QUANTA LiteTM CCP (Cyclic Citrullinated Peptide)

QUANTA LiteTM CCP (Cyclic Citrullinated Peptide)

QUANTA LiteTM CCP3 IgG ELISA
704535
Para Diagnóstico In Vitro
Complejidad de CLIA: Alto
Aplicación
QUANTA-LiteTM CCP3 IgG es un análisis semicuantitativo de inmunoabsorción ligada a enzimas para la
detección de anticuerpos IgG anti-CCP3 (3 péptido citrulinado cíclico) en paciente suero o citrado o
plasma con EDTA. La detección de estos anticuerpos, juntamente con los anticuerpos IgG, resulta útil
para el diagnóstico de la artritis reumatoide.
Sumario y Explicación de la prueba
La artritis reumatoide (RA) es una de las enfermedades autoinmunes sistémicas más frecuentes,
afectando aproximadamente al 0,5% de la población mundial.1 El diagnóstico depende principalmente
de las manifestaciones clínicas de la enfermedad. Hasta hace poco, el único análisis serológico de
rutina que se realizaba era la determinación de la presencia del factor reumatoide (RF), encontrado
aproximadamente en el 50%-90% de esos pacientes.1,2 No obstante, el FR se encuentra también en
personas con infecciones, otras enfermedades autoinmunes y algunos individuos sanos.1,2
Para el manejo de la enfermedad es importante diagnosticar y tratar a los pacientes con RA lo antes
posible.3 Desde hace muchos años se sabe que los autoanticuerpos anti-perinucleares, llamados
también autoanticuerpos anti-queratina, están presentes en individuos con RA.4 Recientemente se ha
descubierto que estos anticuerpos reconocen a un epítope que contiene la forma desimidada de la
arginina, llamada citrulina.5,6 Se ha demostrado que un péptido circular que contiene citrulina, llamado
CCP (péptido citrulinado cíclico), discrimina mejor a los pacientes con RA de otros pacientes que la
prueba de anticuerpos perinucleares o las pruebas del factor reumatoide.4,7-9 En una revisión de la
literatura publicada6, el 77% de los pacientes con RA dan positivo a los anticuerpos anti-CCP, mientras
que una media del 3% de los individuos sin RA dan positivo.
El análisis ELISA realizado con la secuencia originalmente descrita del CCP6 no se ha llegado a
comercializar extensamente. Por el contrario, la segunda generación de análisis para la detección de
anticuerpos anti-CCP (llamados CCP2 por algunas empresas) sí que está ampliamente disponible y
funciona mejor que el péptido original.10 INOVA llama a esta segunda generación de análisis ELISA para
la IgG anti-CCP. Los anticuerpos de algunos pacientes con RA que son negativos para los anticuerpos
anti-CCP2, reaccionan frente a otras proteínas citrulinadas,4,7,8 lo que sugiere la existencia de otros
epítopes que no están presentes en la secuencia del antígeno CCP de la segunda generación. El
péptido de la tercera generación utilizado en este análisis ELISA, CCP3, se desarrolló tras probar
distintos péptidos citrulinados en un gran número de pacientes con RA y pacientes de control. El análisis
ELISA con CCP3 muestra aproximadamente un 5% más de sensibilidad en la detección de pacientes
con RA que el CCP2 de la segunda generación, aunque tiene también una especificidad muy elevada.
Otras mejoras en el método ELISA con CCP3 son las cavidades separadas codificadas en color y la
posibilidad de utilizar muestras de suero o plasma de los pacientes.
