HL-2-1387P_2008-06(5) [SAS-1 Cholesterol profile 12].qxp

Transcripción

SAS-1 Cholesterol Profile-12
Instructions For Use
REF 200600
SAS-1 Profil du cholestérol 12
Fiche technique
SAS-1 Cholesterin-Status-12
Anleitung
Profilo 12 del colesterolo SAS-1
Istruzioni per l’uso
SAS-1 Nivel de Colesterol-12
Instrucciones de uso
Contents
English
Français
Deutsch
Italiano
Español
1
7
14
21
28
SAS-1 CHOLESTEROL PROFILE-12
INTENDED PURPOSE
The SAS-1 Cholesterol Profile-12 Kit separates serum lipoproteins according to charge in a buffered
agarose gel. The lipoprotein bands are then visualised by incubation with a cholesterol reagent which
quantitatively visualises cholesterol and cholesterol esters according to the following reaction
sequence:
Cholesterol esterase
Cholesterol ester
+
Cholesterol + NAD
+
NADH + H + NBT
Cholesterol dehydrogenase
Diaphorase
Cholesterol + Fatty Acid
+
Cholestenone + NADH + H
+
NAD + Formazan dye
The alpha band, which migrates fastest towards the anode, corresponds to HDL. The next band, prebeta corresponds to VLDL and the slowest moving beta band corresponds approximately to LDL.
A band may appear between the alpha and pre-beta bands on some, but not all, samples - this should
be quantitated as the Lp(a)-C fraction.
The relationship of HDL Cholesterol to coronary heart disease (CHD) was reported by Barr et al., in
1
2
3-6
1951 and Miller and Miller in 1975 . The work of Castelli et al. focused attention on HDL
Cholesterol assessment as the definitive laboratory test in determining the risk of CHD. The clinical
recommendations from the National Cholesterol Education Program (NCEP) panels direct clinical
laboratories to perform measurements of Total, HDL and LDL Cholesterols and Triglycerides. LDL,
as the validated atherogenic lipoprotein based upon its cholesterol content, is the primary basis for
7
treatment decisions in the NCEP guidelines .
8
The cholesterol content of the lipoprotein fractions has been determined by ultracentrifugation ,
9
10
selective precipitation , and electrophoresis on various media . The common research method for
accurate LDL quantitation, and the basis for the reference method, is designated ‘beta-quantification’,
beta referring to the electrophoretic term for LDL. The beta-quantification method involves a
11,12
combination of ultracentrifugation and chemical precipitation . The beta-quantification method gives
13,14
a so-called ‘broad-cut’ LDL, which includes Lp(a)-C lipoprotein . The NCEP panels concluded that
alternative methods are needed for routine diagnostic use which, preferably, directly separate LDL for
15
cholesterol quantitation . One such method for direct separation of LDL is electrophoresis.
The Helena BioSciences SAS-1 Cholesterol Profile method demonstrates good separations of the
major lipoprotein classes, with precise and accurate quantitation of HDL, LDL, VLDL and Lp(a)
cholesterols in comparisons with the reference methods.
WARNINGS AND PRECAUTIONS
All reagents are for in-vitro diagnostic use only. Do not ingest or pipette by mouth any kit component.
Wear gloves when handling all kit components. Refer to the product safety data sheet for risk and
safety phrases and disposal information.
1
English
COMPOSITION
1. SAS-1 Cholesterol Profile Gel (x10)
Contains agarose in a Barbital buffer with sodium azide as preservative. The gel is ready for use
as packaged.
2. Cholesterol Profile Reagent (10x 1ml)
Contains those compounds required for the identification of Cholesterol according to the reaction
sequence shown above. See STEP-BY-STEP PROCEDURE for reconstitution instructions.
3. Cholesterol Profile Diluent (1x 27ml)
Contains Triton X-100 and preservative. The diluent is ready for use as packaged.
4. Other Kit Components
Each kit contains Instructions For Use and sufficient Reagent Spreading Film and Blotter C to
complete 10 gels.
STORAGE AND SHELF-LIFE
1. SAS-1 Cholesterol Profile Gel
Gels should be stored at 15...30°C and are stable until the expiry date indicated on the package.
DO NOT REFRIGERATE OR FREEZE. Deterioration of the gel may be indicated by 1) crystalline
appearance indicating the gel has been frozen, 2) cracking and peeling indicating drying of the gel
or 3) visible contamination of the agarose from bacterial or fungal sources.
2. Cholesterol Profile Reagent
The reagent vials should be stored at 2...6°C and are stable until the expiry date indicated on the
label. Reconstituted reagent is stable for 6 hours at 2...6°C.
3. Cholesterol Profile Diluent
The diluent should be stored at 2...6°C and is stable until the expiry date indicated on the label.
Avoid contamination. Cloudiness or particulate matter may indicate deterioration.
ITEMS REQUIRED BUT NOT PROVIDED
Cat. No. 210200 Applicator Blades (1 x 10)
Cat. No. 210300 Applicator Blades (5 x 10)
Cat. No. 210100 Disposable Sample Cups (100)
Cat. No. 3100 REP Prep
Drying Oven with forced air capable of 50...60°C.
Incubator capable of 30°C.
Destain solution: Mix 50ml of glacial acetic acid and 950ml of purified water. Store in a tightly
stoppered bottle.
Purified water
SAMPLE COLLECTION AND PREPARATION
Fresh serum or EDTA anticoagulated plasma is the specimen of choice. Samples can be stored
refrigerated at 2...6°C for up to 4 days. DO NOT FREEZE.
Patient Preparation:
1) If HDL Cholesterol is the only parameter to be determined, the patient need not be fasting.
If other lipid values are to be determined then the patient should fast for a 12 -14 hour period prior
to sampling.
2) Discontinue all drugs for 3-4 weeks if possible.
3) The patient should be maintaining a stable weight and be on normal diet for at least 1 week.
2
4) Wait 4-8 weeks after a myocardial infarction or similar traumatic episode.
Interfering Factors:
1) Heparin therapy can lead to alterations in the migration of the lipoproteins, particularly beta
lipoprotein.
STEP BY STEP PROCEDURE
1. Pipette 35µl of the sample into the appropriate well of the sample tray or disposable sample cups.
i) SAS-1 Plus users: Use SAS-1 sample tray. Carefully place the sample tray onto the applicator
drawer. Ensure that the tray is pushed firmly down into position.
ii) SAS-3 users: Use SPIFE / SAS-3 sample tray. Carefully locate the sample tray using the sample base
locating pins. Ensure that the tray is positioned securely.
2. Remove the gel from the packaging and:
i) SAS-1 Plus users: dispense 400µL of REP Prep onto the heat sink. Place the gel onto the heat sink,
agarose side up, aligning the positive and negative sides with the corresponding electrode posts,
taking care to avoid air bubbles under the gel.
ii) SAS-3 users: place the alignment guide onto the pins and dispense 400µL of REP Prep onto the
centre of the chamber. Place the gel into the chamber agarose side up, using the guide, align the
positive and negative sides with the corresponding electrode posts, taking care to avoid air bubbles
under the gel.
3. Blot the surface of the gel with a blotter C, discard the blotter.
4. i) SAS-1 Plus users: attach the electrodes onto the top side of the electrode posts so that they are
in contact with the gel blocks. Place the cover over the gel and electrodes and press firmly for 5
seconds to ensure contact.
ii) SAS-3 users: attach the electrodes onto the the electrode posts so that they are in contact with
the gel blocks.
5. Place 1 applicator blade assembly into the top position on the instrument, (SAS-3 users: slot 8).
6. Perform the Cholesterol Profile electrophoresis:
i) SAS-1 Plus users:
Electrophoresis: 90 volts, 30 mins, 25°C, 3 applications
Incubation Step 1: 30 mins, 30°C
ii) SAS-3 users:
*
Step
Time (mm:ss) Temperature (°C) Voltage Other
Electrophoresis
Load Sample
00:10
21
Speed 1
Apply Sample
00:10
21
Speed 1*
Repeat steps ‘ load sample, apply sample’ for a total of 3 applications.
Electrophoresis
32:00
25
100
Incubate
30:00
30
(Prompt: Press key to
continue)
Use Location 2
7. Approximately 3-4 minutes before the end of electrophoresis, reconstitute 1 vial of Cholesterol
Profile Reagent by adding 1ml of Cholesterol Profile Diluent and mix well.
3
English
8. Following electrophoresis:
SAS-1 Plus users: remove the electrodes and any excess REP Prep or moisture around the gel.
SAS-3 users: remove the electrodes, alignment guide and any excess REP Prep or moisture around
the gel.
9. Pour the contents of the Cholesterol Profile Reagent vial along the middle of the gel. Carefully
apply one piece of reagent spreading film to spread the reagent, avoiding air bubbles.
10. Incubate the gel.
11. Remove the reagent spreading film and remove both gel blocks using the Gel Block Remover.
12. Wash the gel in destain solution for 5 minutes.
13. Wash the gel in purified water for 5 minutes and dry at 50...60°C.
QUALITY CONTROL
Cholesterol Profile Control (Cat. No. 3218) can be used to verify all phases of the procedure and
should be used on each plate run. Refer to the package insert provided for appropriate assay values.
INTERPRETATION OF RESULTS
It is recommended that any evaluation of the gels is performed against normal values which have been
produced for this test in each individual laboratory.
Gels can be scanned by densitometry using a 570nm filter.
