RIDA QUICK Malaria - R

RIDA®QUICK Malaria
Código del producto: N7006
Código del producto: N7007
R-Biopharm AG, An der neuen Bergstrasse 17, D-64297 Darmstadt, Alemania
Teléfono: +49 (0) 61 51 81 02-0. Fax: +49 (0) 61 51 81 02-20
C
1. Uso previsto
Para diagnósticos in vitro. La RIDA®QUICK Malaria es una prueba inmunocromatográfica
rápida para la detección cualitativa de antígenos de Plasmodium falciparum (P. f.), Plasmodium
vivax (P. v.), Plasmodium ovale (P. o.) y Plasmodium malariae (P. m.) en sangre completa. Está
destinada al diagnóstico rápido de la malaria en cuanto aparecen los primeros síntomas
clínicos.
2. Resumen y descripción de la prueba
En muchos países tropicales, la malaria sigue siendo un problema grave, y en unas pocas
regiones es incluso un problema cada vez mayor. Hay tres tipos diferentes de malaria. La
forma más peligrosa es la causada por el patógeno Plasmodium falciparum. Este tipo de
malaria, conocido como «malaria trópica», es casi exclusivamente la única responsable de las
muertes por esta enfermedad y representa la mayoría de los casos de malaria importados a los
países industrializados. Los patógenos de los otros tipos de malaria son Plasmodium vivax y
Plasmodium ovale (malaria terciana), así como Plasmodium malariae (malaria cuartana). En
años recientes se ha incluido a Plasmodium knowlesi como el quinto patógeno de la malaria.
Tiene un potencial patógeno similar al de P. falciparum y no es posible diferenciarlo de P.
malariae al microscopio, por lo que a menudo se confunde con este.
Todos los patógenos de la malaria se transmiten por la picadura de una hembra del mosquito
anofeles. El período de incubación puede ir de unos pocos días (malaria trópica) a varios años
(malaria cuartana). Los síntomas de la malaria son relativamente poco característicos. A
menudo incluyen síntomas gripales, sin los signos de un resfriado común. Suelen incluir
accesos febriles con escalofríos, cefalea, dolor de espalda y dolor en las extremidades. En
caso de desarrollos atípicos, los síntomas pueden ser principalmente gastrointestinales.
También pueden producirse un estado subfebril o afebril. En la malaria trópica pueden ocurrir
complicaciones potencialmente mortales después del sexto día de la enfermedad, que pueden
prevenirse mediante un tratamiento precoz y eficaz. Por eso es indispensable un diagnóstico
precoz.
La profilaxis de la malaria comporta evitar las picaduras de mosquito y, si es necesario, tomar
medicación antipalúdica en dosis preventivas o terapéuticas. Sin embargo, ya se han
desarrollado resistencias contra todos los medicamentos antipalúdicos que están disponibles,
en especial en el caso de Plasmodium falciparum. No obstante, la quimioprofilaxis puede
reducir significativamente el riesgo de malaria en las regiones donde han aparecido
resistencias a varios fármacos. El uso de medicamentos antipalúdicos para el autotratamiento
según sea necesario (tratamiento «en espera») solo se considera para estancias cortas en
regiones proclives a la malaria o en viajes a regiones con un riesgo muy bajo de paludismo, así
como en los casos de intolerancias conocidas a los medicamentos profilácticos. En estos casos
se recomienda someterse a una prueba rápida de la malaria que sea fácil de utilizar y resulte
adecuada para el viaje. Especialmente en las regiones sin médicos especializados en
enfermedades tropicales en ejercicio, una prueba rápida de la malaria resulta muy útil para
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efectuar un diagnóstico precoz, lo que puede evitar demoras que conlleven peligro para la vida.
De este modo, en caso de que la prueba rápida sea positiva, la medicación puede utilizarse de
forma selectiva durante el viaje.