Procedimiento de trabajo
El antígeno usado en QUANTA Lite™ CCP3 IgG ELISA es un péptido sintético cíclico con citrulina de
gran sensibilidad y especificidad para la detección de anticuerpos en pacientes con AR. Este antígeno
está unido a la superficie de una placa con micropocillos. Los controles prediluidos y los sueros diluidos
del paciente se añaden a cavidades separadas, lo que permite que cualquier anticuerpo IgG anti-CCP
presente se una al antígeno inmovilizado. El resto de componentes no unidos se elimina mediante
lavado y se añade conjugado anti IgG humana a cada pocillo. Un segundo paso de incubación permite
que el conjugado se una a los anticuerpos presentes. Tras un lavado que elimina el conjugado sobrante,
se añade un sustrato cromogénico y tras incubación la actividad enzimática presente en el pocillo es
proporcional a la intensidad de color desarrollado. El ensayo puede ser evaluado fotométricamente
comparando la intensidad de color en las muestras con la de los controles.
Reactivos
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Microplaca ELISA de poliestireno con pocillos recubiertos con antígeno CCP3 purificado (12-1 x
8 pocillos), envasada en su soporte en una bolsa de aluminio con desecante
Control negativo ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano ausente
de anticuerpos humanos anti CCP IgG, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA CCP3 IgG Positivo Débil, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero
humano con anticuerpos anti CCP IgG, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA CCP3 IgG Positivo Fuerte (Calibrador A), 1 frasco de tampón conteniendo
conservante y suero humano con anticuerpos anti CCP IgG, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA CCP3 IgG Calibrador B, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero
humano con anticuerpos anti CCP IgG, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA CCP3 IgG Calibrador C, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero
humano con anticuerpos anti CCP IgG, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA CCP3 IgG Calibrador D, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero
humano con anticuerpos anti CCP IgG, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA CCP3 IgG Calibrador E, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero
humano con anticuerpos anti CCP IgG, prediluido, 1.2 ml
1
9.
10.
11.
12.
13.
Diluyente de Muestra HRP, 1 frasco color rosado conteniendo tampón con Tris, Tween 20 y
conservante, 50 ml
Solución de Lavado Concentrada HRP, 1 frasco de concentrado 40x color rojo conteniendo
tampón con Tris y Tween 20, 25ml. Referirse a la Sección “Metodología” para instrucciones de
dilución.
Conjugado HRP CCP3 IgG, con anti- IgG humana de cabra, 1 frasco - color azul conteniendo
tampón, estabilizante de proteína y conservante, 10ml
Cromógeno TMB, 1 frasco conteniendo estabilizantes, 10ml
Solución de Parada HRP, Acido Sulfúrico 0.344 M, 1 frasco, incolora, 10 ml
Advertencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Aviso: Este producto contiene cloramfenicol al 0.02% en el Diluyente de muestras, controles y
conjugado considerado en el estado de California como causante de cáncer.
Todo material de origen humano usado en la preparación de los controles para este producto se
ha examinado resultando negativo para anticuerpos contra HIV, HBsAg, y HCV por métodos
aprobados por la FDA. Ningún método puede sin embargo ofrecer garantía completa que HIV,
HBV, HCV o otros agentes contagiosos estén ausentes. Por lo tanto, los controles CCP3 IgG
ELISA positivo fuerte, CCP3 IgG ELISA positivo débil y ELISA negativo deben manejarse como
si fueran material potencialmente contagioso.11
Dado que se utiliza azida sódica como conservante, este producto puede ser tóxico por ingestión
o absorción a través de piel o mucosas. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o cobre
de las tuberías para formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Si se utilizan desagües
para la eliminación de reactivos se recomienda lavarlos con abundante agua para prevenir la
formación de dichas azidas metálicas.
El Conjugado HRP contiene diluido un producto químico venenoso y corrosivo que puede ser
tóxico si se ingiere. Para impedir quemaduras, evitar el contacto con piel o ojos.
El Cromógeno TMB contiene un irritante. Puede ser dañino si es inhalado, ingerido o absorbido
por la piel. Evitar la inhalación, ingestión o contacto con piel y ojos.
La Solución de parada HRP consiste de una solución diluida de ácido sulfúrico. Evitar exposición
a bases, metales, u otros compuestos que puedan reaccionar con ácidos. El ácido Sulfúrico es
venenoso y corrosivo, puede ser tóxico si ingerido. Para impedir quemaduras, evitar contacto con
piel y ojos.