7
Treatment decisions in the NCEP guidelines are based primarily on LDL Cholesterol levels :
Total Cholesterol
Desirable blood cholesterol
Borderline-High blood cholesterol
High blood cholesterol
< 200 mg/dL
200-239 mg/dL
> 240 mg/dL
HDL Cholesterol
Low HDL cholesterol
Protective HDL cholesterol
< 35 mg/dL
> 60 mg/dL
Triglycerides
Desirable
Borderline
Elevated
Severely elevated/pancreatitis
< 250 mg/dL
250-500 mg/dL
500-1000 mg/dL
> 1000 mg/dL
LDL Cholesterol
Dietary Therapy
Without CHD and <2 risk factors
Without CHD and > 2 risk factors
With CHD
Initiation Level
> 160 mg/dL
> 130 mg/dL
> 100 mg/dL
4
LDL Goal
< 160 mg/dL
< 130 mg/dL
< 100 mg/dL
Dietary Therapy
Drug Therapy
Without CHD and <2 risk factors
Without CHD and > 2 risk factors
With CHD
Initiation Level
LDL Goal
> 190 mg/dL
> 160 mg/dL
> 130 mg/dL
< 160 mg/dL
< 130 mg/dL
< 100 mg/dL
The risk factors considered in the classification scheme are Age (males > 45 years old, females > 55
years old), family history of premature CHD, smoking, hypertension and diabetes. HDL Cholesterol
is considered high risk < 35 mg/dL and is counted as a risk factor in the classification. HDL Cholesterol
>60 mg/dL is considered protective and subtracts one from the total number of risk factors.
REFERENCE VALUES
Using 14 normal specimens from male and female donors with a total cholesterol <200mg/dL, the
following normal ranges were obtained (these are presented as a guideline only):
Protein Fraction
HDL
Lp(a)-C
VLDL
LDL
Mean (%)
26.9
1.2
8.2
63.8
+ 2SD Range
11.5 - 42.3
0 - 3.8
0 - 18.2
50.5 - 77.1
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
1) Precision
Band
HDL
LDL
VLDL
Lp(a)
Within-Run (n = 12)
Mean
SD
22.3
0.6
67.3
1.1
7.8
0.7
2.6
0.3
CV (%)
2.7
1.6
9.2
10.7
Between Run (n = 36)
Mean
SD
CV(%)
22.5
1.0
4.5
67.8
1.6
2.4
7.1
0.8
11.1
2.6
0.4
14.7
Sensitivity
Serial dilutions of an elevated cholesterol sample showed the sensitivity of the system to be equivalent
to 4.2 mg/dL cholesterol per band.
LIMITATIONS
This kit cannot be used on the Helena BioSciences SAS-1 system.
BIBLIOGRAPHY
1. Barr, D.P. et al ‘Protein-lipid Relationships in Human Plasma’, Am. J. Med., 1951 ; 11 : 480-493.
2. Miller, G.J and Miller, N.E. ‘Plasma-High Density-Lipoprotein Concentration and Development of
Ischemic Heart Disease’, Lancet, 1976 ; 1 : 16-19.
3. Kannel, W.B. et al ‘Serum Cholesterol, Lipoproteins and the Risk of Coronary Heart Disease’ Ann.
Inter. Med., 1971 ; 74 (1) : 1-12
4. Gordon, T. et al ‘High Density Lipoprotein as a Protective Factor Against Coronary Artery
Disease. The Framingham Study’, Am. J. Med., 1977 ; 62 : 707-714.
5
English
5. Galen, R.S. ‘HDL Cholesterol, How Good a Risk Factor?’, Diag. Med., 1979 ; Nov/Dec : 39-58.
6. Castelli, W.P. et al.’HDL Cholesterol and Other Lipids in Coronary Heart Disease The Cooperative Lipoprotein Phenotyping Study’ Circulation, 1977 ; 55 (5) : 767-772.
7. National Cholesterol Education Program, Second report of the expert panel on detection,
evaluation and treatment of high blood cholesterol in adults (Adult Treatment Panel II). NCEP
1993.
8. Delalla, O.F. and Gofman, J.W. ‘Ultracentrifugal Analysis of Serum Lipoprotein’, in Methods of
Biochemical Analysis, Vol. 1, D. Glick (Ed.), New York, Interscience, 459-478, 1954.
9. Burstein, M. and Scholnick, H.R., ‘Precipitation of Chylomicrons and Very Low density
Lipoproteins From Human Serum With Sodium Lauryl Sulfate’, Life Sci., 1972; 11 : 177-184.
10. Cobb, S.A. and Sanders J.L., ‘Enzymic Determination of Cholesterol in Serum Lipoproteins
Separated by Electrophoresis’, Clin. Chem., 1978; 24(7) : 1116-1120.
11. U.S. Department of Health and Human Services, Lipid Research Clinics Program. In: Hainline, Jr.
A., Karon, J., Lippel, K. (Eds.), Manual of Laboratory Operations 1983. Second Edition, NIH
Publication.
12. Belcher, J.D., McNamara, J.R., Grinstead, G.F., Rifai, N., Warnick, G.R., Bachorik, P. and Frantz
Jr., I. ‘Measurement of Low Density Lipoprotein Cholesterol Concentration’. In: Rifai, N. and
Warnick, G.R (Eds.) Methods For Clinical Laboratory Measurement of Lipid and Lipoprotein Risk
Factors’, Washington D.C. : AACC Press, 1991 : 75-86.
13. Utermann, G. ‘The Mysteries Of Lipoprotein (a)’, Science, 1989; 246 : 904-910.
14. Loscalzo, J., ‘Lipoprotein (a) a Unique Risk Factor For Atherothrombotic Disease’,
Arteriosclerosis, 1990; 10 : 672-679.
15. National Cholesterol Education Program Lipoprotein Measurement Working Group.
Recommendations For Measurement Of Low Density Lipoprotein Cholesterol. NIH Publication
(In Press).
6
SAS-1 PROFIL DU CHOLESTÉROL 12
UTILISATION
Le kit SAS-1 Profil du cholestérol (12) sépare les lipoprotéines sériques en fonction de leur charge sur
un gel d’agarose tamponné. Les bandes de lipoprotéines sont ensuite mises en évidence moyennant
incubation avec un réactif qui permet de quantifier le cholestérol et les esters de cholestérol
conformément à la série de réactions suivante:
Cholestérol-estérase
Ester de cholestérol
+
Cholestérol + NAD
+
NADH + H + NBT
Cholestérol-déshydrogénase
Diaphorase
Cholestérol + Acide gras
+
Cholesténone + NADH + H
NAD+ + Formazan coloré
La bande alpha, qui migre plus rapidement vers l’anode, correspond aux HDL. La bande suivante (prébêta) correspond aux VLDL et la bande bêta, qui migre le plus lentement, aux LDL. Il est possible qu’il
apparaisse sur certains échantillons une bande entre les bandes alpha et pré-bêta: elle correspond à la
fraction des Lp(a)-C.
La relation entre le cholestérol HDL et les cardiopathies ischémiques a été signalée par Barr et al. en
1
2
3-6
1951 et par Miller et Miller en 1975 . Les travaux de Castelli et al. se sont centrés sur la
détermination du cholestérol HDL en tant qu’analyse en laboratoire servant à déterminer les risques
de cardiopathies ischémiques. Le National Cholesterol Education Program (NCEP) recommande aux
laboratoires d’analyse de biologie médicale de réaliser un dosage du cholestérol total, HDL et LDL ainsi
que des triglycérides. Le taux de LDL, puisqu’il s’agit de la lipoprotéine dont le potentiel athérogène
est établi, constitue l’élément principal pour décider du traitement à mettre en œuvre dans les
7
directrices du NCEP .
8
Le dosage du cholestérol des fractions lipoprotéiques est déterminé par ultracentrifugation , par
9
10
précipitation sélective et par électrophorèse sur divers milieux . La méthode la plus courante
permettant de réaliser un dosage précis des LDL, la base de la méthode de référence, est appelée «
bêta-quantification », bêta faisant référence au terme électrophorétique correspondant aux LDL.
11,12
La bêta-quantification combine l’ultracentrifugation et la précipitation chimique . Elle donne pour
13,14
résultat une « grosse bande » LDL qui comprend la lipoprotéine Lp(a)-C . Le NCEP a conclu que
des méthodes alternatives séparant de préférence directement le LDL pour le dosage du cholestérol
15
sont nécessaires pour les diagnostics de routine . L’électrophorèse est l’une de ces méthodes de
séparation directe du LDL. La méthode Helena Biosciences SAS-1 Profil du cholestérol offre une
bonne séparation des principaux types de lipoprotéines et un dosage précis du cholestérol HDL, LDL,
VLDL et Lp(a) (en comparaison avec les méthodes de référence).
PRÉCAUTIONS
Tous les réactifs sont à usage diagnostic in-vitro uniquement. Ne pas ingérer ou pipeter à la bouche
aucun composant. Porter des gants pour la manipulation de tous les composants. Se reporter aux
fiches de sécurité des composants du kit pour la manipulation et l’élimination.
7
Français
COMPOSITION
1. Plaque SAS-1 Profil du cholestérol (x10)
Contient de l’agarose dans un tampon barbital additionné d’azide de sodium comme conservateur.
Le gel est prêt à l’emploi.
2. Réactif Profil du cholestérol (10x 1ml)
Contient les composants nécessaires pour identifier le cholestérol conformément à la série de
réactions indiquée auparavant. La section MÉTHODOLOGIE fournit les instructions nécessaires
à la reconstitution.
3. Diluant Profil du cholestérol (1x 27ml)
Contient du Triton X-100 et un conservateur. Le diluant est prêt à l’emploi.
4. Autres composants du kit
Chaque kit contient également une fiche technique, des films étaleurs de réactif et des buvards C
pour 10 gels.