El método estándar habitual para el diagnóstico mínimo de malaria en un laboratorio consiste
en la detección de plasmodios en la sangre periférica mediante la técnica de la «película de
sangre gruesa» después de la tinción de Giemsa. La prueba rápida RIDA®QUICK Malaria es
una alternativa rápida que también puede ser realizada por personas sin ninguna formación
especial. Asimismo, esta prueba puede utilizarse como un método de cribado para exámenes
en serie en bancos de sangre. Ante una morfología del parásito que sea incierta al microscopio
o que pueda ser difícil de evaluar, esta prueba también puede utilizarse como prueba
confirmatoria de malaria. La prueba rápida RIDA®QUICK Malaria también es muy adecuada
para el seguimiento del tratamiento, ya que puede detectar la reducción de los antígenos de
plasmodios que todavía están presentes en la circulación sanguínea, incluso si la morfología de
los plasmodios de los diferentes estadios sanguíneos en el frotis de sangre deja de ser
reconocible al microscopio. Sin embargo, el diagnóstico definitivo de malaria se basa en el
examen de la sangre al microscopio, con el apoyo de parámetros de laboratorio adicionales en
combinación con el diagnóstico clínico del paciente.
3. Principio de la prueba
La prueba RIDA®QUICK Malaria es una prueba inmunocromatográfica rápida de una sola etapa
para la detección combinada de la proteína rica en histidina (PfHRP-2) específica de
Plasmodium falciparum y de la lactato-deshidrogenasa (LDH) específica de los plasmodios,
que producen todos los patógenos de la malaria. Los anticuerpos de captura contra el antígeno
HRP-2 de Plasmodium falciparum y contra la LDH específica de los plasmodios se inmovilizan
en dos líneas cruzadas en la membrana de nitrocelulosa situada en el interior del casete. Existe
además una tercera línea, la línea de control, a la que se unen los demás anticuerpos de
captura específicos. Asimismo, los anticuerpos fijados al oro coloidal según la especificidad
apropiada se encuentran en la zona de aplicación de la muestra de sangre. La lisis de los
eritrocitos y la liberación de los antígenos de los plasmodios presentes en la muestra tienen
lugar después de la transferencia de la muestra de sangre al embudo del casete de la prueba y
de la posterior adición de los reactivos al segundo embudo proporcionado para este propósito.
En este proceso, el antígeno existente (PfHRP-2 y/o pLDH) se une a los anticuerpos marcados
con oro, fluye por la membrana de celulosa y atraviesa las tres líneas cruzadas con los
anticuerpos inmovilizados en el proceso. En el caso de las muestras positivas, el complejo
formado por el antígeno y el anticuerpo marcado con oro se une a estos anticuerpos
inmovilizados y, después, se condensa en una o dos líneas de detección de color rosa (T1 y/o
T2), así como en la línea de control de color rosa (C), que aparece en todos los casos. Solo la
línea de control de color rosa es visible en las muestras de sangre negativas para los
plasmodios.
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4. Contenido del envase
Los reactivos de un kit son suficientes para efectuar 25 (N7006) o 5 (N7007) pruebas.
Cassette
25 (5) pruebas
Reagent
3 (1) ml
Micro Pipet
25(5) unidades
25 (5) casetes de análisis envasados individualmente
Viales con reactivo de extracción
Tubos MICROSAFE® de 5 µl
5. Reactivos y almacenamiento
El kit debe almacenarse a una temperatura de 2 °C a 40 °C y puede utilizarse hasta la fecha de
caducidad impresa en la etiqueta. Debe protegerse contra la humedad y la congelación y
almacenarse en un lugar seco. Una vez alcanzada la fecha de caducidad, no es posible
garantizar la calidad. Tampoco puede garantizarse la validez de los casetes si su envase está
dañado.
6. Material necesario no incluido
- Temporizador
- Recipiente para residuos de laboratorio con una solución de hipoclorito de sodio al 0,5%
7. Precauciones
Para diagnósticos in vitro exclusivamente.
Todos los casetes de la prueba están destinados exclusivamente a un solo uso y no deben
reutilizarse.
No deben mezclarse reactivos y casetes de lotes diferentes.
Esta prueba solo debe llevarla a cabo personal de laboratorio capacitado. Deben respetarse las
directrices para el trabajo en laboratorios médicos. Deben seguirse en todo momento las
instrucciones de uso de la prueba.
Los reactivos contienen azida de sodio como conservante. Esta sustancia no debe entrar en
contacto con la piel o con las mucosas.
