QUANTA LiteTM dsDNA

QUANTA LiteTM Gliadin IgA II
704525
Para Uso Diagnóstico In Vitro
Complejidad de CLIA: Alto
Aplicación
QUANTA LiteTM Gliadin IgA II es un ensayo basado en la técnica ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent
Assay) para la detección semi cuantitativa de anticuerpos gliadina IgA en suero humano. La presencia de
anticuerpos anti-gliadina puede utilizarse conjuntamente con los resultados de la exploración física y otros
análisis de laboratorio para ayudar a diagnosticar la enfermedad celíaca.
Sumario y Explicación de la prueba
La enfermedad celíaca y las enteropatías sensibles al gluten son afecciones crónicas cuya principal
manifestación consiste en la inflamación y característico aplanamiento histológico de la mucosa que provoca
un síndrome de mala absorción intestinal. La etiología precisa de la enfermedad sigue siendo desconocida,
aunque está claro que la gliadina, o la fracción soluble en alcohol del gluten de trigo, es el agente tóxico.1
Inicialmente, se utilizaba una serie de múltiples biopsias intestinales para diagnosticar los trastornos
celíacos y de tipos similares. Hoy en día, se han propuesto los tests serológicos para el muestreo de
pacientes con evidencias de enteropatías sensibles al gluten, así como para controlar la adecuación de la
dieta.2-5 La Sociedad Europea de Pediatría Gastroenterológica y Nutrición (European Society of Pediatric
Gastroenterology and Nutrition; ESPGAN) ha recomendado el uso de marcadores serológicos como la
gliadina, así como los anticuerpos de la reticulina y endomisio para reducir el número de biopsias
intestinales necesarias para efectuar el diagnóstico.6
Recientes investigaciones han revelado que los anticuerpos anti-gliadina presentes en los pacientes
celíacos se unen a un número muy limitado de epítopes específicos de la molécula de gliadina.7,8 Esos
mismos estudios han revelado también que la desamidación de la gliadina por la enzima asociada a la
enfermedad celíaca, la transglutaminasa tisular, favorece su unión a los anticuerpos anti-gliadina.
Basándose en las anteriores observaciones, se ha demostrado que los análisis que utilizan péptidos
desamidados y específicos consiguen una mayor exactitud en el diagnóstico de la enfermedad que los
análisis anti-gliadina habituales.9
Tanto los anticuerpos de la gliadina IgA como de la IgG son detectables en el suero de pacientes con
enteropatías sensibles al gluten.2,3 Los anticuerpos de la gliadina IgG parecen ser marcadores más
sensibles pero menos específicos de la enfermedad en comparación con los anticuerpos de la clase IgA.
Los anticuerpos de la gliadina IgA son menos sensibles pero más específicos. Una estrategia de muestreo
sensible para una población de riesgo incluiría los tests para los anticuerpos de la gliadina, tanto de tipo IgG
como de tipo IgA, puesto que una importante proporción de los pacientes con trastornos celíacos tienen
carencia de gliadina IgA.10 Los anticuerpos de la gliadina IgA resultan más interesantes para realizar un
seguimiento de la actividad de la enfermedad a lo largo del tiempo y para controlar hasta qué punto se sigue
una dieta sin gluten.5
Procedimiento de trabajo
Los péptidos de gliadina purificados se unen a las cavidades de una placa microperforada de poliestireno en
condiciones que conservan el antígeno en su estado original. Se añaden controles y muestras
convenientemente diluidas en pocillos separados, uniéndose durante la incubación los anticuerpos anti
gliadina al antígeno que los recubre. El resto de componentes no unidos se eliminan mediante lavado y se
añade conjugado anti IgA humana a cada pocillo. Un segundo paso de incubación permite que el conjugado
se una a los anticuerpos presentes. Tras un lavado que elimina el conjugado sobrante, se añade un sustrato
cromógenico y tras incubación la actividad enzimática presente en el pocillo es proporcional a la intensidad
de color desarrollado. El ensayo puede ser evaluado fotométricamente comparando la intensidad de color
en las muestras con la de los controles.
