EVALUACIÓN DEL KIT “PNEUMO DEPISTAGE”

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EVALUACIÓN DEL KIT “PNEUMO DEPISTAGE” PARA PREDECIR LA
SENSIBILIDAD A PENICILINA EN AISLAMIENTOS DE Streptococcus
Gagetti P,
J Pace y M Galas.
P, A Corso, P Ceriana, pneumoniae.
Servicio Antimicrobianos. INEI – ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrá
Malbrán”. Av. Velez
Sarsfield 563. Buenos Aires. Argentina. [email protected]
INTRODUCCION
Según las normas NCCLS M7-A6, a los aislamientos de Streptococcus pneumoniae (SPN) provenientes de LCR se les debería determinar las
CIMs a penicilina (PEN) y cefotaxima/ceftriaxona para guiar el tratamiento antimicrobiano. El kit “Pneumo Dépistage” (PDE) (Internacional
Microbio, Francia) fue diseñado para determinar la sensibilidad a PEN y amoxicilina (AMX) de SPN en un tiempo de 4-6 horas. El kit se basa en
la técnica de concentraciones break-point, donde dos concentraciones de PEN o AMX se enfrentan a una suspensión de SPN en un medio con
un indicador de pH. Luego de incubar, el desarrollo bacteriano se visualiza por medio del viraje del indicador de azul a amarillo. Las
concentraciones de PEN y AMX incluidas en PND, fueron elegidas en base a las recomendaciones de la Sociedad Francesa de Microbiología:
0.06 y 1µg/ml para PEN y 0.5 y 2 µg/ml para AMX. Las concentraciones de PEN permitirían categorizar por NCCLS 2003 la CIM en: <0,06
µg/ml sensible (“S”), 0,12-1 µg/ml intermedio (“I”) y >2 µg/ml resistente (“R”). Por el contrario, las concentraciones seleccionadas para AMX no
permiten categorizar las cepas “I” ó “R” a esta droga (“S” < 2, “I” 4 y “R” > 8 µg/ml) y sólo podrían ser útiles para diferenciar los SPN “S”
(CIMs <2 µg/ml) del resto (CIM > 4 µg/m, “I” ó ”R”).
MATERIALES Y METODOS
El PDE se evaluó frente a 89 cepas de SPN de colección
nacional/internacional, previamente caracterizadas: 31 “S”, 35 “I” y
23 “R” a PEN. Todos eran “S” a AMX, 51 con CIMs < 0.5 µg/ml y
38 con CIM 1-2 µg/ml.
Los valores de CIMs de referencia a PEN y AMX, se determinaron
por el método de dilución en agar MH con 5% de sangre ovina, 24
hs. de incubación en atmósfera de 5% CO2 y se interpretaron con
NCCLS 2003. La cepa ATCC 49619 fue incluída como control de la
CIM y PDE.
El PDE se realizó según indicaciones
del fabricante. Se siembra una
suspensión bacteriana estandarizada
en caldo MH con azul de
bromoxylenol en una cubeta con 5
pocillos, pocillo 1: control de
crecimiento, pocillos 2 y 3: 0.06 y 1
µg/ml de PEN, y pocillos 4 y 5: 0.5 y
2 µg/ml de AMX.
C+
Penicilina G
Amoxicilina
0.06
0.5
1
2
AMOXICILINA g/ml
INTERPRETACION
PDE
PENICILINA g/ml
1
-
-
 0.06
+
-
0.12 – 1
+
+
≥2
El objetivo del presente estudio fue
evaluar la capacidad del kit PDE para
predecir la sensibilidad a PEN y AMX en
aislamientos de SPN.
RESULTADOS
Se incuba por 4-6 hs a 35-37C. El crecimiento bacteriano se
visualiza como un cambio de color del medio, de azul a amarillo.
Los colores amarillo-verdoso o azul-verdoso, también son indicativos
de desarrollo bacteriano.
0.06
OBJETIVO
S
I
R
0.5
2
-
-
 0.5
+
-
1- 2
+
+
≥4
El PDE presentó para PEN, una concordancia global de 91%
(81/89) en la categoría de interpretación: 96,8% (30/31) para las
cepas “S”, 94,3% (33/35) para las cepas “I” y 78,3% (18/23) para
las “R”.
No se detectaron errores “major” ni “very major”, sin embargo
hubo 8 (9%) errores ”minor”. Entre los errores ”minor”, 5 fueron
de “R” a ”I”, 1 de “S” a “I”, 1 de “I”a ”S” y 1 de “I” a “R”. Las
cepas incluidas en este estudio eran “S” a AMX y el PDE
categorizó correctamente el 97,8% (87/89) de estos SPN.
PENICILINA
Nº cepas Depistage
I
R
% Concordancia
Depistage/CIM
Very major
Major
Minor
31
30
1
0
96,8
0
0
1
I (0,12-1)
35
1
33
1
94,3
0
0
2
R (≥2)
23
0
5
18
78,3
0
0
5
Total
89
91
0
0
8 (9)
n
S (≤0,06)
S
S
IóR
Nº errores (%)
S
CIM PEN
AMOXICILINA
Nº cepas Depistage
Nº errores (%)
S
I/R
% Concordancia
Depistage/CIM
Very major
Major
Minor
51
51
0
100
0
0
0
S (1-2)
38
36
2
94,4
0
0
2
I/R (≥4)
0
--
--
--
--
--
--
Total
89
97,8
0
0
2 (2,2%)
CIM AMX
n
S (≤0,5)
CONCLUSIONES
El kit PDE mostró
mostró una concordancia general de 91% en la categorizació
categorización de la sensibilidad a PEN para SPN
aislados de pacientes con meningitis.
Con respecto a AMX, a pesar de que la concordancia del PDE con la
la CIM de referencia fue de 97.8%, dado que
las concentraciones usadas son breakbreak-point,
point, este kit sólo se podrí
podría utilizar para evaluar sensibilidad a esta droga.
La fá
fácil realizació
realización y rá
rápida obtenció
obtención de resultados, hacen de este kit una posible alternativa para predecir la
sensibilidad a PEN en un laboratorio clí
clínico.