No pipetee las muestras ni los reactivos con la boca. Evite el contacto con heridas de la piel o
membranas mucosas. Al manipular las muestras, lleve guantes desechables y, una vez
finalizada la prueba, lávese las manos. No fume, coma ni beba en las zonas donde se
procesen las muestras.
Todos los reactivos y materiales que entren en contacto con muestras potencialmente
infecciosas deben tratarse con desinfectantes adecuados (por ejemplo, hipoclorito de sodio) o
esterilizarse a 121 °C en autoclave durante por lo menos una (1) hora.
8. Recogida y almacenamiento de muestras
Las muestras de sangre deben recogerse en tubos transparentes estándar y pueden
almacenarse hasta tres (3) días a temperatura ambiente o a 2 - 8 °C antes del uso. Si es
necesario un almacenamiento más prolongado, las muestras de sangre pueden conservarse
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congeladas a -20 °C. Para inhibir la coagulación, los tubos de recogida de las muestras de
sangre pueden contener EDTA, citrato o heparina.
9. Procedimiento de ensayo
9.1. Información general
La muestra, los reactivos y los casetes de la prueba deben llevarse a temperatura ambiente (20
- 25 °C) antes de utilizarlos. Los casetes de la prueba deben extraerse del envase adicional
poco antes de su uso. No vuelva a usar los casetes de la prueba una vez utilizados. No realice
la prueba bajo la luz solar directa.
9.2. Preparación de la muestra
Las muestras recogidas y almacenadas de acuerdo con las indicaciones del apartado 8, una
vez que han alcanzado la temperatura ambiente (20 - 25 °C), pueden utilizarse sin diluir en la
prueba.
Asimismo, puede recogerse sangre fresca mediante una punción en un dedo previamente
desinfectado con alcohol utilizando directamente la Micro Pipet suministrada con el kit de
tubos MICROSAFE® de 5 µl; a continuación, esta sangre puede utilizarse de acuerdo con el
procedimiento de ensayo descrito a continuación. Para garantizar un uso adecuado de los
tubos MICROSAFE®, siga las instrucciones correspondientes.
9.3. Análisis de la muestra
Extraiga el Cassette de la prueba de la bolsa de aluminio y colóquelo en una superficie plana.
Transfiera 5 µl de sangre tocando cuidadosamente la membrana de detección en la base del
embudo de muestras (sangre) con la punta de la pipeta desechable Micro Pipet que se incluye
en el kit de tubos MICROSAFE® o, alternativamente, con una pipeta de laboratorio que pueda
ajustarse a 5 µl.
Importante:
Cuando utilice una Micro Pipet del kit de tubos MICROSAFE®, no presione el bulbo mientras
recoja la sangre. El llenado se realiza automáticamente hasta la marca de 5 µl cuando la punta
de la pipeta se sumerge en la muestra de sangre. Si presiona el bulbo, cuando la punta de la
pipeta entre en contacto con la membrana de detección en la base del embudo de muestras del
casete, se transferirán 5 µl de sangre a dicha membrana. Para este propósito, siga las
instrucciones que se incluyen con las micropipetas.
Si los volúmenes de las muestras no son exactos, pueden obtenerse resultados incorrectos
que no podrán ser analizados.
A continuación, siguiendo el mismo procedimiento, pipetee cuatro (4) gotas del reactivo
Reagent utilizando el vial con gotero en el embudo marcado con la palabra «Reagent». Por
favor, asegúrese de que el reactivo quede totalmente absorbido por la membrana. Esta es la
única manera de garantizar que se combinará una cantidad suficiente de reactivo con las gotas
de sangre aplicadas y que fluirán juntos a través de la membrana para detectar posibles
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patógenos de la malaria. En la ventana de inspección del casete, que posee las marcas
laterales T1, T2 y C, puede observarse cómo fluye la mezcla a través de la membrana.
La marca C debe aparecer antes de que transcurran cinco (5) minutos y en la membrana debe
aparecer una banda de color rosa. Esto indica que la prueba se ha realizado correctamente y
ha dado un resultado. A medida que transcurre el tiempo, la membrana, que al principio era de
color blanco, se vuelve roja debido exclusivamente a la sangre.