Reactivos
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
La placa microperforada de poliesterino utilizada en los análisis ELISA se cubre de péptidos de
gliadina purificados (12-1 x 8 pocillos), envasada en su soporte en una bolsa de aluminio con
desecante
Control negativo ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano ausente de
anticuerpos humanos anti gliadina, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA gliadina IgA Positivo Débil, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero
humano con anticuerpos anti gliadina IgA, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA gliadina IgA Positivo Fuerte, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero
humano con anticuerpos anti gliadina IgA, prediluido, 1.2 ml
Diluyente de Muestra HRP, 1 frasco color rosado conteniendo tampón con Tris, Tween 20 y
conservante, 50 ml
Solución de Lavado Concentrada HRP, 1 frasco de concentrado 40x color rojo conteniendo tampón
con Tris y Tween 20, 25ml. Referirse a la Sección “Metodología” para instrucciones de dilución.
Conjugado HRP IgA, con anti- IgA humana de cabra, 1 frasco - color amarillo conteniendo tampón,
estabilizante de proteína y conservante, 10ml
Cromógeno TMB, 1 frasco conteniendo estabilizantes, 10ml
Solución de Parada HRP, Acido Sulfúrico 0.344 M, 1 frasco, incolora, 10 ml
1
Advertencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Aviso: Este producto contiene cloramfenicol al 0.02% en el Diluyente de muestras, controles y
conjugado considerado en el estado de California como causante de cáncer.
Todo material de origen humano usado en la preparación de los controles para este producto se ha
examinado resultando negativo para anticuerpos contra HIV, HbsAg, y HCV por métodos aprobados
por la FDA. Ningún método puede sin embargo ofrecer garantía completa que HIV, HBV, HCV o
otros agentes contagiosos estén ausentes. Por lo tanto, los controles Gliadina IgA II ELISA positivo
fuerte, Gliadina IgA II ELISA positivo débil y ELISA negativo deben manejarse como si fueran
material potencialmente contagioso.11
Dado que se utiliza azida sódica como conservante, este producto puede ser tóxico por ingestión o
absorción a través de piel o mucosas. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o cobre de las
tuberías para formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Si se utilizan desagües para la
eliminación de reactivos se recomienda lavarlos con abundante agua para prevenir la formación de
dichas azidas metálicas.
El Conjugado HRP contiene diluido un producto químico venenoso y corrosivo que puede ser tóxico
si se ingiere. Para impedir quemaduras, evitar el contacto con piel o ojos.
El Cromógeno TMB contiene un irritante. Puede ser dañino si es inhalado, ingerido o absorbido por
la piel. Evitar la inhalación, ingestión o contacto con piel y ojos.
La Solución de parada HRP consiste de una solución diluida de ácido sulfúrico. Evitar exposición a
bases, metales, u otros compuestos que puedan reaccionar con ácidos. El ácido Sulfúrico es
venenoso y corrosivo, puede ser tóxico si ingerido. Para impedir quemaduras, evitar contacto con
piel y ojos.
Se recomienda utilizar el equipo protector apropiado al trabajar con este kit.
Los reactivos derramados deben limpiarse inmediatamente. Siga las normas aplicables en su
laboratorio acerca de la eliminación de residuos.
Precauciones
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Este producto es para ser usado en el Diagnóstico In Vitro.
La sustitución de componentes diferentes de los incluidos en el sistema puede generar resultados
inconsistentes.
Un lavado incompleto o ineficiente y una eliminación insuficiente de líquido de los pocillos puede dar
lugar a una pérdida de precisión y/o un fondo elevado.
