Diapositiva 1 - CIS

EL ENCÍN
Alcalá de Henares
DEPARTAMENTO DE INVESTIGACIÓN AGROAMBIENTAL
Mariano Toribio, Jesús Alegre, Cristina Celestino, Mª Mar Ruíz
DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA VEGETAL
FACULTAD DE FARMACIA
Isabel Arrillaga
PT5. ESTRATEGA: Clon. Producción vegetativa precomercial
(TRAGSA, Beatriz Cuenca)
Hito 6. Brinzales somáticos (IMIDRA, Universidad de Valencia)
Proyecto MICINN “Restauración y Gestión Forestal”,
subproyecto RESTAURA-BOSQUES DEL FUTURO ( PSE-310000-2009-4)
Hito 6. Brinzales somáticos (IMIDRA, Universidad de Valencia)
PT5. ESTRATEGA establecimiento de una estrategia de mejora y suministro de los
MFRs, y ejecución de acciones de transferencia que pongan en mercado los protocolos
de la investigación en materia de calidad genética. Se utiliza el Pinus pinaster como
especie modelo.
REGENERACIÓN DE PLANTAS DE Pinus pinaster
VÍA EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA
¾ Inducción de líneas embriogénicas en piñones inmaduros y maduros para
ampliar la ventana de respuesta
¾ Crioconservación de las líneas embriogénicas para evitar cambios genéticos y
pérdida de juvenilidad durante la evaluación del material clonal
¾ Producción masiva de plantas clónicas para su aplicación en estrategias de
silvicultura multivarietal
Proyecto MICINN “Restauración y Gestión Forestal”,
subproyecto RESTAURA-BOSQUES DEL FUTURO ( PSE-310000-2009-4)
Hito 6. Brinzales somáticos (IMIDRA, Universidad de Valencia)
Inducción: extrusiones entre 2-5 semanas
Medio mLV con (9 µM 2,4-D + 4.5 µM BAP) ó (1 µM CPPU)
20 g/l sacarosa, 4 g/l Gelrite, 25 ºC, oscuridad
Familias 5, 12, 23, 50
Proliferación: establecimiento de líneas procedentes de piñón inmaduro
entre 7-9 semanas
Medio mLV (9 µM 2,4-D + 4.5 µM BAP)
20 g/l sacarosa, 4 g/l Phytagel, 25 ºC, oscuridad
Establecimiento: Familia 5 (19 líneas), 12 (5 líneas), 23 (9 líneas), 50 (0)
Crioconservación: 5.1b; 5.5g; 12.1b; 12.3c; 23.1a; 23.2c;
23.2e; 23.5f
Recuperación: 8-12 semanas
Proyecto MICINN “Restauración y Gestión Forestal”,
subproyecto RESTAURA-BOSQUES DEL FUTURO ( PSE-310000-2009-4)
Hito 6. Brinzales somáticos (IMIDRA, Universidad de Valencia)
Evaluación de la capacidad de crecimiento
460
Dispersión: suspensión de la MES
en medio líquido
440
420
Masa
Disperso
400
380
360
Masa
Las tasas de crecimiento
de las líneas
embriogénicas difieren en
“Dispersión”
Incremento relativo en peso fresco
340
320
300
280
260
240
220
200
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
s2
s4
23.2e
s6
s2
s4
s6
5.1b
Subcultiv os y line a e m briogénica
Proyecto MICINN “Restauración y Gestión Forestal”,
subproyecto RESTAURA-BOSQUES DEL FUTURO ( PSE-310000-2009-4)
Hito 6. Brinzales somáticos (IMIDRA, Universidad de Valencia)
Evaluación de la producción de embriones somáticos
Medio de diferenciación-maduración
mLV (80 µM ABA) 60 g/l sacarosa, 10 g/l Gelrite, 25 ºC, oscuridad
Cultivo en dispersión con CA y
desecación parcial
Cultivo directo de masas
(23.2e) 4 meses: (M) 32 es/g pf
(D) no maduración
Cultivo directo de masas
pre-acondicionadas
(M) 15 es/g pf
(D) no maduración
Somatic embryoo production
(23.2e) 6 meses: (M) 47 es/g pf
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
dispersal
clump Mdispersal
clump Mclump
clump Pdispersal
clump Pclump
Maturation procedure
Proliferación en Masa o Dispersión
Proyecto MICINN “Restauración y Gestión Forestal”,
subproyecto RESTAURA-BOSQUES DEL FUTURO ( PSE-310000-2009-4)
Hito 6. Brinzales somáticos (IMIDRA, Universidad de Valencia)
Maduración de embriones somáticos de pino maritimo
12-16 semanas (gramo de PF)
(23.2e) 15-233 es
(5.1b) 0-61es
Germinación y desarrollo de las plántulas somáticas
Germinación entre 6-7 semanas:
de 85 embriones cotiledonares,
18 germinan (21%). Dificultades en
el desarrollo de la raíz
Transferencia hasta completar desarrollo entre 14-16 semanas
Protocolo de obtención de brinzales somáticos aclimatados
entre 10-13 meses
Proyecto MICINN “Restauración y Gestión Forestal”,
subproyecto RESTAURA-BOSQUES DEL FUTURO ( PSE-310000-2009-4)