Se recomienda utilizar el equipo protector apropiado al trabajar con este kit.
Los reactivos derramados deben limpiarse inmediatamente. Siga las normas aplicables en su
laboratorio acerca de la eliminación de residuos.
Precauciones
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Este producto es para ser usado en el Diagnóstico In Vitro.
La sustitución de componentes diferentes de los incluidos en el sistema puede generar
resultados inconsistentes.
Un lavado incompleto o ineficiente y una eliminación insuficiente de líquido de los pocillos puede
dar lugar a una pérdida de precisión y/o un fondo elevado.
La adaptación de este ensayo para su uso en procesadores automáticos u otros dispositivos,
totalmente o en parte, puede producir diferencias en los resultados en comparación con el
procedimiento manual. Es responsabilidad de cada laboratorio de validar sus procedimiento
automatizado y comprobar que produce resultados dentro de los límites aceptables.
Existe una variedad de factores que influyen en la realización del ensayo. Esto incluye la
temperatura inicial de los reactivos, la temperatura ambiente, la exactitud y reproducibilidad de
técnica de pipeteo, la calidad de la técnica de lavando, el fotómetro que se utiliza para medir los
resultados, y los tiempos de incubación durante el ensayo. Es necesario un exquisito cuidado y
un trabajo consistente para obtener resultados exactos y reproducibles.
Se recomienda seguir estrictamente el protocolo.
El sellado incompleto de la bolsa “zip-lock” que contenga tiras sin usar y desecante provocará la
degradación del antígeno que se apreciará en un empeoramiento de la precisión de resultados.
Pueden observarse absorbancias inaceptablemente bajas tras dos o más usos separados de un
conjugado HRP. Es importante seguir todas las recomendaciones de manipulación específicas
para este producto para evitar que esto ocurra.
La contaminación química del conjugado HRP puede ocurrir como resultado de una limpieza o
secado inadecuados del equipo o instrumentos. Residuos de productos químicos comunes en el
laboratorio como formalina, lejía, etanol, o detergente causan la degradación del conjugado HRP
con el tiempo. Enjuague bien todo equipo o instrumentos después de usar dichos productos.
Condiciones de Almacenaje
1.
2.
3.
Guardar todos los reactivos del kit en nevera a 2-8°C. No congelar. Los reactivos son estables
hasta la fecha de caducidad si son almacenados y manipulados correctamente.
Las tiras sin utilizar deben volverse a guardar en la bolsa de aluminio que contiene desecantes
cerrándola herméticamente y almacenándola a 2-8ºC.
La solución de lavado diluida es estable 1 semana a 2-8°C.
Recolección de Muestras
Este procedimiento debe realizarse con un espécimen de suero o plasma citrado o plasma con EDTA,
puesto que estas muestras dan resultados idénticos. No debe utilizarse plasma con litio y heparina
2
porque puede dar resultados diferentes al suero. La adición de azida u otros conservantes a las
muestras analizadas puede influir negativamente en los resultados. Deben asimismo evitarse las
muestras lipémicas o hemolizadas.
Tras la recolección de las muestras de sangre, el suero debe ser separado del coágulo. El documento
NCCLS H18-A3 recomienda las siguientes condiciones de almacenaje para muestras: 1) Guardar las
muestras a temperatura ambiente no más de 8 horas. 2) Si el ensayo no se va completar en 8 horas,
refrigerar la muestra a 2-8°C. 3) Si el ensayo no se va completar entre 48 horas, o para enviar las
muestras, congelar a -20°C o a temperatura inferior. Una vez descongeladas las muestras deben
agitarse bien antes de utilizarse.