STOCKAGE ET CONSERVATION
1. Plaque SAS-1 Profil du cholestérol
Les gels doivent être conservés entre 15...30°C; ils sont stables jusqu’à la date de péremption
indiquée sur l’emballage. NE PAS RÉFRIGÉRER OU CONGELER. Les conditions suivantes
indiquent une détérioration du gel: 1) des cristaux visibles indiquant que le gel a été congelé, 2) des
craquelures indiquant une déshydratation du gel, 3) une contamination visible, bactérienne ou
fongique.
2. Réactif Profil du cholestérol
Les flacons de réactif doivent être conservés entre 2...6°C; ils sont stables jusqu’à la date de
péremption indiquée sur l’étiquette. Le réactif reconstitué est stable 6 heures entre 2...6°C.
3. Diluant Profil du cholestérol
Le diluant doit être conservé entre 2...6°C; il est stable jusqu’à la date de péremption indiquée sur
l’étiquette. Éviter toute contamination. Un aspect floconneux ou une contamination indique une
détérioration du produit.
MATÉRIELS NÉCESSAIRES NON FOURNIS
Réf. 210200 Applicateurs échantillons (1 x 10)
Réf. 210300 Applicateurs échantillons (5 x 10)
Réf. 210100 Cupules échantillons jetables (100)
Réf. 3100 Solution de REP-prep
Étuve de séchage à convection forcée offrant une température entre 50...60°C.
Incubateur offrant une température de 30°C.
Solution décolorante: Mélanger 50ml d’acide acétique glacial avec 950ml d’eau distillée. Conserver en
bouteille hermétiquement fermée.
Eau distillée
PRÉLÈVEMENTS DES ÉCHANTILLONS
L’utilisation de sérum fraîchement prélevé ou de plasma sur EDTA est fortement recommandée.
Les échantillons peuvent être conservés 4 jours entre 2...6°C. NE PAS LES CONGELER.
8
Préparation du patient:
1) Si le cholestérol HDL est le seul paramètre à déterminer, il n’est pas nécessaire que le patient soit
à jeun. Si vous devez déterminer le taux d’autres lipides, le patient doit être à jeun 12-14 heures
avant le prélèvement de l’échantillon.
2) Arrêter, si possible, la prise de médicaments 3 à 4 semaines avant le prélèvement.
3) Il convient que le patient ait un poids stable et suive une diète normale au moins une semaine
auparavant.
4) Attendre au moins 4 à 8 semaines après un infarctus du myocarde ou traumatisme similaire.
Facteurs interférents:
1) Il est possible qu’une héparinothérapie altère la migration des lipoprotéines, en particulier des
bêta-lipoprotéines.
MÉTHODOLOGIE
1. Pipeter 35µl d’échantillon dans les puits correspondants du porte-échantillon ou dans les cupules
échantillons jetables.
i) SAS-1 Plus: Utiliser le porte-échantillon du SAS-1. Placer avec précaution le porte-échantillon sur
le chariot applicateur. S’assurer qu’il est solidement mis en place.
ii) SAS-3: Utiliser le porte-échantillon du SPIFE / SAS-3. Mettre en place le porte-échantillon avec
précaution à l’aide des ergots de guidage de l’embase. S’assurer qu’il est solidement mis en place.
2. Sortir le gel de son emballage puis:
i) SAS-1 Plus: Pipeter 400µl de REP-prep dans le dissipateur thermique. Placer le gel sur le
dissipateur thermique, agarose vers le haut, en respectant les polarités et en veillant à ce qu’il n’y
ait pas de bulles d’air sous le gel.
ii) SAS-3: Placer le guide d’alignement sur les picots et pipeter 400µl de REP-prep au centre de la
chambre. Placer le gel dans la chambre, agarose vers le haut, en respectant les polarités et en
veillant à ce qu’il n’y ait pas de bulles d’air sous le gel.
3. Sécher la surface du gel à l’aide d’un buvard C puis le jeter.
4. i) SAS-1 Plus: Fixer les électrodes sur la partie supérieure des plots que sorte qu’elles soient en
contact avec les ponts d’agarose. Mettre le couvercle sur le gel et les électrodes et faire pression
5 secondes pour assurer un bon contact.
ii) SAS-3: Fixer les électrodes sur les plots que sorte qu’elles soient en contact avec les ponts
d’agarose.
5. Placer 1 applicateur en position supérieure dans l’instrument (SAS-3: encoche 8).
6. Réaliser l’électrophorèse Profil du cholestérol:
i) SAS-1 Plus: Électrophorèse: 90 volts, 30 min., 25°C, 3 dépôts.
Incubation étape 1: 30 min., 30°C
9
Français
ii) SAS-3:
*
Étape
Durée (mm:ss) Température (°C)
Tension Autre
Électrophorèse
Charger échantillon
00:10
21
Vitesse 1
Déposer échantillon
00:10
21
Vitesse 1*
Répétez les étapes Charger échantillon, Déposer échantillon pour un total de 3 dépôts.
Électrophorèse
32:00
25
100
Incuber
30:00
30
(Message: appuyer
sur une touche pour
continuer)
Utiliser Emplacement 2 (Loc 2)
7. Environ 3-4 minutes avant la fin de l’électrophorèse, reconstituer 1 flacon de réactif Profil du
cholestérol en ajoutant 1ml de diluant Profil du cholestérol et bien mélanger.
8. Une fois l’électrophorèse terminée:
SAS-1 Plus: Enlever les électrodes et absorber tout excès de solution REP-Prep ou d’humidité à
proximité du gel.
SAS-3: Enlever les électrodes et le guide d’alignement; absorber tout excès de solution REP-Prep
ou d’humidité à proximité du gel.
9. Verser le contenu du flacon de réactif Profil du cholestérol au milieu du gel. Déposer avec
précaution un film étaleur pour étaler le réactif, en évitant la formation de bulles d’air.
10. Incuber le gel.
11. Enlever le film étaleur puis les deux ponts d’agarose à l’aide de la raclette.
12. Laver le gel dans la solution décolorante pendant 5 minutes.
13. Laver le gel avec de l’eau distillée pendant 5 minutes et sécher entre 50...60°C.
CONTRÔLE QUALITÉ
Le contrôle Profil du cholestérol (Réf. 3218) peut être utilisé afin de vérifier toutes les phases de la
technique et doit être déposé sur chaque plaque. La notice indique les valeurs appropriées du dosage.
INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
Il est recommandé de réaliser chaque évaluation en comparant les gels à un modèle normal obtenu
dans les mêmes conditions pour chaque laboratoire.
Il est possible de lire les gels grâce à un densitomètre en utilisant un filtre de 570nm.
Les décisions concernant le traitement à mettre en œuvre dans les directrices du NCEP se basent
7
principalement sur le taux de cholestérol LDL :
Cholestérol total
Cholestérolémie normale
Cholestérolémie limite
Cholestérolémie élevée
< 200 mg/dl
200-239 mg/dl
> 240 mg/dl
10
Cholestérol HDL
Cholestérol HDL faible
Cholestérol HDL protecteur
< 35 mg/dl
> 60 mg/dl
Triglycérides
Normal
Limite
Élevé
Extrêmement élevé / pancréatite
< 250 mg/dl
250-500 mg/dl
500-1000 mg/dl
> 1000 mg/dl
Cholestérol LDL
Thérapie alimentaire
Sans cardiopathie et < 2 facteurs de risque
Sans cardiopathie et > 2 facteurs de risque
Avec cardiopathie
Taux initial
> 160 mg/dl
> 130 mg/dl
> 100 mg/dl
LDL cible
< 160 mg/dl
< 130 mg/dl
< 100 mg/dl
Pharmacothérapie
Sans cardiopathie et < 2 facteurs de risque
Sans cardiopathie et > 2 facteurs de risque
Avec cardiopathie
> 190 mg/dl
> 160 mg/dl
> 130 mg/dl
< 160 mg/dl
< 130 mg/dl
< 100 mg/dl
Les facteurs de risque pris en compte dans la classification sont: l’âge (hommes: > 45 ans; femmes:
> 55 ans), les antécédents familiaux de cardiopathies ischémiques, le tabagisme, l’hypertension et le
diabète. Si le taux de cholestérol HDL est < 35 mg/dl (risque élevé), il constitue alors un facteur de
risque supplémentaire dans la classification. Au contraire, si le taux de cholestérol HDL est > 60 mg/dl
(protecteur), vous devez diminuer d’un le nombre de facteurs de risque.
VALEURS DE RÉFÉRENCE
Les plages normales suivantes ont été obtenues à partir de 14 échantillons normaux, provenant de
donneurs hommes et femmes ayant un cholestérol total < 200 mg/dl (ces valeurs ne sont données
qu’à titre indicatif):
Fraction protéique
HDL
Lp(a)-C
VLDL
LDL
Moyenne (%)
26,9
1,2
8,2
63,8
Écart-type (intervalle)
11,5 – 42,3
0 – 3,8
0 – 18,2
50,5 – 77,1
11
Français
PERFORMANCES
1) Précision
Bande
HDL
LDL
VLDL
Lp(a)
Intra-analyse (n = 12)
Moyenne
Écart-type
22,3
0,6
67,3
1,1
7,8
0,7
2,6
0,3
CV (%)
2,7
1,6
9,2
10,7
Inter-analyse (n = 36)
Moyenne
Écart-type
22,5
1,0
67,8
1,6
7,1
0,8
2,6
0,4
CV(%)
4,5
2,4
11,1
14,7
Sensibilité
Des dilutions successives d’un échantillon présentant une concentration élevée en cholestérol ont
permis d’établir que la sensibilité du système est équivalente à 4,2mg/dl de cholestérol par bande.
LIMITES
Ce kit ne peut pas être utilisé avec l’appareil SAS-1 Helena BioSciences.
