TRAPtest

06674267001V2
TRAPtest
REF 06675875
REF 06675883
190
190
1 x → 1.0 mL
3 x → 1.0 mL
Español
Uso previsto
Prueba destinada a la determinación cuantitativa in vitro de la función
plaquetaria activada por TRAP-6. El presente reactivo está concebido
para su uso en pruebas de la función plaquetaria con muestras de
sangre completa en los analizadores Multiplate.
Características
La trombina es capaz de activar las plaquetas sobre todo mediante
la hidrólisis de un receptor acoplado a la proteína G en la membrana
plaquetaria que pertenece a la familia de receptores activados por
proteasas (denominado PAR-1) y un segundo receptor (PAR-4) aunque
éste exprime una menor sensibilidad a la trombina.1
La activación por la trombina resulta en una agregación plaquetaria
entrecruzada fijándose las cadenas de fibrinógeno a los receptores de la
glucoproteína IIb/IIIa. La activación de los componentes de los receptores
GPIIb/IIIa supone un cambio de su conformación tras el cual producen
en la membrana plaquetaria el sitio de unión GPIIb/IIIa de alta afinidad
para el fibrinógeno. Para analizar la función plaquetaria activada por el
receptor de trombina suele emplearse un péptido que estimula el receptor
PAR-1 (SFLLRN = TRAP-6).2 Esto permite analizar la función plaquetaria
estimulada por el receptor PAR-1 sin activar la formación de fibrina lo que
sucedería si se emplease trombina como agonista. La agregación plaquetaria
inducida por TRAP-6 puede ser reducida o faltar por completa ante la
presencia de antagonistas de GPIIb/IIIa3 o en caso de estados deficientes
de receptores de GpIIb/IIIa (trombastenia de Glanzmann).4,5
La agregación inducida por TRAP-6 apenas desarrolla sensibilidad
para los efectos inhibidores del ácido acetilsalicílico6,7,8 o los
antagonistas del receptor de ADP.8,9,10,11
Principio del test
El péptido-6 activando el receptor de trombina (TRAP-6) es un activador
plaquetario potente y estimula la agregación plaquetaria a través del receptor
de trombina PAR-1. Esto produce una fuerte activación plaquetaria.
Reactivo - Solución de trabajo
REF 06675875190
R1: 1 frasco para 1.0 mL
Reactivo liofilizado con TRAP-6: 1 mM
5 microtubos para alícuotas
REF 06675883190
R1: 3 frasco para 1.0 mL c/u
Reactivo liofilizado con TRAP-6: 1 mM
Medidas de precaución y advertencias
Sólo para el uso diagnóstico in vitro.
Observe las medidas de precaución usuales para la manipulación de reactivos.
Elimine los residuos según las normas locales vigentes.
Ficha de datos de seguridad a la disposición del usuario
profesional que la solicite.
Preparación de los reactivos
Reconstituir cuidadosamente el contenido de un frasco R1 añadiendo
1.0 mL de agua destilada o desionizada. Remover suavemente el frasco R1,
taparlo y dejar reposar 10 minutos a 18-25 °C. Antes del uso, remover el
frasco otra vez hasta obtener una solución homogénea. Evitar la formación
de espuma. El reactivo debe ser incoloro y transparente.
Nota: Los frascos no son llenados al vacío sino contienen un gas
inerte. Para obtener la máxima estabilidad después de la reconstitución,
pipetear para el uso diario alícuotas de como mínimo 100 µL de
reactivo a microtubos y conservar adecuadamente.
Conservación y estabilidad
Conservar a 2-8 °C.
Los reactivos liofilizados son estables hasta la fecha de caducidad
indicada. Si el reactivo reconstituido no se alícuota en microtubos, el
frasco original debe conservarse en posición vertical.
Estabilidad del reactivo reconstituido:
2012-07, V 2 Español
a 2-8 °C
a -20 °C
una vez descongelado a 18-25 °C
7 días
4 semanas
24 horas
Proteger el reactivo de la luz, del aire y de temperaturas extremas.
Obtención y preparación de las muestras
Sólo se ha analizado y hallado apto el tipo de muestras aquí
mencionado: Sangre completa.
Use tubos de muestra estándar para recoger la muestra y siga las
instrucciones de uso del fabricante correspondiente. La extracción de sangre
debe efectuarse con cuidado para evitar una estasis venosa prolongada
empleando una aguja de grueso calibre. Evite la formación de espuma en el
tubo de extracción de sangre. Invierta suavemente el tubo de recolección
para garantizar la completa homogeneización del contenido.12
No congele ni refrigere las muestras. No caliente la sangre
antes de efectuar el análisis.13,14
El anticoagulante empleado para la recogida de la muestra de sangre
influye significativamente en los resultados de la prueba.13 Se recomienda
el empleo de tubos comerciales de recolección de sangre con hirudina.12,14
Alternativamente pueden usarse tubos estándares con litio y heparina o
tubos con citrato (3.2 % de citrato)11,15 asegurándose de que los tubos
de recolección de sangre citratados se llenen hasta el nivel indicado para
evitar concentraciones excesivas de citrato en la muestra.
Cada centro debe estandarizar el sistema de recolección de sangre
empleado. Los resultados de una muestra individual sólo pueden
compararse con los intervalos de referencia cuando se emplea el mismo
anticoagulante (p. ej. heparina, citrato o hirudina).
Las muestras deben analizarse en el período comprendido entre
0.5 y 3 horas después de su obtención.13
Material suministrado
• Consultar los reactivos en la sección ”Reactivo – Solución de trabajo”.