Procedimiento
Materiales Suministrados
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Microplaca CCP3 IgG ELISA (12-1 x 8 pocillos), con soporte
1.2 ml control negativo ELISA prediluido
1.2ml control prediluido CCP3 IgG ELISA Positivo Débil
1.2ml control prediluido CCP3 IgG ELISA Positivo Fuerte (Calibrador A)
1.2ml control prediluido CCP3 IgG ELISA Calibrador B
1.2ml control prediluido CCP3 IgG ELISA Calibrador C
1.2ml control prediluido CCP3 IgG ELISA Calibrador D
1.2ml control prediluido CCP3 IgG ELISA Calibrador E
50ml Diluyente de muestra HRP
25ml Solución de lavado concentrada 40X
10ml Conjugado IgG (cabra) anti IgG humana
10ml Cromógeno TMB
10ml Solución parada HRP (Ácido Sulfúrico 0.344M)
Material necesario no incluido
Micropipetas para 5, 100, 200-300 y 500µl
Puntas desechables para micropipeta
Tubos para dilución de muestras, 4ml
Agua destilada
Recipiente de 1L para la solución de lavado reconstituida
Lector de microplacas capaz de medir densidades ópticas a 450nm (y a 620nm para lecturas de doble
longitud de onda)
Metodología
Antes de empezar
1.
2.
3.
4.
5.
Llevar todos reactivos y muestras a la temperatura ambiente (20-26°C) y agitar.
Diluir la solución de lavado HRP 1:40 añadiendo el contenido del envase con concentrado a 975
ml de agua destilada. Si no va a utilizar toda la placa, puede preparar una cantidad menor de
solución de lavado añadiendo 2.0 ml del concentrado a 78ml de agua destilada para cada 16
pocillos que vayan a utilizarse. El tampón diluido es estable 1 semana a 2-8°C.
Preparar una dilución 1:101 de cada muestra a procesar añadiendo 5 µl de muestra a 500 µl de
diluyente. Las muestras diluidas deben ser utilizadas dentro de las 8 horas de su preparación.
NO DILUIR los controles CCP3 IgG ELISA positivo débil, positivo fuerte y ELISA negativo.
La determinación de la presencia o ausencia de anticuerpos anti CCP3 IgG usando unidades
arbitrarias requiere dos pocillos para cada uno de los tres controles y uno o dos pocillos para
cada muestra. Se recomienda que las muestras se hagan por duplicado.
Si se desea, los resultados se pueden cuantificar mediante una curva estándar de cinco puntos.
Para los puntos de A a E de la curva estándar de cinco puntos, use los calibradores de A a E de
CCP3 IgG con HRP PREDILUIDOS directamente del vial. La curva estándar de cinco puntos
tiene los siguientes valores:
Punto
Unidades
A
Calibrador A de CCP3 IgG prediluido
250.0
B
Calibrador B de CCP3 IgG prediluido
125.0
C
Calibrador C de CCP3 IgG prediluido
62.5
D
Calibrador D de CCP3 IgG prediluido
31.25
E
Calibrador E de CCP3 IgG prediluido
15.62
Procedimiento de Ensayo
1.
2.
3.
TODOS REACTIVOS DEBEN ESTAR A TEMPERATURA AMBIENTE (20-26°C) ANTES DE
EMPEZAR EL ENSAYO. Ponga el número necesario de tiras en el soporte. Devolver
inmediatamente las tiras sin utilizar a la bolsa de aluminio y sellarla firmemente para
minimizar la exposición a la humedad.
Agregar 100µl de los controles prediluidos CCP3 IgG ELISA Positivo Débil, CCP3 IgG ELISA
Positivo Fuerte, CCP3 IgG ELISA Calibradores B a E si lo desea, ELISA Negativo y las muestras
prediluidas a los pocillos. Cubrir los pocillos e incubar 30 minutos a temperatura ambiente en una
superficie plana. El tiempo de incubación empieza después de la adición de la última muestra.
Lavado: Aspirar el contenido de cada pocillo. Agregar 200-300µl de solución de lavado a todos
pocillos y aspirar. Repetir esta secuencia dos veces más para un total de tres lavados. Invertir la
placa y golpearla suavemente en material absorbente para eliminar cualquier fluido residual tras
3
4.
