LUXOL FAST BLUE Método recomendado para

LUXOL FAST BLUE Método recomendado para

Bio Optica Milano S.p.A. • via San Faustino 58 • I-20134 Milano
Tel. +39 02.21.27.13.1 • Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155
Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 • Fax Vendite +39 02.21.53.000
LUXOL FAST BLUE
Kluver y Barrera
Ref: 0200812
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Número mínimo de test realizables ................................... 100
Tiempo de ejecución ........................................................ 20 minutos + noche
Caducidad del producto .................................................... 2 años
Temperatura de almacenamiento ...................................... 15-25 ºC
Equipo complementario.................................................... no necesario
APLICACIÓN
Método recomendado para evidenciar la mielina y fosfolípidos en secciones histológicas.
PRINCIPIO
El Luxol Fast Blue es un marcador derivado del tetrabenzotetrazo-porfirina. Kluver ha demostrado que las
porfirinas tienen una selectiva afinidad hacia la mielina. La afinidad de Luxol Fast Blue hacia el sistema
nervioso central se atribuye habitualmente a las uniones que forma con las estructuras fosfolipídicas tales
como lecitina y esfingomielina.
REACTIVOS
A- Solución Luxol Fast Blue................................................. 30
B- Buffer de diferenciación básico........................................ 30
C- Solución Cresyl de violeta acuosa.................................... 30
D- Buffer de activación ácido .............................................. 30
ml
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ml
ml
MÉTODO
1- Desparafinar y llevar la muestra a alcohol 95º
2- Prepare el recipiente de incubación añadiendo algunas gotas de agua destilada en papel de filtro
en una placa Petri y colocar el porta. Poner 10 gotas del reactivo A, cerrar la cámara de incubación
y incubar a 56ºC durante toda la noche
3- Retirar el porta de la estufa y lavar con etanol 95º (Desaparecerán los residuos cristalinos del
reactivo A)
4- Lavar en agua destilada.
5- Colocar 10 gotas del reactivo B, dejar actuar durante 30 segundos
6- Diferenciar en etanol 70º hasta que las fibras de mielina se vean azules en un fondo mas claro
(algunas veces la diferenciación puede resultar difícil; repetir el paso 5 durante 30 segundos y
colocar el porta nuevamente en etanol 70º)
7- Lavar en agua destilada (dos veces al menos)
8- Prepare nuevamente la cámara de incubación e introducir el porta; colocar sobre el porta 10 gotas
de reactivo C y 5 gotas de reactivo D; cerrar la cámara e incubar durante 20 minutos a 56ºC en
estufa.
9- Diferenciar en etanol 95º hasta que la sustancia de Nissl se vea rosa pálido.
10- Deshidratar en etanol absoluto, limpiar en xileno y montar.
RESULTADOS
Mielina................................................................................................ azul turquesa
Partita IVA - VAT Number: IT06754140157
Tribunale di Milano REA n. 1118800 – c.c.i.a.a. di Milano
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Neuronas y núcleos de la Glia ........................................................... de rosa a violeta
Sustancia Nissl .........................................................................................rosa pálido
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