La adaptación de este ensayo para su uso en procesadores automáticos u otros dispositivos,
totalmente o en parte, puede producir diferencias en los resultados en comparación con el
procedimiento manual. Es responsabilidad de cada laboratorio de validar sus procedimiento
automatizado y comprobar que produce resultados dentro de los límites aceptables.
Existe una variedad de factores que influyen en la realización del ensayo. Esto incluye la
temperatura inicial de los reactivos, la temperatura ambiente, la exactitud y reproducibilidad de
técnica de pipeteo, la calidad de la técnica de lavando, el fotómetro que se utiliza para medir los
resultados, y los tiempos de incubación durante el ensayo. Es necesario un exquisito cuidado y un
trabajo consistente para obtener resultados exactos y reproducibles.
Se recomienda seguir estrictamente el protocolo.
El sellado incompleto de la bolsa “zip-lock” que contenga tiras sin usar y desecante provocará la
degradación del antígeno que se apreciará en un empeoramiento de la precisión de resultados.
Pueden observarse absorbancias inaceptablemente bajas tras dos o más usos separados de un
conjugado HRP. Es importante seguir todas las recomendaciones de manipulación específicas para
este producto para evitar que esto ocurra.
La contaminación química del conjugado HRP puede ocurrir como resultado de una limpieza o
secado inadecuados del equipo o instrumentos. Residuos de productos químicos comunes en el
laboratorio como formalina, lejía, etanol, o detergente causan la degradación del conjugado HRP con
el tiempo. Enjuague bien todo equipo o instrumentos después de usar dichos productos.
Condiciones de Almacenaje
1.
2.
3.
Guardar todos los reactivos del kit en nevera a 2-8°C. No congelar. Los reactivos son estables hasta
la fecha de caducidad si son almacenados y manipulados correctamente.
Las tiras sin utilizar deben volverse a guardar en la bolsa de aluminio que contiene desecantes
cerrándola herméticamente y almacenándola a 2-8ºC.
La solución de lavado diluida es estable 1 semana a 2-8°C.
Recolección de Muestras
Este kit requiere suero como muestra. La adición de azida u otros conservantes a las muestras puede
afectar adversamente los resultados. No deben utilizarse muestras contaminadas, tratadas por calor o que
contengan partículas visibles. Deben asimismo evitarse las muestras lipémicas o hemolizadas.
Tras la recolección de las muestras de sangre, el suero debe ser separado del coágulo. El documento
NCCLS H18-A3 recomienda las siguientes condiciones de almacenaje para muestras: 1) Guardar las
muestras a temperatura ambiente no más de 8 horas. 2) Si el ensayo no se va completar en 8 horas,
refrigerar la muestra a 2-8°C. 3) Si el ensayo no se va completar entre 48 horas, o para enviar las muestras,
congelar a -20°C o a temperatura inferior. Una vez descongeladas las muestras deben agitarse bien antes
de utilizarse.
2
Procedimiento
Materiales Suministrados
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Microplaca Gliadina IgA II ELISA (12-1 x 8 pocillos), con soporte
1.2 ml control prediluido ELISA negativo
1.2ml control prediluido Gliadina IgA II ELISA Positivo Débil
1.2ml control prediluido Gliadina IgA II ELISA Positivo Fuerte
50ml Diluyente de muestra HRP
25ml Solución de lavado concentrada 40X
10ml Conjugado IgA (cabra) anti IgA humana
10ml Cromógeno TMB
10ml Solución parada HRP (Ácido Sulfúrico 0.344M)
Material necesario no incluido
Micropipetas para 5, 100, 200-300 y 500µl
Puntas desechables para micropipeta
Tubos para dilución de muestras, 4ml
Agua destilada o desionizada
Recipiente de 1L para la solución de lavado reconstituida
Lector de microplacas capaz de medir densidades ópticas a 450nm (y a 620nm para lecturas de doble
longitud de onda)
Metodología
Antes de empezar
1.
2.
3.
4.