5.
6.
7.
8.
el último lavado. Es importante que cada pocillo esté completamente vacío después de cada
paso de lavado. Mantener la misma secuencia para la aspiración que la usada para la adición de
muestras.
Agregar 100µl de Conjugado IgG HRP a cada pocillo. El conjugado debe pipetearse en las
condiciones más asépticas posibles y siguiendo buenas técnicas de laboratorio. Aspirar
solamente la cantidad de conjugado necesaria para el ensayo. PARA EVITAR CUALQUIER
CONTAMINACIÓN POTENCIAL MICROBIANA Y/O QUÍMICA, NUNCA DEVOLVER EL
CONJUGADO SIN USAR A SU RECIPIENTE ORIGINAL. Incubar los pocillos 30 minutos como
en el paso 2.
Lavado: Repetir el paso 3.
Agregar 100µl de Cromógeno TMB a cada pocillo e incubar 30 minutos en oscuridad a
temperatura ambiente.
Agregar 100µl de Solución de parada a cada pocillo. Mantener la misma secuencia y
temporalización que la efectuada en la adición de Cromógeno. Agitar suavemente la placa para
mezclar bien los pocillos.
Leer la absorbancia (DO) de cada pocillo a 450nm en un plazo máximo de una hora. Si se desea
seguir el método de lectura bicromática puede utilizarse 620 nm como longitud de onda de
referencia.
Control de Calidad
1.
2.
3.
4.
Los controles CCP3 IgG ELISA Positivo Débil, CCP3 IgG ELISA Positivo Fuerte y Control
Negativo ELISA deben procesarse con cada lote de muestras para asegurar que todos reactivos
y procedimientos funcionan correctamente.
El usuario debe notar que debido a que los controles CCP3 IgG ELISA Positivo Débil, CCP3 IgG
ELISA Positivo Fuerte y ELISA Negativo son prediluidos, no controlan procedimientos asociados
con dilución de especímenes.
Pueden añadirse controles adicionales según las directivas o requisitos del laboratorio. Pueden
prepararse controles válidos haciendo alícuotas de un “pool” de suero humano que debe
almacenarse a < -20°C.
Para considerar válidos los resultados deben considerarse satisfechos todos los criterios
especificados a continuación, si alguno de ellos no se cumple la prueba debe considerarse
inválida y repetirse.
a.
La absorbancia del control CCP3 IgG Positivo debe ser superior a la del control CCP3
IgG positivo débil y la de este debe ser superior a la del control negativo.
b.
El control CCP3 IgG positivo fuerte debe tener una absorbancia mayor que 1.0 mientras
que la del control negativo no debe exceder de 0.2.
c.
La absorbancia del control CCP3 IgG positivo débil debe ser superior al doble del control
negativo, u oscilar entre 0.25.
d.
Los controles ELISA negativo y CCP3 IgG positivo fuerte están pensados para
monitorizar problemas de reactivo de magnitud substancial. El control CCP3 IgG positivo
fuerte no puede asegurar precisión alguna en el punto de corte del ensayo.
e.
El usuario puede referirse al documento NCCLS (National Committee of Clinical
Laboratory Standards) C24-A2 para una guía adicional acerca de buenas prácticas de
laboratorio.
Cálculo de resultados semicuantitativos – Método de proporciones
Debe determinarse en primer lugar el promedio de densidades ópticas de cada juego de duplicados. La
reactividad para cada muestra se calcula dividiendo la densidad óptica promedio de la muestra por la
densidad óptica promedio del control CCP3 IgG positivo débil. El resultado es multiplicado por el número
de las unidades del control CCP3 IgG positivo débil encontrado en la etiqueta
DO Muestra
Valor de la Muestra = —————————————————— x Valor ELISA Positivo Débil
(unidades)
DO ELISA Positivo Débil
(unidades)
La reactividad de la muestra está relacionada de manera no lineal con la cantidad de anticuerpo
presente. Mientras que los aumentos y disminuciones en la concentración de anticuerpos del paciente
se reflejarán en el aumento o disminución correspondiente de la reactividad, los cambios no son
proporcionales (por ejemplo, al doblarse la concentración de anticuerpo no se dobla la reactividad). Si se
deseara una cuantificación más precisa de la cantidad de anticuerpo, puede informarse como el título de
anticuerpo de la muestra la última dilución positiva de una serie de diluciones seriadas de la muestra.