El resultado final debe leerse al cabo de 30 minutos. Las bandas que aparecen más adelante
no influyen en la evaluación de la prueba.
Los patrones de bandas se evalúan y se interpretan de acuerdo con las instrucciones incluidas
en el kit.
10. Control de calidad; indicios de deterioro de los reactivos
La prueba solo debe evaluarse si el casete de la prueba no presenta daños antes de pipetear la
suspensión de la muestra y si no se observan cambios de color ni bandas en la membrana de
detección. Asimismo, después de un período de incubación de cinco (5) minutos, deben
observarse por lo menos las bandas de control de color rojo-violeta. Si no aparecen,
compruebe lo siguiente antes de repetir la prueba:
- El período de validez de los casetes de la prueba y de los reactivos utilizados.
- El procedimiento correcto de la prueba.
- La contaminación de los reactivos.
Si las bandas de control continúan sin ser visibles después de repetir la prueba con un casete
nuevo, póngase en contacto con el fabricante o con su distribuidor local de R-Biopharm.
11. Evaluación e interpretación
Deben aparecer tres bandas como máximo, observadas desde el campo de aplicación de la
sangre, con la secuencia siguiente: Una banda de reacción de color rosa en la línea de
detección T2 y otra en la línea de detección T1, así como la banda de control de color rosa en la
línea de control C.
Si la banda de control C no aparece, la prueba no puede evaluarse y debe considerarse
no válida.
Pueden darse las interpretaciones siguientes:
-
Positivo para la malaria: son visibles todas las tres bandas (T2, T1 y C) o solo una de
las dos bandas T, además de la banda C.
Negativo para la malaria: solo es visible la banda de control C.
No válida: no se observa ninguna banda o se observa un patrón distinto al descrito. Las
decoloraciones de bandas que aparecen después de 30 minutos no tienen valor
diagnóstico y no deben evaluarse. Puede consultar un esquema de todos los posibles
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patrones de las tres bandas específicas, T2, T1 y C, en las instrucciones incluidas en el
kit de la prueba.
12. Limitaciones del método
La prueba RIDA®QUICK Malaria es una prueba exclusivamente cualitativa para la detección de
antígenos solubles específicos de plasmodios en muestras de sangre. No puede establecerse
ninguna asociación entre la intensidad de las bandas específicas visibles y la aparición o la
gravedad de los síntomas clínicos.
Los resultados obtenidos deben interpretarse siempre en combinación con el cuadro y
los síntomas clínicos y otros parámetros de laboratorio.
Un resultado positivo no permite descartar la presencia de otros patógenos infecciosos o
causas.
Un resultado negativo no permite descartar una posible infección por patógenos de la malaria.
Puede deberse a una distribución de plasmodios en sangre demasiado baja en el momento de
la recogida de la sangre. Si hay razones anamnésicas importantes para sospechar la existencia
de malaria, al cabo de unas 12 horas debe realizarse una segunda prueba con una nueva
muestra de sangre fresca. El diagnóstico final debe siempre verificarse o confirmarse mediante
métodos de laboratorio adicionales, como el examen al microscopio del frotis de sangre.
13. Características de rendimiento
13.1. Sensibilidad y especificidad clínicas
En un estudio prospectivo realizado entre enero y diciembre de 2013, se examinaron en total
93 muestras de sangre en el Instituto Tropical y de Salud Pública Suizo (TPH Suizo) de Basilea
mediante la prueba rápida RIDA®QUICK Malaria y se compararon con el método de referencia
(microscopía de la película de sangre gruesa y del frotis de sangre). Las muestras procedían
de pacientes con sospecha de malaria que acudieron al TPH o fueron remitidos desde
hospitales, laboratorios y médicos de toda Suiza. Todas las muestras se analizaron en paralelo
mediante otra prueba rápida disponible en el mercado. Las dos pruebas rápidas detectaron la
proteína rica en histidina (HRP2) específica de P. falciparum y otra proteína diferente,
específica de todos los tipos de malaria, en una segunda banda para la detección de otras
especies de plasmodios. En la prueba rápida RIDA®QUICK Malaria, dicha proteína es la
lactato-deshidrogenasa específica de plasmodios, y en el NOW® Malaria se trata de una
aldolasa específica de plasmodios. Los resultados se resumen en la tabla 1. Los resultados de
ambas bandas se combinan en un resultado global. El examen al microscopio no permitió
determinar la especie en una de las 93 muestras originales. Esta muestra no se incluyó en la
evaluación.