Llevar todos reactivos y muestras a la temperatura ambiente (20-26°C) y agitar.
Diluir la solución de lavado HRP 1:40 añadiendo el contenido del envase con concentrado a 975 ml
de agua destilada o desionizada. Si no va a utilizar toda la placa, puede preparar una cantidad
menor de solución de lavado añadiendo 2.0 ml del concentrado a 78ml de agua destilada para cada
16 pocillos que vayan a utilizarse. El tampón diluido es estable 1 semana a 2-8°C.
Preparar una dilución 1:101 de cada muestra a procesar añadiendo 5 µl de muestra a 500 µl de
diluyente. Las muestras diluidas deben ser utilizadas dentro de las 8 horas de su preparación. NO
DILUIR los controles Gliadina IgA II ELISA positivo débil, positivo fuerte y ELISA negativo.
La determinación de la presencia o ausencia de anticuerpos anti gliadina IgA usando unidades
arbitrarias requiere dos pocillos para cada uno de los tres controles y uno o dos pocillos para cada
muestra. Se recomienda que las muestras se hagan por duplicado.
Procedimiento de Ensayo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
TODOS REACTIVOS DEBEN ESTAR A TEMPERATURA AMBIENTE (20-26°C) ANTES DE
EMPEZAR EL ENSAYO. Ponga el número necesario de tiras en el soporte. Devolver
inmediatamente las tiras sin utilizar a la bolsa de aluminio y sellarla firmemente para
minimizar la exposición a la humedad.
Agregar 100µl de los controles prediluidos Gliadina IgA II ELISA Positivo Débil, Gliadina IgA II ELISA
Positivo Fuerte, ELISA Negativo y las muestras prediluidas a los pocillos. Cubrir los pocillos e
incubar 30 minutos a temperatura ambiente en una superficie plana. El tiempo de incubación
empieza después de la adición de la última muestra.
Lavado: Aspirar el contenido de cada pocillo. Agregar 200-300µl de solución de lavado a todos
pocillos y aspirar. Repetir esta secuencia dos veces más para un total de tres lavados. Invertir la
placa y golpearla suavemente en material absorbente para eliminar cualquier fluido residual tras el
último lavado. Es importante que cada pocillo esté completamente vacío después de cada paso de
lavado. Mantener la misma secuencia para la aspiración que la usada para la adición de muestras.
Agregar 100µl de Conjugado IgA HRP a cada pocillo. El conjugado debe pipetearse en las
condiciones más asépticas posibles y siguiendo buenas técnicas de laboratorio. Aspirar solamente la
cantidad de conjugado necesaria para el ensayo. PARA EVITAR CUALQUIER CONTAMINACIÓN
POTENCIAL MICROBIANA Y/O QUÍMICA, NUNCA DEVOLVER EL CONJUGADO SIN USAR A
SU RECIPIENTE ORIGINAL. Incubar los pocillos 30 minutos como en el paso 2.
Lavado: Repetir el paso 3.
Agregar 100µl de Cromógeno TMB a cada pocillo e incubar 30 minutos en oscuridad a temperatura
ambiente.
Agregar 100µl de Solución de parada a cada pocillo. Mantener la misma secuencia y
temporalización que la efectuada en la adición de Cromógeno. Agitar suavemente la placa para
mezclar bien los pocillos.
Leer la absorbancia (DO) de cada pocillo a 450nm en un plazo máximo de una hora. Si se desea
seguir el método de lectura bicromática puede utilizarse 620 nm como longitud de onda de
referencia.
3
Control de Calidad
1.
2.
3.
4.
Los controles Gliadina IgA II ELISA Positivo Débil, Gliadina IgA II ELISA Positivo Fuerte y Control
Negativo ELISA deben procesarse con cada lote de muestras para asegurar que todos reactivos y
procedimientos funcionan correctamente.