Método de cálculo optativo: resultados semicuantitativos mediante curva
estándar
Cálculo de los resultados con la curva estándar optativa
1.
Determine un valor medio para todas las lecturas duplicadas.
2.
Trace la absorbancia (DO) media de las muestras en la curva estándar según sus valores
en unidades. Utilice el polinomio de interpolación cúbica, linear/linear (un polinomio de
tercer orden) o un ajuste de línea punto-a-punto para trazar la curva.
3.
Determine la concentración desconocida de CCP3 en unidades en el eje “Y” a partir de la
absorbancia correspondiente en el eje “X”. Calcule las unidades desconocidas.
4.
Nota: Los valores calculados con el método de las proporciones serán distintos a los
calculados con la curva estándar. Habrá mayor diferencia en los valores altos que en los
4
bajos. El positivo fuerte del CCP3 no arrojará un valor de 250 unidades con el método de
las proporciones.
Interpretación de los Resultados
La técnica ELISA es muy sensible y es capaz de detectar pequeñas diferencias entre poblaciones de
pacientes. Los valores presentados a continuación son sólo valores sugeridos. Cada laboratorio debe
establecer su propio rango normal basado en su propia metodología, controles, equipo y población de
pacientes.
La muestra puede clasificarse con un valor negativo, positivo débil, positivo moderado o positivo fuerte
según la tabla siguiente.
Unidades
Negativo
<20
Positivo Débil
20 - 39
Positivo Moderado
40 - 59
Positivo Fuerte
>60
1.
2.
3.
Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos anti-CCP3 IgG y sugiere la
posibilidad de la artritis reumatoide.
Un resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos CCP3 IgG o niveles inferiores al
punto de corte del ensayo.
Se sugiere que los resultados informados por el laboratorio incluyan la afirmación “Los
siguientes resultados se obtuvieron con el kit INOVA QUANTA LiteTM CCP3 IgG ELISA.
Los valores obtenidos con kits de diferentes fabricantes pueden variar y no pueden
intercambiarse entre ellos. La magnitud de los niveles informados de IgG no puede
correlacionarse con un punto final”.
Limitaciones del Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
La presencia de inmunocomplejos u otros agregados de inmunoglobulinas en la muestra del
paciente puede producir un aumento de uniones inespecíficas y causar falsos positivos en este
ensayo.
No todos los pacientes con AR dan positivo en anticuerpos contra CCP.
Los resultados de este ensayo deben utilizarse conjuntamente con hallazgos clínicos y otras
pruebas serológicas.
La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero o plasma
citrado o plasma con EDTA.
No se ha establecido el valor diagnóstico del anti-CCP3 en pacientes con artritis reumatoide
juvenil.
Sustancias que interfieren: La presencia de altos niveles de hemoglobina, bilirrubina, colesterol o
triglicéridos no produce resultados falsos negativos ni falsos positivos.
Valores esperados de las muestras clínicas
La capacidad del método ELISA para QUANTA LiteTM CCP3 IgG para detectar anticuerpos IgG CCP3 se
evaluó comparando 521 muestras con un método ELISA para IgG anti-CCP2. Se incluyeron 156
pacientes con un diagnóstico clínico de RA. Se analizó también el suero de 166 donantes de sangre
elegidos al azar. De los 146 especímenes cuya edad y sexo se conocían, 59 eran mujeres y la edad
media era de 38.3 años. Los controles enfermos correspondían a 113 pacientes con otras
enfermedades reumáticas (ORD), como lupus eritematoso sistémico (78), síndrome de Sjögren (11) y
escleroderma (24), así como otras 86 muestras con anticuerpos frente a enfermedades infecciosas (ID)
como hepatitis C (62), virus del herpes simple (8), citomegalovirus (8), toxoplasmosis (6) y rubeola (2) en
un extenso estudio interno.