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Tabla 1: Resultados de 93 muestras de sangre con sospecha de malaria en dos pruebas
rápidas para la malaria disponibles en el mercado con respecto a los métodos de
referencia del Instituto TPH Suizo de Basilea.
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Microscopía
de película/frotis de
sangre gruesa
NOW® Malaria
+
-
+
-
+
43
1*
40
4§
-
6#
43
5†
44
*
P. ovale, parasitemia < 0,1%.
§
P. falciparum (1x), P. ovale (1x) parasitemia < 0,1%, P. vivax (1x), P. malariae (1x).
#
5 x control del tratamiento de una muestra que previamente fue positiva según el examen al
microscopio; en una de las 6 muestras se ha confirmado el positivo mediante PCR.
†
4 x control del tratamiento de una muestra que previamente fue positiva según el examen al
microscopio; en una de las 5 muestras se ha confirmado el positivo mediante PCR.
Por tanto, se han obtenido las siguientes especificaciones analíticas para los dos
procedimientos de prueba rápida:
Sensibilidad:
97,7%
90,9%
Especificidad:
87,8%
89,8%
13.2. Sensibilidad analítica
El límite de detección de la prueba rápida RIDA®QUICK Malaria se determinó también en el
Instituto TPH Suizo mediante la dilución seriada de dos muestras de sangre positivas para P.
falciparum y una muestra de sangre positiva para P. vivax. La dilución en la que se observó
una banda tenue en la línea T1 o T2 se consideró el límite de detección. Los límites de
detección determinados de esta manera se establecieron solo para las dos especies de
plasmodio que se detectaron con mayor frecuencia. Los valores fueron los siguientes:
P. falciparum: 45 plasmodios/µl de sangre.
P. vivax: 100 plasmodios/µl de sangre.
13.3. Especificidad analítica
Para examinar la posibilidad de reacciones cruzadas con componentes potencialmente
perjudiciales (factor reumatoide [FR], anticuerpos antinucleares [ANA] y anticuerpos humanos
anti-ratón [HAMA]), así como con varios patógenos, se analizaron diferentes muestras positivas
para dichos componentes y patógenos mediante la RIDA®QUICK Malaria. Solo uno de los
patógenos sometidos a la prueba (VHC, VIH, VHB, virus del dengue, virus del chicunguña,
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(Schistosoma) presentó una débil reacción cruzada. Todas las muestras con ANA y HAMA, así
como las concentraciones de factor reumatoide de hasta 300 UI/ml, dieron un resultado
negativo. Con 400 UI/ml de FR, se produjo una tenue decoloración de la banda de detección
T2. La tabla 2 muestra una visión general de los resultados. En general, no es posible excluir
otras posibles reacciones cruzadas. Antes de iniciar un tratamiento antipalúdico específico, los
resultados positivos deben verificarse siempre mediante otro método estándar de laboratorio
(véase el apartado 12, «Limitaciones del método»).
Tabla 2: Resultados de las pruebas para especificidad analítica.
Patógenos / Factores perturbadores
Virus del chicunguña
Virus del dengue
Virus de la hepatitis B
Virus de la hepatitis C
Virus de la inmunodeficiencia humana
Schistosoma
Factor reumatoide
HAMA
ANA
Número de muestras
analizadas
10
10
11
21
14
3
6 (200-400 UI/ml)
2 (400-600 ng/ml)
5 (título de 160-1.280)
Resultados
Negativo
Negativo
Negativo
Negativo*
Negativo
Negativo
Negativo#
Negativo
Negativo
* 3 de las 21 muestras analizadas generaron señal en la banda de detección T2.
#
Con 400 UI/ml, el resultado en la banda de detección T2 fue un positivo débil.
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Anexo
Símbolos específicos del ensayo:
Cassette
Casete de ensayo
Reagent
Viales con reactivos de extracción
Micro Pipet
Tubos MICROSAFE® de 5 µl
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