El usuario debe notar que debido a que los controles Gliadina IgA II ELISA Positivo Débil, Gliadina
IgA II ELISA Positivo Fuerte y ELISA Negativo son prediluidos, no controlan procedimientos
asociados con dilución de especímenes.
Pueden añadirse controles adicionales según las directivas o requisitos del laboratorio. Pueden
prepararse controles válidos haciendo alícuotas de un “pool” de suero humano que debe
almacenarse a < -20°C.
Para considerar válidos los resultados deben considerarse satisfechos todos los criterios
especificados a continuación, si alguno de ellos no se cumple la prueba debe considerarse inválida y
repetirse.
a.
La absorbancia del control gliadina IgA Positivo debe ser superior a la del control gliadina IgA
positivo débil y la de este debe ser superior a la del control negativo.
b.
El control gliadina IgA positivo fuerte debe tener una absorbancia mayor que 1.0 mientras
que la del control negativo no debe exceder de 0.2.
c.
La absorbancia del control gliadina IgA positivo débil debe ser superior al doble del control
negativo, u oscilar entre 0.25.
d.
Los controles ELISA negativo y gliadina IgA positivo fuerte están pensados para monitorizar
problemas de reactivo de magnitud substancial. El control gliadina IgA positivo fuerte no
puede asegurar precisión alguna en el punto de corte del ensayo.
e.
El usuario puede referirse al documento NCCLS (National Committee of Clinical Laboratory
Standards) C24-A2 para una guía adicional acerca de buenas prácticas de laboratorio.
Cálculo de Resultados
Debe determinarse en primer lugar el promedio de densidades ópticas de cada juego de duplicados. La
reactividad para cada muestra se calcula dividiendo la densidad óptica promedio de la muestra por la
densidad óptica promedio del control gliadina IgA positivo débil.
DO Muestra
Valor de la Muestra = —————————————————— x Valor ELISA Positivo Débil
(unidades)
DO ELISA Positivo Débil
(unidades)
La reactividad de la muestra está relacionada de manera no lineal con la cantidad de anticuerpo presente.
Mientras que los aumentos y disminuciones en la concentración de anticuerpos del paciente se reflejarán en
el aumento o disminución correspondiente de la reactividad, los cambios no son proporcionales (por
ejemplo, al doblarse la concentración de anticuerpo no se dobla la reactividad). Si se deseara una
cuantificación más precisa de la cantidad de anticuerpo, puede informarse como el título de anticuerpo de la
muestra la última dilución positiva de una serie de diluciones seriadas de la muestra.
Interpretación de los Resultados
La técnica ELISA es muy sensible y es capaz de detectar pequeñas diferencias entre poblaciones de
pacientes. Los valores presentados a continuación son sólo valores sugeridos. Cada laboratorio debe
establecer su propio rango normal basado en su propia metodología, controles, equipo y población de
pacientes.
La muestra puede clasificarse con un valor negativo, positivo débil, positivo moderado a positivo fuerte
según la tabla siguiente.
Unidades
Negativo
<20
Positivo Débil
20 – 30
De positivo moderado a
Positivo Fuerte
>30
1.
2.
3.
Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos de la gliadina IgA y sugiere la posibilidad de
que existan ciertas enteropatías sensibles al gluten, como la enfermedad celíaca o la dermatitis
herpetiforme.
Un resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos anti gliadina IgA o niveles inferiores al punto
de corte del ensayo.
Se sugiere que los resultados informados por el laboratorio incluyan la afirmación “Los siguientes
resultados se obtuvieron con el kit INOVA QUANTA LiteTM Gliadin IgA II ELISA. Los valores
obtenidos con kits de diferentes fabricantes pueden variar y no pueden intercambiarse entre ellos. La
magnitud de los niveles informados de IgA no puede correlacionarse con un punto final”.
Limitaciones del Procedimiento
1.
2.