BIBLIOGRAPHIE
1. Barr, D. P. et al. ‘Protein-lipid Relationships in Human Plasma’, Am. J. Med., 1951 ; 11 : 480-493.
2. Miller, G. J. et Miller, N. E. ‘Plasma-High Density-Lipoprotein Concentration and Development of
3. Kannel, W. B. et al ‘Serum Cholesterol, Lipoproteins and the Risk of Coronary Heart Disease’,
Ann. Inter. Med., 1971 ; 74 (1) : 1-12.
4. Gordon, T. et al. ‘High Density Lipoprotein as a Protective Factor Against Coronary Artery
5. Galen, R. S. ‘HDL Cholesterol, How Good a Risk Factor?’, Diag. Med., 1979 ; nov/déc : 39-58.
6. Castelli, W. P. et al. ’HDL Cholesterol and Other Lipids in Coronary Heart Disease - The
Cooperative Lipoprotein Phenotyping Study’, Circulation, 1977 ; 55 (5) : 767-772.
1993.
8. Delalla, O. F. et Gofman, J. W. ‘Ultracentrifugal Analysis of Serum Lipoprotein’, in Methods of
Biochemical Analysis, Vol. 1, D. Glick (éd.), New York, Interscience, 459-478, 1954.
9. Burstein, M. et Scholnick, H. R., ‘Precipitation of Chylomicrons and Very Low density Lipoproteins
From Human Serum With Sodium Lauryl Sulfate’, Life Sci., 1972 ; 11 : 177-184.
10. Cobb, S. A. et Sanders J. L., ‘Enzymic Determination of Cholesterol in Serum Lipoproteins
A., Karon, J., Lippel, K. (Éditeurs), Manual of Laboratory Operations 1983. Deuxième édition, NIH
Publication.
12. Belcher, J. D., McNamara, J. R., Grinstead, G. F., Rifai, N., Warnick, G. R., Bachorik, P. et Frantz
Jr., I. ‘Measurement of Low Density Lipoprotein Cholesterol Concentration’. In : Rifai, N. et
Warnick, G. R (éditeurs) Methods For Clinical Laboratory Measurement of Lipid and Lipoprotein
Risk Factors’, Washington D.C. : AACC Press, 1991 : 75-86.
13. Utermann, G. ‘The Mysteries Of Lipoprotein (a)’, Science, 1989 ; 246 : 904-910.
14. Loscalzo, J., ‘Lipoprotein (a) a Unique Risk Factor For Atherothrombotic Disease’, Arteriosclerosis,
1990 ; 10 : 672-679.
12
(sous presse).
13
Français
ANWENDUNGSBEREICH
Der SAS-1 Cholesterin-Status-12 Kit trennt die Lipoproteine im Serum in einem gepufferten AgaroseGel nach ihrer Ladung auf. Die Lipoprotein-Banden werden dann durch Inkubation mit einem
Cholesterinreagenz sichtbar gemacht, das Cholesterin und Cholesterinester gemäß dem folgenden
Reaktionsablauf quantitativ darstellt:
Cholesterinesterase
Cholesterinester
+
Cholesterin + NAD
+
NADH + H + NBT
Cholesterin + Fettsäure
Cholesterindehydrogenase
Diaphorase
+
Cholesteron + NADH + H
NAD+ + Formazan-Farbstoff
Die Alpha-Bande, die am schnellsten zur Anode wandert, entspricht dem HDL. Die nächste Bande,
Prä-Beta, entspricht dem VLDL und die sich am langsamsten fortbewegende Beta-Bande entspricht
ungefähr dem LDL. Bei einigen Proben kann zwischen den Alpha- und Prä-Beta-Banden eine Bande
auftreten, die als Lp(a)-C-Fraktion quantifiziert werden muss.
Über die Verbindung von HDL-Cholesterin zur koronaren Herzerkrankung (KHK) wurde 1951 von
1
2
3-6
Barr et al. und 1975 von Miller und Miller berichtet. Die Arbeiten von Castelli et al. hoben den
HDL-Cholesterin-Befund als den endgültigen Labortest zum Erkennen eines KHK Risikos hervor.
Klinische Empfehlungen des Ausschuss für das „National Cholesterol Education Program (NCEP)”
weisen klinische Labors an, sowohl das Gesamt-, HDL- und LDL- Cholesterin sowie auch die
Triglyzeride zu untersuchen. LDL, als das bestätigt wegen seines Cholesteringehalts Arteriosklerose
7
auslösende Lipoprotein, ist in den Leitlinien des NCEP die Grundlage für einen Behandlungsbedarf .
8
9
Der Cholesteringehalt von Lipoproteinfraktionen ist durch Ultrazentrifugation , selektive Präzipitation
10
und Elektrophorese auf verschiedenen Trägermedien bestimmt worden. Die allgemein
gebräuchliche Nachweismethode für eine exakte LDL-Quantifizierung und Grundlage der
Referenzmethode wird als ‘Beta-Quantifizierung’ bezeichnet, das Beta bezieht sich auf die
elektrophoretische Bezeichnung für LDL. Die Beta-Quantifizierungsmethode besteht aus einer
11,12
Kombination aus Ultrazentrifugation und chemischer Präzipitation . Sie ergibt ein so genanntes
13,14
‘broad-cut’ LDL, das das Lp(a)-C Lipoprotein mit einschließt. Der NCEP-Ausschuss kam zu dem
Schluss, dass alternative Methoden für die Routinediagnostik notwenig sind, die vorzugsweise das LDL
15
zur Cholesterinquantifizierung direkt auftrennt . Eine dieser Methoden zur direkten Auftrennung von
LDL ist die Elektrophorese. Der SAS-1-Cholesterin-Status von Helena BioSciences zeigt im Vergleich
mit Referenzmethoden eine gute Auftrennung der Haupt-Lipoprotein-Klassen mit einer genauen und
korrekten Quantifizierung des HDL-, LDL-, VLDL- und Lp(a)-Cholesterins.
WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN
Alle Reagenzien sind nur zur in-vitro Diagnostik bestimmt. Nicht einnehmen oder mit dem Mund
pipettieren. Beim Umgang mit den Kit-Komponenten ist das Tragen von Handschuhen erforderlich.
Siehe Sicherheitsdatenblatt mit den Gefahrenhinweisen und Sicherheitsvorschlägen sowie
Informationen zur Entsorgung.
14
SAS-1 CHOLESTERIN-STATUS-12
INHALT
1. SAS-1 Cholesterin-Status Gel (x10)
Enthält Agarose in einem Barbitalpuffer mit Natriumazid als Konservierungsmittel. Das Gel ist
gebrauchsfertig verpackt.
2. Cholesterin-Status Reagenz (10x 1ml)
Enthält die wie im obigen Reaktionsablauf gezeigten und zur Identifikation von Cholesterin
benötigten Bestandteile.
Siehe SCHRITT-FÜR-SCHRITT METHODE für die
Rekonstitutionsanleitung.
3. Cholesterin-Status Verdünnungspuffer (1x 27ml)
Enthält Triton X-100 und Konservierungsstoff. Der Verdünnungspuffer ist gebrauchsfertig
verpackt.
4. Weitere Kit-Komponenten
Jedes Kit enthält eine Methodenbeschreibung sowie ausreichend Blotter C und
Reagenzverteilerfolien für 10 Gele.
LAGERUNG UND STABILITÄT
1. SAS-1 Cholesterin-Status Gel
Gele sollten bei 15...30°C gelagert werden und sind bis zum aufgedruckten Verfallsdatum stabil.
NICHT IM KÜHLSCHRANK ODER TIEFKÜHLSCHRANK AUFBEWAHREN! Der Zustand des
Gels kann sich verschlechtern. Dafür gibt es folgende Merkmale: 1) Kristallisation weist auf
vorangegangenes Einfrieren hin, 2) Risse und Ablösen weisen auf ein Austrocknen des Gels hin, und
3) sichtbare Kontamination der Agarose durch Bakterien oder Pilze.
2. Cholesterin-Status Reagenz
Die Reagenzfläschchen sollten bei 2...6°C gelagert werden und sind bis zum aufgedruckten
Verfallsdatum stabil. Rekonstituiertes Reagenz ist bei einer Temperatur von 2...6°C für 6 Stunden
stabil.
3. Cholesterin-Status Verdünnungspuffer
Der Verdünnungspuffer sollte bei 2...6°C gelagert werden und ist bis zum aufgedruckten
Verfallsdatum stabil. Kontamination vermeiden. Trübung oder Schwebstoffe können auf einen
Verfall hinweisen.
NICHT MITGELIEFERTES, ABER BENÖTIGTES MATERIAL
Kat. Nr. 210200 Applikatorkämme (1 x 10)
Kat. Nr. 210300 Applikatorkämme (5 x 10)
Kat. Nr. 210100 Einweg-Probengefäße (100)
Kat. Nr. 3100 REP-Prep-Lösung
Trockenschrank mit Umluft und einer Temperaturleistung von 50...60°C.
Inkubator mit einer Temperaturleistung von 30°C.
Entfärbelösung: 50ml Eisessig mit 950ml dest. Wasser mischen. In einer fest verschlossenen Flasche
aufbewahren.
Destilliertes Wasser
15
Deutsch
PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNG
Frisches Serum oder EDTA-Plasma ist das Untersuchungsmaterial der Wahl. Proben können im
Kühlschrank bei 2...6°C bis zu 4 Tagen gelagert werden. NICHT EINFRIEREN.
Patientenvorbereitung:
1) Ist das HDL-Cholesterin der einzige zu bestimmende Parameter muss der Patient nicht nüchtern
sein. Sollen noch andere Lipidwerte bestimmt werden, sollte der Patient vor der Blutentnahme
12 -14 Stunden nichts zu sich genommen haben.
2) Falls möglich für 3-4 Wochen alle Medikamente absetzen.
3) Der Patient sollte sein Gewicht halten und für mindestens 1 Woche ganz normal essen.