Material requerido adicionalmente (no suministrado)
• REF 06675727190, Aliquot Vials paraTRAPtest
• REF 06675751001, Hirudin Blood Tubes, 50 tubos
• REF 06675760001, Hirudin Blood Tubes, 10 tubos
• REF 06675972190, NaCl/CaCl2 Solution
• REF 06675930190, GpIIb/IIIa Antagonist Reagent, 1 x 0.5 mL
• REF 06675948190, GpIIb/IIIa Antagonist Reagent, 3 x 0.5 mL
• REF 06675590001, Test Cells, 6 x 10 piezas
• Solución salina (0.9 %)
• Analizador Multiplate. Para materiales requeridos adicionalmente
consultar el manual del operador o la guía rápida del analizador.
• Agua destilada o desionizada
• Equipo usual de laboratorio
Realización del test
Para garantizar el funcionamiento óptimo del test, observe las instrucciones de
la presente metódica referentes al analizador empleado. Consulte el manual
del operador del analizador en cuanto a las instrucciones específicas de
ensayo. Roche no se responsabiliza del funcionamiento de las aplicaciones no
validadas por la empresa. En su caso, el usuario se hace cargo de su definición.
Coloque R1 y las muestras en las posiciones previstas.
Procedimiento del test para sangre tratada con hirudina o heparina:
Solución salina al 0.9 % (precalentada a 37 °C) 300 µL
Muestra (18-25 °C)
Incubación
R1
Tiempo de medición
1/3
300 µL
180 segundos
20 µL
6 minutos
Analizadores Multiplate
TRAPtest
Procedimiento del test para sangre citratada:
Solución NaCl/CaCl2 (precalentada a 37 °C)
Muestra (18-25 °C)
Incubación
R1
Tiempo de medición
300 µL
300 µL
180 segundos
20 µL
6 minutos
Concentración final: 32 µM de TRAP-6.
Observe estrictamente las condiciones de temperatura y los tiempos
de incubación. Al emplear una pipeta electrónica, siga atentamente las
instrucciones del software indicados por el analizador Multiplate.
Control de calidad
Los resultados de los estudios de la agregación plaquetaria deben interpretarse
comparándolos con los resultados de los perfiles de agregación de una muestra
normal analizada simultáneamente. Una agregación anormal (inhibida) puede
conseguirse añadiendo los reactivos GpIIb/IIIa Antagonist Reagent.
Sírvase cumplir con las regulaciones gubernamentales y las normas
locales de control de calidad pertinentes.
Limitaciones del análisis - interferencias
La función plaquetaria puede verse inhibida por la ingestión de
diferentes fármacos y medicamentos a base de plantas.16 La agregación
puede ser anormal en pacientes con trombocitopenia.17 La activación
plaquetaria a través del receptor de trombina PAR-1 puede verse
inhibida por la presencia de antagonistas del receptor de trombina
o antagonistas del receptor de GpIIb/IIIa.3
Pueden obtenerse resultados falsos cuando no se calienta la solución
salina o si se reducen los tiempos de incubación. La solución
salina no debe contener ningún aditivo como p. ej. el éster metílico
para evitar resultados positivos falsos.
La presencia de antagonistas de GpIIb/IIIa en la muestra puede
llevar a una respuesta de agregación débil.3
El consumo de ácido acetilsalicílico y clopidogrel8,9,10,11 o la incubación
in vitro de una muestra con ácido acetilsalicílico6,7,8 puede llevar a una
inhibición disminuida de la agregación plaquetaria.
Para el diagnóstico, los resultados del test siempre deben interpretarse
teniendo en cuenta la anamnesis del paciente, el análisis clínico
así como los resultados de otros exámenes.
Valores teóricos
Los valores teóricos se han establecido en el marco de un estudio con
53 donantes sanos empleando Hirudin Blood Tubes.
Resultado (percentil 5 a 95):
TRAPtest
84-128
ABC [U]
Nota: Para establecer los valores de referencia, el donante no debería
haber ingerido ácido acetilsalicílico, clopidogrel o compuestos conteniendo
estas sustancias en los 10 días anteriores al análisis.18
Cada laboratorio debería comprobar si los intervalos de referencia
pueden aplicarse a su grupo de pacientes y, en caso necesario,
establecer sus propios valores.
Datos específicos de funcionamiento del test
A continuación, se indican los datos obtenidos con el analizador Multiplate. Los
resultados de cada laboratorio en particular pueden diferir de estos valores.
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18. CLSI. Defining, Establishing, and Verifying Reference Intervals in the
Clinical Laboratory; Approved Guideline–Third Edition. CLSI document
C28-A3. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2008.
Precisión
La precisión se determinó midiendo una muestra de sangre completa con
hirudina en dos analizadores en todos los canales (o sea 10 mediciones en
total). Se calcularon el valor medio, la desviación estándar y el coeficiente
de variación. Se analizaron en total 3 muestras de sangre empleando para
cada muestra el mismo analizador y los mismos frascos de reactivo.
Se obtuvieron los siguientes resultados:
Muestra
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
ABC media [U]
127
104
123
Analizadores Multiplate
DE ABC [U]
9
6
5
CV
7%
5%
4%
2/3
2012-07, V 2 Español
06674267001V2
TRAPtest
Para más información acerca de los componentes necesarios, consultar el
manual del operador y la guía rápida del analizador Multiplate, las respectivas
hojas de aplicación, la información de producto y las metódicas
En la presente metódica se emplea como separador decimal un punto
para distinguir la parte entera de la parte fraccionaria de un número
decimal. No se utilizan separadores de millares.
La barra del margen indica cambios o suplementos significativos.
© 2012, Roche Diagnostics
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2012-07, V 2 Español
3/3
Analizadores Multiplate