Un resultado negativo para la gliadina IgA en un paciente sin tratamiento no descarta la existencia
de una enteropatía sensible al gluten, especialmente cuando está asociada con altos niveles de
anticuerpos de la gliadina IgG. Este hecho puede explicarse a menudo a partir de una deficiencia
selectiva de IgA, cosa que suele ocurrir con relativa frecuencia en la enfermedad celíaca.
En el caso de los pacientes sometidos a tratamiento que presentan anticuerpos anti-IgA, los niveles
de anticuerpos de la gliadina IgA sirven mejor como indicadores del estricto cumplimiento de la dieta
que la concentración de anticuerpos de la gliadina IgG.5
4
3.
4.
5.
6.
Es posible que aparezcan falsos positivos (altos niveles de anticuerpos sin evidencias histológicas
características). Se sabe que otras afecciones gastrointestinales provocan la circulación de
anticuerpos de la gliadina, especialmente la enfermedad de Crohn, la intolerancia a las proteínas de
los alimentos (leche de vaca) y la mala absorción intestinal postinfecciosa.2
La relación entre la dermatitis herpetiforme y la enteropatía sensible al gluten es tan fuerte que se ha
llegado a sugerir que ambas enfermedades tienen una etiología común; en estos pacientes,
determinar la existencia de anticuerpos de la gliadina resulta útil para detectar enfermedades
celíacas asintomáticas y para evaluar la gravedad de los efectos gastrointestinales.12,13
Los resultados de este ensayo deben utilizarse conjuntamente con hallazgos clínicos y otras
pruebas serológicas.
La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero.
Valores Esperados
La capacidad de la QUANTA LiteTM Gliadin IgA II para detectar anticuerpos IgA anti-gliadina se ha evaluado
por comparación con un análisis ELISA utilizando gliadina nativa entera sobre la fase sólida en lugar del
péptido sintético.
Rango Normal
Se realizó una determinación de anticuerpos IgA anti-gliadina en quinientos donantes de sangre
seleccionados aleatoriamente. Trescientos de esos donantes tenían una edad comprendida entre 14 y 78
años y la proporción de hombres y mujeres era la misma. Once muestras (2.2%) estuvieron por encima del
valor límite de 20 unidades, y dos de ellas fueron sólo débilmente positivas, con 20.8 y 25.8 unidades. El
valor más alto de esas 11 muestras positivas fue de 135 unidades. Una de las once muestras dio positivo
tanto para la IgA anti-tTG como para los EMA, considerándose por tanto como un verdadero positivo. El
valor medio de las 500 muestras fue de 5.5 unidades. La desviación estándar de las muestras negativas fue
de 2.6 unidades. El valor medio está 5 desviaciones estándar por debajo del valor límite de 20 unidades. La
especificidad con la única muestra doble positiva a endomisio y tTG obtenida es del 98%.
Estudios comparativos
Se analizaron 113 muestras de tres laboratorios de referencia para la enfermedad celíaca utilizando tanto un
kit de QUANTA LiteTM Gliadin IgA II como un kit de IgA anti-gliadina convencional. A continuación se
muestran esos resultados, junto con los de las 500 muestras normales.
+
Gliadin IgA
+
21
21**
-
21*
550
571
42
571
613
Total
42
Gliadin IgA II
Total
Porcentaje de concordancia positiva:
Porcentaje de concordancia negativa:
Concordancia global:
21/42 (50.0%)
550/571 (96.3%)
571/613 (93.1%)
* Quince de esas 21 muestras dieron un resultado falso positivo con el kit de IgA anti-gliadina convencional,
puesto que pertenecían al grupo de población normal.
** Once de esas 21 muestras son verdaderos positivos, puesto que pertenecen todas ellas a pacientes en
los que se diagnóstico la enfermedad celíaca.