4) Nach einem Myokardinfarkt oder ähnlichen traumatischen Ereignis 4-8 Wochen warten.
Störfaktoren:
1) Heparintherapie kann die Wanderung der Lipoproteine, ganz besonders der Beta-Lipoproteine,
verändern.
SCHRITT-FÜR-SCHRITT METHODE
1. 35µl Probe in die entsprechende Vertiefung der Probenplatte oder Einweg- Probengefäße
pipettieren.
i) SAS-1 Plus Benutzer: SAS-1 Probenplatte verwenden. Die Probenplatte vorsichtig auf den
Applikatoreinschub stellen. Darauf achten, dass die Platte in Position fest eingerastet ist.
ii) SAS-3 Benutzer: SPIFE / SAS-3 Probenplatte verwenden. Mit den Haltestiften der Probenbasis die
Probenplatte vorsichtig einrichten. Sicherstellen, dass die Platte richtig eingesetzt ist.
2. Das Gel aus der Verpackung nehmen und:
i) SAS-1 Plus Benutzer: 400µL REP-Prep-Lösung auf die Kühlplatte verteilen. Das Gel mit der
Agaroseseite nach oben auf die Kühlplatte legen, positive und negative Seite an den passenden
Elektrodenhaltern ausrichten. Darauf achten, dass unter dem Gel keine Luftblasen sind.
ii) SAS-3 Benutzer: Die Führungsschiene auf die Stifte setzen und 400µl REP Prep auf die
Kammermitte verteilen. Das Gel mit der Agaroseseite nach oben in die Kammer legen und mit
Hilfe der Schiene die positive und negative Seite an den passenden Elektrodenhaltern ausrichten.
Darauf achten, dass unter dem Gel keine Luftblasen sind.
3. Die Geloberfläche mit einem Blotter C blotten, Blotter verwerfen.
4. i) SAS-1 Plus Benutzer: Die Elektroden oben auf den Elektrodenhaltern befestigen, damit sie mit
den Gelblöcken in Kontakt sind. Die Abdeckung über Gel und Elektroden geben und für einen
guten Kontakt 5 Sekunden lang fest aufdrücken.
ii) SAS-3 Benutzer: Die Elektroden auf den Elektrodenhaltern befestigen, damit sie mit den
Gelblöcken in Kontakt stehen.
5. 1 Applikatorkamm-Halterung in der oberen Position auf dem Gerät anbringen, (SAS-3 Benutzer:
Schlitz 8).
6. Die Cholesterin-Status Elektrophorese durchführen:
i) SAS-1 Plus Benutzer: Elektrophorese: 90 Volt, 30 Min., 25°C, 3 Applikationen
Inkubationsschritt 1: 30 Min., 30°C.
16
ii) SAS-3 Benutzer:
*
Schritt
Dauer (mm:ss) Temperatur (°C) Spannung Andere
Elektrophorese
Probenaufnahme 00:10
21
Geschwindigkeit 1
Probenapplikation 00:10
21
Geschwindigkeit 1
Die Schritte ‘Probenaufnahme, Probenapplikation’ für insgesamt 3 Applikationen wiederholen.
Elektrophorese
32:00
25
100
Inkubieren
30:00
30
(Bildschirmaufforderung:
zum Schließen Taste drücken.
Platz 2 verwenden
7. Ungefähr 3-4 Minuten vor Elektrophorese-Ende 1 Fläschchen Cholesterin-Status-Reagenz durch
Zugabe von 1ml Cholesterin-Status-Verdünnungspuffer rekonstituieren und gut mischen.
8. Nach der Elektrophorese:
SAS-1 Plus Benutzer: Elektroden und jedweden Überschuss an REP-Prep oder Feuchtigkeit um das
Gel herum entfernen.
SAS-3 Benutzer: Elektroden, Führungsschiene und jedweden Überschuss an REP-Prep oder
Feuchtigkeit um das Gel herum entfernen.
9. Den Inhalt des Fläschchens mit Cholesterin-Status-Reagenz entlang der Gelmitte gießen.
Vorsichtig ein Stück Reagenzverteilerfolie auflegen, um das Reagenz zu verteilen, Luftblasen
vermeiden.
10. Gel inkubieren.
11. Reagenzverteilerfolie entfernen und beide Gel-Blöcke mit Hilfe des Gelblock-Entferners
entfernen.
12. Das Gel 5 Minuten in Entfärberlösung waschen.
13. Das Gel mit destilliertem Wasser 5 Minuten waschen und bei 50...60°C trocknen.
QUALITÄTSKONTROLLE
Cholesterin-Status-Kontrolle (Kat. Nr. 3218) überprüft alle Phasen der Methode und sollte bei jedem
Lauf mitgeführt werden. Siehe Packungsbeilage für die entsprechenden Testergebnisse.
AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE
Es wird empfohlen, die Auswertung der Gele gegen Normalwerte vorzunehmen, die für diesen Test
in jedem einzelnen Labor ermittelt worden sind.
Gele können mit einem 570nm Filter densitometrisch analysiert werden.
Die Therapieentscheidungen nach den NCEP-Leitlinien beruhen in erster Linie auf die LDL7
Cholesterinwerte :
Gesamtcholesterin
Normalwert Cholesterin im Blut
Hohes Cholesterin im Blut - Grenzwert
Hohes Cholesterin im Blut
< 200 mg/dL
200-239 mg/dL
< 240 mg/dL
17
Deutsch
HDL-Cholesterin
Niedriges HDL-Cholesterin
Schützendes HDL-Cholesterin
< 35 mg/dL
> 60 mg/dL
Triglyzeride
Normalwert
Grenzwert
Erhöht
Stark erhöht/Pankreatitis
< 250 mg/dL
250-500 mg/dL
500-1000 mg/dL
> 1000 mg/dL
LDL-Cholesterin
Diättherapie
Ohne KHK und < 2 Risikofaktoren
Ohne KHK und > 2 Risikofaktoren
Mit KHK
Ausgangswert
> 160 mg/dl
> 130 mg/dl
>100 mg/dl
LDL-Zielwert
< 160 mg/dl
< 130 mg/dl
< 100 mg/dl
Medikamententherapie
Ohne KHK und < 2 Risikofaktoren
Ohne KHK und > 2 Risikofaktoren
Mit KHK
> 190 mg/dl
> 160 mg/dl
>130 mg/dl
< 160 mg/dl
< 130 mg/dl
< 100 mg/dl
Die Risikofaktoren im obigen Klassifikationsschema sind Alter (Männer > 45 Jahren, Frauen > 55
Jahren), frühzeitige KHK in der Familienanamnese, Rauchen, Bluthochdruck und Diabetes.
HDL-Cholesterin gilt als hohes Risiko < 35 mg/dl und wird bei der Klassifikation als Risikofaktor mit
einbezogen. Ein HDL-Cholesterin von >60 mg/dl gilt als schützend und verringert die Gesamtzahl der
Risikofaktoren um die Zahl 1.
REFERENZWERTE
Die Normalbereiche wurden anhand von 14 Proben von gesunden, männlichen und weiblichen
Spendern mit einem Gesamtcholesterin von <200mg/dL erstellt (hierbei handelt es sich lediglich um
Richtwerte):
Proteinfraktion
HDL
Lp(a)-C
VLDL
LDL
Mittelwert (%)
26,9
1,2
8,2
63,8
18
+ 2s-Bereich
11,5-42,3
0-3,8
0-18,2
50,5-77,1
LEISTUNGSEIGENSCHAFTEN
1) Präzision
Bande
HDL
LDL
VLDL
Lp(a)
Im-Lauf (n = 12)
Mittelwert
S
22,3
0,6
67,3
1,1
7,8
0,7
2,6
0,3
VK (%)
2,7
1,6
9,2
10,7
Zwischen dem Lauf (n = 36)
Mittelwert
S
VK(%)
22,5
1,0
4,5
67,8
1,6
2,4
7,1
0,8
11,1
2,6
0,4
14,7
Empfindlichkeit
Verdünnungsreihen von Proben mit erhöhtem Cholesterin zeigten, dass die Empfindlichkeit des
Systems 4,2 mg/dL Cholesterin pro Bande entspricht.
EINSCHRÄNKUNGEN
Dieses Kit kann nicht mit dem Helena BioSciences SAS-1-System verwendet werden.
LITERATUR
Inter. Med., 1971 ; 74 (1) : 1-12
6. Castelli, W.P. et al.’HDL Cholesterol and Other Lipids in Coronary Heart Disease - The
Cooperative Lipoprotein Phenotyping Study’ Circulation, 1977 ; 55 (5) : 767-772.
1993.
Publication.
14. Loscalzo, J., ‘Lipoprotein (a) a Unique Risk Factor For Atherothrombotic Disease’, Arteriosclerosis,
1990; 10 : 672-679.
19
Deutsch
(In Press).
20
PROFILO 12 DEL COLESTEROLO SAS-1
PRINCIPIO
Il kit per il profilo 12 del colesterolo SAS-1 separa le lipoproteine del siero a seconda della loro carica
elettrica in un gel di agarosio tamponato. Le bande lipoproteiche sono poi visualizzate mediante
incubazione con un reagente per colesterolo che visualizza quantitativamente il colesterolo e gli esteri
del colesterolo in base alla sequenza di reazione riportata di seguito:
Estere di colesterolo
Colesterolo + NAD+
NADH + H+ + NBT
Colesterolo esterasi
Colesterolo deidrogenasi
Diaforasi
Colesterolo + Acido grasso
Colestenone + +
NAD+ + Colorante Formazan
La banda alfa che migra molto velocemente verso l’anodo corrisponde all’HDL. La banda successiva
pre-beta corrisponde al VLDL e la banda beta che si sposta più lentamente corrisponde all’incirca
all’LDL. É possibile che compaia una banda tra la banda alfa e la pre-beta in alcuni campioni ma non in
tutti - questa banda dovrebbe essere quantificata come la frazione Lp(a)-C.
