´
pT3
Cepa: AmpS, ∆M15
DH5α, Xl1Blue
Tamaño: 2958 pb
Plásm idos
pGEM-T
LaqI
EcoRI
EcoRI
Frag α LacZ
-T
p Lac
O Lac sP6
TT3
Cepa: AmpS, ∆M15
DH5α, Xl1Blue
Tamaño: 3015 pb
ColE1,
relajado
Amp R
Plásm idos
pZeRO
LACI
XbaI
XhoI
Frag α
LacZ/ ccdb
p Lac
O Lac pSp6
pSp6
pT7
3´
ColE1,
relajado
Kan R
3´
5´
5´
pT7
Cepa : KanS , ccdaTop10
Tamaño: 3298 pb
Plásmido de expresión
LaqI
Plásm idos
XbaI
XhoI
pT7
O Lac
RBS
ColE1,
relajado
Kan R
Tamaño: 3-5 kpb