Sensibilidad y Especificidad Clínicas
Las muestras clínicamente definidas como de pacientes positivos a la enfermedad celíaca, pacientes
positivos a la enfermedad celíaca y con una dieta sin gluten, pacientes positivos a la enfermedad celíaca y
con una dieta sin gluten que siguen siendo positivos a los anticuerpos anti-endomisio, o un familiar en
primero grado de un paciente celíaco, se analizaron utilizando tanto un kit de QUANTA LiteTM Gliadin IgA II
como un kit convencional de IgA anti-gliadina para análisis ELISA. A continuación se presenta un resumen
de las muestras clínicamente significativas, más las muestras con valores dentro de los límites de
normalidad.
Número de positivos (%)
Grupo de pacientes (no. de pacientes) IgA anti-gliadina (convencional) Péptido IgA II anti-gliadina
Positivos a enfermedad celíaca
(32)
16 (50%)
22 (69%)
Positivos a enfermedad celíaca,
Dieta sin gluten
(30)
4 (13%)
4 (13%)
Positivos a enfermedad celíaca
(5)
3 (60%)
4 (80%)
Dieta sin gluten,
Positivos a EMA
Familiares en primer grado
(20)*
2 (10%)
1 (5%)
Celíaco IgA Deficiente
(5)**
0 (0%)
0 (0%)
Normales sanos
(521)
17 (3.3%)
11 (2.1%)
*Estos 20 familiares en primer grado fueron negativos para los anticuerpos anti-endomisio y tTG.
** Estos 5 celíaco IgA deficiente encontraron positivos en kit Péptido IgG II anti-gliadina.
5
Reactividad cruzada
Para detectar posibles problemas de reactividad cruzada con otros autoanticuerpos, se analizó una serie de
muestras positivas a autoanticuerpos con un alto nivel de títulos utilizando el kit de QUANTA LiteTM Gliadin
IgA II. En total, se analizaron 45 muestras. Las especificidades incluyeron Actina (5), PCNA (1), AMA (1),
Fibrilerina (1), Cromatina (1), Histona (4), LKM (4), SS-B (4), Scl-70 (4), RNP (4), RF IgM (4), Centrómetro
(4), IgG anti-β2 (2), IgM anti-β2 (1), IgA anti-β2 (1) y GBM (4). El valor medio de esas 45 muestras fue de 3,3
unidades. El valor más alto se obtuvo con una de las muestras de Histona y fue de 15.9 unidades. El valor
medio está 6 desviaciones estándar por debajo del valor límite de 20 unidades.
Precisión y Reproducibilidad
Se evaluó el rendimiento intra-ensayo para el kit de QUANTA LiteTM Gliadin IgA II analizando 9 especímenes
un total de 5 veces cada uno. En la siguiente Tabla 1 se resumen los resultados.
Tabla 1: Rendimiento intra-ensayo del método ELISA para QUANTA LiteTM Gliadin IgA II
1
2
3
4
5
6
7
8
Unidades medias
23.9
39.3
78.2
97.0
142.3 153.2
5.0
4.8
Desviación estándar
0.5
0.8
2.5
1.8
1.7
5.0
0.4
0.4
Coeficiente de variación % 1.9
2.1
3.2
2.1
1.2
3.3
7.3
8.9
9
4.9
0.3
6.4
La variación inter-ensayo se evaluó analizando, por duplicado, un panel de 5 especímenes y el control
claramente positivo del kit (una vez por la mañana y otra por la tarde) durante tres días. En la siguiente
Tabla 2 se resumen los resultados.
Tabla 2: Rendimiento intra-ensayo del método ELISA para QUANTA LiteTM Gliadin IgA II
HPC
A
B
C
D
E
Unidades medias
126.0
24.2
34.4
164.1
7.0
7.6
Desviación estándar
1.5
4.0
0.7
5.1
0.6
1.0
Coeficiente de variación % 1.2
16.4
2.0
3.1
8.9
13.8
Referencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
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Fabricante:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
United States of America
Representante Autorizado:
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September 2005
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