1
La relazione tra il colesterolo HDL e le coronaropatie (CHD) è stata riferita da Barr et al.. in 1951 e
2
Miller e Miller in 1975 . Il lavoro di Castelli et al.3-6 si è concentrato sulla valutazione del colesterolo
HDL come test di laboratorio definitivo nella determinazione del rischio di CHD. Le raccomandazioni
cliniche dei medici aderenti al National Cholesterol Education Program (NCEP) diedero istruzioni ai
laboratori clinici di eseguire misure del colesterolo totale, HDL e LDL e dei trigliceridi. L’ LDL, come
lipoproteina aterogenica validata sulla base del proprio tenore di colesterolo, è l’elemento
7
fondamentale per le decisioni terapeutiche nelle linee guida NCEP .
Il tenore di colesterolo nelle frazioni lipoproteiche è stato determinato mediante ultracentrifugazione8,
9
10
precipitazione selettiva ed elettroforesi su vari mezzi . Il tradizionale metodo di ricerca per l’esatta
quantificazione dell’LDL e base del metodo di riferimento è denominato “beta-quantificazione”, dove
con beta si indica la posizione elettroforetica per LDL. Il metodo della beta-quantificazione prevede
11,12
una combinazione di ultracentrifugazione e precipitazione chimica . Con il metodo della beta13,14
quantificazione si ottiene un cosiddetto LDL ‘broad-cut’, che comprende la lipoproteina Lp(a)-C .
Le commissioni NCEP hanno concluso che, per l’uso diagnostico di routine, sono necessari metodi
alternativi capaci preferibilmente di separare in modo diretto l’LDL per la quantificazione del
15
colesterolo . Un metodo di questo tipo per la separazione diretta dell’LDL è l’elettroforesi. Rispetto
ai metodi di riferimento, il metodo Profilo del colesterolo SAS 1 di Helena BioSciences mette in
evidenza buone separazioni tra le principali classi lipoproteiche, con una precisa ed accurata
quantificazione di HDL, LDL, VLDL e lipoproteina Lp(a).
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
Tutti i reagenti sono destinati esclusivamente alla diagnostica in vitro. Non ingerire né pipettare con la
bocca i componenti del kit. Pulizia e disinfezione al termine di ogni utilizzo Per le indicazioni relative
ai rischi e alla sicurezza e le informazioni sullo smaltimento, fare riferimento alle schede tecniche dei
prodotti.
21
Italiano
COMPOSIZIONE
1. Gel per profilo del colesterolo SAS-1 (x10)
Contiene agarosio in un tampone barbital con sodio azide come conservante. Il gel è pronto
all’uso.
2. Reagente per il profilo del colesterolo (10x 1ml)
Contiene i composti necessari all’identificazione del colesterolo secondo la sequenza di reazioni
sopra illustrata. Ved. il paragrafo PROCEDURA per le istruzioni di ricostituzione.
3. Diluente per il profilo del colesterolo (1x 27ml)
Contiene Triton X-100 e conservante. Il diluente è pronto all’uso così come viene fornito.
4. Altri componenti del kit
Ciascun kit contiene un foglio di istruzioni, una quantità sufficiente di pellicola di distribuzione del
reagente ed un blotter C per completare 10 gel.
CONSERVAZIONE E STABILITÀ
1. Gel per profilo del colesterolo SAS-1
I gel devono essere conservati a 15...30°C e sono stabili fino alla data di scadenza riportata sulla
confezione. NON REFRIGERARE NÉ CONGELARE. Il deterioramento del gel può essere
indicato da 1) formazioni cristalline per effetto di congelamento, 2) screpolature e fessurazione per
effetto di essiccamento oppure, 3) contaminazione visibile dell’agarosio causata da batteri o funghi.
2. Reagente per il profilo del colesterolo
I flaconi di reagente devono essere conservati a 2...6°C e sono stabili fino alla data di scadenza
indicata sull’etichetta. Il reagente ricostituito è stabile per 6 ore a 2...6°C.
3. Diluente per il profilo del colesterolo
Il diluente deve essere conservato a 2...6°C ed è stabile fino alla data di scadenza riportata
sull’etichetta. Evitare la contaminazione. Contaminazione particellare o torbidezza possono
indicare deterioramento.
MATERIALI NECESSARI MA NON IN DOTAZIONE
Cod. N. 210200 Lamelle di applicazione (1 x 10)
Cod. N. 210300 Lamelle di applicazione (5 x 10)
Cod. N. 210100 Coppette per campioni monouso (100)
Cod. N. 3100 Preparazione REP
Forno di essiccazione ad aria forzata con temperature di 50...60°C.
Incubatrice prevista per 30°C.
Soluzione decolorante: Mescolare 50ml di acido glaciale acetico e 950ml di acqua distillata. Conservare
in una bottiglia tappata ermeticamente.
Acqua distillata
RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI
Il campione ideale è costituito da siero fresco o plasma trattato con EDTA. I campioni possono essere
refrigerati a 2...6°C fino a 4 giorni. NON CONGELARE.
22
Preparazione del paziente:
1) Se l’unico parametro da stabilire è quello del colesterolo HDL, non è necessario che il paziente sia
a digiuno. Qualora si debbano determinare altri valori lipidici, allora è necessario che il paziente
rimanga a digiuno per un periodo di 12 -14 ore prima del prelievo.
2) Se possibile, sospendere tutti i farmaci per 3-4 settimane.
3) Il paziente deve mantenere un peso stabile ed assumere una dieta normale per almeno una
settimana.
4) In caso di infarto miocardico o episodio traumatico simile, attendere 4-8 settimane.
Fattori d’interferenza:
1) La terapia eparinica può causare alterazioni nella migrazione delle lipoproteine, specialmente nel
caso della lipoproteina beta.
PROCEDURA
1. Pipettare 35µl di campione nel pozzetto appropriato del vassoio per campioni o nelle coppette per
campioni monouso.
i) Per gli utilizzatori di SAS-1: Utilizzare il vassoio per campioni SAS-1. Collocare con cautela il
vassoio per campioni sul cassetto di applicazione. Assicurarsi che il vassoio sia saldamente inserito
in posizione.
ii) Per gli utilizzatori di SAS-3: Utilizzare il vassoio per campioni SPIFE / SAS-3. Collocare con cautela
il vassoio per campioni utilizzando i fermi di posizionamento della base di campioni. Assicurarsi
che il vassoio sia posizionato saldamente.
2. Rimuovere il gel dalla confezione e:
i) Per gli utilizzatori di SAS-1: Distribuire 400µL di preparazione REP sul dissipatore di calore.
Collocare il gel sul dissipatore di calore con l’agarosio rivolto verso l’alto, allineando i lati positivo
e negativo rispetto ai corrispondenti puntali degli elettrodi, prestando attenzione ad evitare bolle
d’aria sotto il gel.
ii) Per gli utilizzatori di SAS-3: Collocare la guida di allineamento sui fermi e distribuire 400µL di
preparazione REP sul centro della camera. Collocare il gel nella camera con l’agarosio rivolto verso
l’alto; utilizzando la guida, allineare i lati positivo e negativo rispetto ai corrispondenti puntali degli
elettrodi, prestando attenzione ad evitare bolle d’aria sotto il gel.
3. Asciugare la superficie del gel con un blotter C, quindi gettarlo.
4. i) Per gli utilizzatori di SAS-1: fissare gli elettrodi sul lato superiore dei puntali, in modo tale che
entrino a contatto con i blocchi di gel. Sistemare il coperchio sul gel e sugli elettrodi e premere con
decisione per 5 secondi per consentire il contatto.
ii) Per gli utilizzatori di SAS-3: fissare gli elettrodi all’esterno dei puntali, in modo tale che entrino
a contatto con i blocchi di gel.
5. Collocare un gruppo di lamelle di applicazione nella parte superiore dello strumento (per gli
utilizzatori di SAS-3: slot 8).
6. Eseguire l’elettroforesi per il profilo del colesterolo:
i) Per gli utilizzatori di SAS-1: Elettroforesi: 90 Volt per 30 minuti, 25°C, 3 applicazioni
Fase di incubazione 1: 30 minuti, 30°C
23
Italiano
ii)
Per gli utilizzatori di SAS-3:
Fase
Tempo (mm:ss) Temperatura (°C) Tensione Altro
Elettroforesi
Caricare campione
00:10
21
Velocità 1
Applicare campione 00:10
21
Velocità 1*
Ripetere le fasi “Carica campione” e “Applica campione” per un totale di 3 applicazioni.
Elettroforesi
32:00
25
100
(Prompt: Premere il
Incubare
30:00
30
tasto per proseguire)
* Utilizzare l’impostazione 2
7. Circa 3-4 minuti prima della conclusione dell’elettroforesi, ricostituire un flacone di reagente per il
profilo del colesterolo aggiungendo 1ml di diluente per il profilo del colesterolo e mescolando
bene.
8. In seguito all’elettroforesi:
Per gli utilizzatori di SAS-1 Plus: togliere gli elettrodi e qualsiasi eccesso di REP Prep o umidità
intorno al gel.
Per gli utilizzatori di SAS-3: togliere gli elettrodi, la guida di allineamento e qualsiasi eccesso di REP
Prep o umidità intorno al gel.
9. Versare il contenuto del flacone di reagente per il profilo del colesterolo lungo la parte centrale del
gel. Applicare un pezzo di pellicola di distribuzione del reagente per distribuire il reagente,
evitando la formazione di bolle d’aria.