Sensibilidad y Especificidad Clínicas
En la siguiente tabla se resumen los resultados de todos nuestros estudios clínicos.
Muestras N=521
CCP 3 ELISA
+
115
41
16
349
4
162
12
101
0
86
RA (N=156)
Total Controles (N=365)
Donantes de sangre (N=166)
Otras enfermedades reumáticas (N=113)
Enfermedades infecciosas (N=86)
CCP IgG ELISA
+
107
49
7
358
1
165
6
107
0
86
Sensibilidad Clínicas [(95% Intervalo de confianza (CI)] = CCP3 = 74% (67-81%)
CCP = 69% (61-76%)
Especificidad Clínicas (95% CI) =
CCP3 = 96% (93-98%)
CCP = 98% (96-99%)
5
Método de comparación
Todas las Muestras N=521
CCP 3
ELISA
+
-
CCP IgG ELISA
+
112
19*
2**
388
Sensibilidad Relativas (95% CI) = 98% (94-100%)
Especificidad Relativas (95% CI) = 95% (93-97%)
Concordancia =96.0%
*En 10 de estos pacientes se diagnosticó RA, mientras que otros 3 dieron positivo para IgM o IgA antiFR.
**Estas 2 muestras corresponden a pacientes con diagnóstico de RA.
Reactividad Cruzada
Para evaluar la posible reactividad cruzada del antígeno CCP3 con otros autoanticuerpos, se utilizó el
método QUANTA LiteTM CCP3 IgG ELISA en 16 muestras, todas las cuales presentaron altos niveles de
otros autoanticuerpos. En este grupo había 2 muestras de cada que reaccionaron con SS-A, SS-B, Sm,
RNP, Scl-70, Jo-1, Ribo-P y dsDNA. Todas las muestras fueron negativas para anticuerpos anti-CCP3.
El anterior estudio no demuestra un nivel significativo de reactividad cruzada del antígeno CCP3 con
otros autoanticuerpos.
Precisión y Reproducibilidad
La variación inter-ensayo se determinó analizando por duplicado muestras negativas, ligeramente
positivas y claramente positivas en 6 análisis diferentes realizados en 6 días distintos. La variación intraensayo se determinó analizando 5 muestras 9 veces cada una en la misma placa ELISA. A continuación
se muestran los resultados más representativos.
Variación inter-análisis
Negativo 1
1 pt.* 5 pt.**
Unidades medias
5U
0U
Desviación estándar
0.2
0.0
Coeficiente de variación % 4%
0%
Débil 1
1 pt.
5 pt.
28 U
31 U
1.6
2.4
6%
8%
Débil 2
1 pt.
5 pt.
35 U
42 U
1.1
1.8
3%
4%
Fuerte 1
1 pt.
5 pt.
110 U 226 U
4.4
9.2
4%
4%
Débil 1
1 pt.
5 pt.
26 U
28 U
0.6
0.9
3%
3%
Débil 2
1 pt.
5 pt.
32 U
37 U
1.6
2.6
5%
7%
Fuerte 1
1 pt.
5 pt.
114 U 226 U
1.7
6.4
1%
3%
Variación intra-análisis
Negativo 1
1 pt.
5 pt.
Unidades medias
5U
0U
Desviación estándar
0.1
0.0
Coeficiente de variación % 3%
0%
*Resultados del análisis del método del cociente.
**Resultados del análisis de la curva normalizada.
6
Referencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
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Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control and
Prevention/National Institute of Health, 5th Edition, 2007.
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