10. Incubare il gel.
11. Rimuovere la pellicola di distribuzione del reagente e rimuovere entrambi i blocchi di gel
utilizzando il Gel Block Remover.
12. Sciacquare il gel nella soluzione decolorante per 5 minuti.
13. Sciacquare il gel con acqua distillata per 5 minuti e asciugare a 5...50°C.
CONTROLLO QUALITÀ
Controllo del profilo del colesterolo (Cat. N. 3218) può essere utilizzato per verificare tutte le fasi della
procedura e deve essere impiegato su ogni piastra. Per maggiori informazioni sui valori attesi, fare
riferimento al foglietto illustrativo presente nella confezione.
INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Si raccomanda di effettuare qualsiasi valutazione dei gel sulla base dei valori normali prodotti per questo
esame in ogni singolo laboratorio.
I gel possono essere analizzati mediante densitometria utilizzando un filtro da 570nm.
24
Secondo le linee guida del NCEP, la decisione di dare o meno inizio ad un trattamento dipende
7
principalmente dai livelli di colesterolo LDL :
Colesterolo totale
Colesterolo ematico consigliato
Colesterolo ematico limite-alto
Colesterolo ematico alto
<200 mg/dL
200-239 mg/dL
>240 mg/dL
Colesterolo HDL
Colesterolo HDL basso
Colesterolo HDL protettivo
<35 mg/dL
>60 mg/dL
Trigliceridi
Consigliati
Limite
Elevati
Molto elevati/pancreatite
<250 mg/dL
250-500 mg/dL
500-1000 mg/dL
>1000 mg/dL
Colesterolo LDL
Terapia alimentare
Senza CHD e <2 fattori di rischio
Senza CHD e > 2 fattori di rischio
Con CHD
Livello di inizio
>160 mg/dL
>130 mg/dL
>100 mg/dL
Obiettivo LDL
<160 mg/dL
<130 mg/dL
<100 mg/dL
Terapia farmacologica
Senza CHD e <2 fattori di rischio
Senza CHD e > 2 fattori di rischio
Con CHD
>190 mg/dL
>160 mg/dL
>130 mg/dL
<160 mg/dL
<130 mg/dL
<100 mg/dL
I fattori di rischio considerati nello schema di classificazione sono l’età (uomini >45 anni, donne >55
anni), l’anamnesi familiare di CHD precoci, il fumo, l’ipertensione e il diabete. Il colesterolo HDL viene
considerato un rischio elevato se <35 mg/dL e viene ritenuto un fattore di rischio nella classificazione.
Il colesterolo HDL >60 mg/dL viene considerato protettivo e sottrae un punto da numero totale di
fattori di rischio.
VALORI DI RIFERIMENTO
Con l’impiego di 14 campioni normali da donatori maschio e femmina con un colesterolo totale
<200mg/dL, sono stati ottenuti i range normali di seguito indicati (sono riportati solo a titolo
indicativo):
Frazioni proteiche
HDL
Lp(a)-C
VLDL
LDL
Media (%)
26.9
1.2
8.2
63.8
+ 2SD (range)
11.5 - 42.3
0 - 3.8
0-18.2
50.5 - 77.1
25
Italiano
CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI
1) Precisione
Banda
HDL
LDL
VLDL
Lp(a)
Entro la serie (n = 12)
Media (%)
SD
22.3
0.6
67.3
1.1
7.8
0.7
2.6
0.3
Tra la serie (n =36)
Media (%)
SD
22.5
1.0
67.8
1.6
7.1
0.8
2.6
0.4
CV (%)
2.7
1.6
9.2
10.7
CV (%)
4.5
2.4
11.1
14.7
Sensibilità.
Diluizioni seriali di un campione con elevata concentrazione di colesterolo hanno mostrato che la
sensibilità del sistema equivale a 4,2 mg/dl di colesterolo per banda.
LIMITI
Questo kit non può essere usato sul sistema Helena BioSciences SAS-1.
BIBLIOGRAFIA
Inter. Med., 1971 ; 74 (1) : 1-12
6. Castelli, W.P. et al.’HDL Cholesterol and Other Lipids in Coronary Heart Disease - The
Cooperative Lipoprotein Phenotyping Study’ Circulation, 1977 ; 55 (5) : 767-772.
1993.
Publication.
26
(In Press).
27
Italiano
USO PREVISTO
El kit SAS-1 Nivel de Colesterol-12 separa las lipoproteínas del suero según su carga en un gel de
agarosa tamponado. Las bandas de lipoproteínas se visualizan después mediante la incubación con un
reactivo al colesterol que detecta en términos cuantitativos el colesterol y los ésteres del colesterol de
acuerdo con la siguiente secuencia de reacciones:
Éster del colesterol
+
Colesterol + NAD
+
NADH + H + NBT
Esterasa del colesterol
Colesterol deshidrogenasa
Diaforasa
Colesterol + Ácido Graso
+
Colestenona + NADH + H
+
NAD + Tinte formazan
La banda alfa, que es la que migra más rápidamente hacia el ánodo, se corresponde a la lipoproteína
HDL. La siguiente banda, la banda pre-beta, se corresponde a la lipoproteína VLDL y la banda beta
más lenta se corresponde aproximadamente a la lipoproteína LDL. En algunas muestras (no en todas),
puede aparecer una banda entre las bandas alfa y pre-beta – esto debería cuantificarse como la fracción
Lp(a)-C.
La relación del Colesterol HDL con la enfermedad coronaria cardiaca (CHD) fue constatada por Barr
1
2
et alter en 1951 y por Miller and Miller en 1975 . La obra de Castelli et alter 3–6 se centró en
demostrar que la valoración del Colesterol HDL es la prueba de laboratorio definitiva para determinar
el riesgo de CHD. Las recomendaciones clínicas del Programa Nacional de Educación sobre el
Colesterol (NCEP) sugieren que los laboratorios clínicos midan los niveles de colesterol totales, HDL
y LDL y los triglicéridos. LDL, la lipoproteína aterogénica validada basada en su contenido en
colesterol, es la base principal para la toma de decisiones sobre los tratamientos según las directrices
del NCEP.
El contenido de colesterol en las fracciones de lipoproteína ha sido determinado mediante
8
9
10
ultracentrifugado , precipitación selectiva y electroforesis sobre varios medios . El método de
investigación común para lograr una cuantificación LDL precisa y la base para el método de referencia
se denominan “cuantificación-beta” (beta hace referencia al término electroforético de LDL).
El método de cuantificación-beta conlleva una combinación de ultracentrifugado y de precipitación
11,12
química . El método de cuantificación-beta proporciona la llamada LDL de “rango amplio”, que
13,14
incluye lipoproteínas Lp(a)-C . Los paneles NCEP revelaron que se necesitan métodos alternativos
para los diagnósticos rutinarios que, preferiblemente, separan directamente las lipoproteínas LDL para
15
la cuantificación del colesterol . La electroforesis es uno de esos métodos que separan directamente
las lipoproteínas LDL. En comparación con los métodos de referencia, el método SAS-1 Nivel de
Colesterol de Helena BioSciences consigue una buena separación de las clases principales de
lipoproteínas y una cuantificación precisa de los tipos de colesterol HDL, LDL, VLDL y Lp(a).
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Todos los reactivos son exclusivamente para uso diagnóstico in-vitro. No ingerir ni chupar con la boca
ningún componente del kit. Usar guantes para manejar todos los componentes del kit. Consultar la
hoja con los datos de seguridad del producto acerca de los riesgos de los componentes, avisos de
seguridad y consejos para su eliminación.
28
SAS-1 NIVEL DE COLESTEROL-12
COMPOSICIÓN
1. Gel SAS-1 Nivel de Colesterol (x10)
Contiene agarosa en un tampón de barbital con azida de sodio como conservante. El gel viene
envasado listo para usar.
2. Reactivo de Nivel de Colesterol (10x 1ml)
Contiene los compuestos necesarios para identificar el Colesterol de acuerdo con la secuencia de
reacción que ya hemos mostrado anteriormente. Véanse las instrucciones de reconstitución en el
PROCEDIMIENTO PASO A PASO.
3. Disolvente de Nivel de Colesterol (1x 27ml)
Contiene Triton X-100 y conservante. El diluyente viene envasado listo para usar.
4. Otros componentes del kit
Cada kit contiene una hoja de instrucciones y suficientes extendedores de reactivos y secantes C
para completar 10 geles.
ALMACENAMIENTO Y PERÍODO DE VALIDEZ
1. Gel SAS-1 Nivel de Colesterol
Los geles han de almacenarse a 15...30°C y permanecen estables hasta la fecha de caducidad
indicada en el envase. NO REFRIGERAR NI CONGELAR. El deterioro del gel puede estar
indicado por: 1) apariencia cristalina, indicativo de que el gel ha sido congelado, 2) agrietamiento y
descamación, indicativo del resecamiento del gel, ó 3) contaminación visible de la agarosa por
fuentes bacterianas o micóticas.
2. Reactivo de Nivel de Colesterol
Los viales de reactivos deben almacenarse a 2...6°C y permanecen estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta. El reactivo reconstituido permanece estable durante 6 horas a
2...6°C.
3. Disolvente de Nivel de Colesterol
El diluyente debe guardarse a 2...6°C y permanece estable hasta la fecha de caducidad indicada en
la etiqueta. Evitar la contaminación. La aparición de turbidez o de partículas puede ser indicio de
deterioro.
ARTÍCULOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
Nº Cat. 210200 Aplicadores (1 x 10)
Nº Cat. 210300 Aplicadores (5 x 10)
Nº Cat. 210100 Vasos de recogida de muestras desechables (100)
Nº Cat. 3100 REP Prep
Horno de secado con aire a presión con capacidad para alcanzar 50...60°C.
Incubadora capaz de alcanzar 30°C.
Solución decolorante: Mezclar 50ml de ácido acético cristalizado con 950ml de agua destilada. Guardar
en un frasco herméticamente cerrado.
Agua destilada
RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS
Se ha de elegir como muestra suero recién recogido o plasma anticoagulado con EDTA. Las muestras
se pueden conservar refrigeradas a 2...6°C hasta 4 días. NO CONGELAR.
29
Español
Preparación del paciente:
1) Si el único parámetro que hay que determinar es el Colesterol HDL, no es necesario que el
paciente ayune. Si hay que determinar otros lípidos, el paciente debe ayunar de 12 a 14 horas
antes de la toma de muestras.
2) Suspender los medicamentos durante 3-4 semanas si es posible.
3) El paciente debería mantener un peso estable y llevar una dieta normal durante al menos 1 semana.
4) Si ha padecido un infarto de miocardio o un episodio similar, esperar de 4 a 8 semanas.
Factores problemáticos:
1) Los tratamientos con heparina pueden producir alteraciones en la migración de las lipoproteínas,
particularmente en el caso de las lipoproteínas beta.
PROCEDIMIENTO PASO A PASO
1. Con una pipeta, introducir 35 µl de la muestra en la cavidad correspondiente de la bandeja de
muestras o en vasos de recogida de muestras desechables.
i) Usuarios de SAS-1 Plus: Utilizar la bandeja de muestras de SAS-1. Colocar cuidadosamente la
bandeja con la muestra en la gaveta del aplicador. Asegurarse de que la bandeja está firmemente
introducida en su posición.
ii) Usuarios de SAS-3: Utilizar la bandeja de muestras de SPIFE / SAS-3. Colocar cuidadosamente la
bandeja con la muestra utilizando los pasadores de localización de la base de la muestra.
Asegurarse de que la bandeja está en una posición segura.
2. Sacar el gel del envase y:
i) Usuarios de SAS-1 Plus: pipetear 400µL de REP Prep en el disipador térmico. Colocar el gel en el
disipador térmico, con el lado de agarosa hacia arriba, alineando los lados positivo y negativo con
los bordes, teniendo cuidado de evitar las burbujas aéreas debajo del gel.
ii) Usuarios de SAS-3: colocar la guía de alineación en los pasadores y pipetear 400µL de REP Prep
en el centro de la cámara. Colocar el gel en la cámara con la agarosa hacia arriba, utilizar la guía
para alinear los lados positivo y negativo con los bordes, teniendo cuidado de evitar las burbujas
aéreas debajo del gel
3. Secar la superficie del gel con un secante C y luego desechar el secante.
4. i) Usuarios de SAS-1 Plus: conectar los electrodos a la parte superior de los bordes, de forma que
estén en contacto con los bloques de gel. Colocar la cubierta sobre el gel y los electrodos,
presionar con firmeza durante 5 segundos para asegurar un buen contacto.
ii) Usuarios de SAS-3: conectar los electrodos a los bordes, de forma que estén en contacto con
los bloques de gel.
5. Colocar 1 unidad del aplicador en la posición del instrumento (usuarios de SAS-3: ranura 8).
6. Realizar la electroforesis del Nivel de colesterol:
i) Usuarios de SAS-1 Plus: Electroforesis: 90 voltios, 30 min., 25°C, 3 aplicaciones
Incubation step 1 (Paso de incubación 1) 30 min., 30°C
30
ii)
*
Usuarios de SAS-3:
Paso
Hora (mm:ss) Temperatura (ºC) Tensión Otros
Electroforesis
Cargar muestra
00:10
21
Velocidad 1
Aplicar muestra
00:10
21
Velocidad 1*
Repetir pasos ‘cargar muestra, aplicar muestra’ para un total de 3 aplicaciones.
Electroforesis
32:00
25
100
(Mensaje: Pulsar una tecla
Incubar
30:00
30
para cerrar)
Utilizar posición 2
7. Aproximadamente 3-4 minutos antes del final de la electroforesis, reconstituir un vial de reactivo
de nivel de colesterol añadiendo 1 ml de diluyente de nivel de colesterol y mezclar bien.
8. Finalizada la electroforesis:
i) Usuarios de SAS-1 Plus: retirar los electrodos y cualquier exceso de REP Prep o humedad
alrededor del gel.
ii) Usuarios de SAS-3: retirar los electrodos, la guía de alineación y cualquier exceso de REP Prep o
humedad alrededor del gel.
9. Verter el contenido del vial de Reactivos del nivel de colesterol en el centro del gel. Aplicar con
cuidado un trozo de película extendedora de reactivos para extender el reactivo evitando las
burbujas de aire.
10. Incubar el gel
11. Retirar la película extendedora de reactivos y retirar ambos bloques de gel utilizando el extractor
de bloques de gel.
12. Lavar el gel en la solución decolorante durante 5 minutos.
13. Lavar el gel en agua destilada durante 5 minutos y secar a 50...70°C.
CONTROL DE CALIDAD
El Control del Nivel de colesterol (Nº Cat. 3218) puede usarse para verificar todas las fases del
procedimiento y debe usarse en cada prueba. Consultar el prospecto del envase, en el que se indican
los valores adecuados para los ensayos de laboratorio.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Se recomienda realizar cualquier evaluación de los geles con respecto a valores normales obtenidos
para este test en cada laboratorio individual.
Los geles se pueden tamizar mediante densitometría utilizando un filtro de 570nm.
31
Español
La toma de decisiones sobre los tratamientos, que aparece en las directrices del NCEP, está basada
7
principalmente en los niveles de Colesterol LDL :
Colesterol Total
Nivel deseable de colesterol en sangre
Frontera de nivel alto de colesterol en sangre
Nivel alto de colesterol
< 200 mg/dl
200-239 mg/dl
> 240 mg/dl
Colesterol HDL
Bajo nivel de colesterol HDL
Colesterol HDL protector
< 35 mg/dl
> 60 mg/dl
Triglicéridos
Deseable
Frontera
Elevado
Gravemente elevado/pancreatitis
< 250 mg/dl
250-500 mg/dl
500-1.000 mg/dl
> 1.000 mg/dl
Colesterol LDL
Terapia dietética
Sin CC y <2 factores de riesgo
Sin CC y >2 factores de riesgo
Con CHD
Nivel de iniciación
> 160 mg/dl
> 130 mg/dl
> 100 mg/dL
Objetivo LDL
< 160 mg/dl
< 130 mg/dl
< 100 mg/dL
Tratamiento farmacológico
Sin CC y <2 factores de riesgo
Sin CC y >2 factores de riesgo
Con CC
> 190 mg/dl
> 160 mg/dl
> 130 mg/dl
< 160 mg/dl
< 130 mg/dl
< 100 mg/dl
Los factores de riesgo considerados en el esquema de clasificación son la edad (hombres > 45 años,
mujeres > 55 años), los antecedentes familiares de CC prematura, la adicción al tabaco, la hipertensión
y la diabetes. El Colesterol HDL se considera de alto riesgo cuando es < 35 mg/dl y aparece en la
clasificación como un factor de riesgo. El colesterol HDL se considera protector cuando es > 60 mg/dl
y resta uno del número total de factores de riesgo.
VALORES DE REFERENCIA
Utilizando 14 muestras normales procedentes de donantes varones y hembras con niveles totales de
colesterol de < 200 mg/dl, se obtuvieron los siguientes rangos normales (estos datos se presentan sólo
como orientación):
Fracción proteínica
HDL
Lp(a)-C
VLDL
LDL
Margen + 2SD
11,5 - 42,3
0 - 3,8
0 - 18,2
50,5 - 77,1
Media (%)
26,9
1,2
8,2
63,8
32
CARACTERÍSTICAS FUNCIONALES
1) Precisión
Banda
HDL
LDL
VLDL
Lp(a)
Dentro de pruebas (n = 12)
Media
SD
CV (%)
22,3
0,6 2,7
67,3
1,1 1,6
7,8
0,7 9,2
2,6
0,3 10,7
Entre pruebas (n = 36)
Media
SD
CV (%)
22,5
1,0
4,5
67,8
1,6
2,4
7,1
0,8
11,1
2,6
0,4
14,7
Sensibilidad
Las disoluciones de series de muestras con un colesterol alto mostraron que la sensibilidad del sistema
era equivalente a 4,2 mg/dl de colesterol por banda.
LIMITACIONES
No se puede utilizar este kit con el sistema SAS-1 de Helena BioSciences.
BIBLIOGRAFÍA
Inter. Med., 1971 ; 74 (1) : 1-12
5. Galen, R.S. ‘HDL Cholesterol, How Good a Risk Factor?’, Diag. Med., 1979 ; Nov/Dic: 39-58.
6. Castelli, W.P. et alter.’HDL Cholesterol and Other Lipids in Coronary Heart Disease - The
Cooperative Lipoprotein Phenotyping Study’ Circulación, 1977 ; 55 (5) : 767-772.
1993.
8. Delalla, O.F. y Gofman, J.W. ‘Ultracentrifugal Analysis of Serum Lipoprotein’, in Methods of
11. U.S. Department of Health and Human Services, Lipid Research Clinics Program. En: Hainline,
Jr. A., Karon, J., Lippel, K. (Eds.), Manual of Laboratory Operations 1983. Second Edition, NIH
Publication.
33
Español
(In Press).
34
Helena Biosciences Europe
Queensway South
Team Valley Trading Estate
Gateshead
Tyne and Wear
NE11 0SD
Tel: +44 (0) 191 482 8440
Fax: +44 (0) 191 482 8442
Email: [email protected]
www.helena-biosciences.com
HL-2-1387P 2008/06 (5)

HL-2-1387P_2008-06(5) [SAS-1 Cholesterol profile 12].qxp

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