Ficha tecnica

 INGENASA
Circovirus porcino tipo 2
Porcine Circovius. Type 2
INTRODUCCIÓN / INTRODUCTION
Los Circovirus porcinos son virus sin envuelta, que contienen un DNA circular
de cadena sencilla y que se han clasificado dentro de la familia Circoviridae.
El circovirus tipo 2 (PCV2) causa el síndrome del desmedre post destete
(PMWS)). Es una enfermedad que afecta a lechones de 5 a 8 semanas. La
enfermedad se caracteriza clínicamente por una perdida progresiva de peso,
disnea respiratoria e ictericia. Sin embargo, los mayores problemas ocurren
cuando aparece conjuntamente con otras enfermedades como la
parvovirosis porcina y/o el síndrome reproductivo y respiratorio porcino
causado por el virus del mismo nombre (PRRSV). Patológicamente existe un
amplio rango de lesiones inflamatorias que a menudo incluyen linfoadenitis,
neumonía intersticial, hepatitis, nefritis y pancreatitis y de las que existen
evidencias de que se encuentran asociada a la presencia del circovirus
porcino tipo 2.
Porcine Circovirus are non enveloped virus which contain a simple circular
DNA and that belong to the Circoviridae family.
The virus causes the Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome (PMWS)
which is a disease of growing pigs with low morbidity but high mortality rates.
It is characterized by progressive weight loss, respiratory signs and jaundice.
Clinical signs include microscopic lesions, granulomatous interstitial
pneumonia, lymphadenopathy, hepatitis and nephritis. The primary
causative agent of PMWS is a pathogenic strain of porcine Circovirus (PCV),
designated PCV2. Susceptible pigs that were inoculated with PCV2 developed
the typical lesions of PMWS but only a mild form of the clinical disease.
Therefore concomitant factors like coinfections with others virus, such as
porcine Parvovirus (PPV) and Porcine Reproductive and Respiratory
S yndrome virus (PRRSV) or stress may be needed for the development of
the syndrome.
APLICACIONES / APPLICATIONS
1.
2.
Detección PCV2 mediante las técnicas de Inmunohistoquímica (IHQ),
inmunoperoxidasa (IPMA) y Western Blot (WB).
Detection of PCV2 by Immunohistochemistry (IHC),
immunoperoxidase (IPMA) and Western Blot (WB) techniques.
Uso potencial en Inmunofluorescencia.
Potential use for immunofluorescence.
RESULTADOS / RESULTS
Tinción IHQ de ganglio / ganglia’s IHC stain.1
DESCRIPCIÓN / DESCRIPTION
El Hibridoma productor del anticuerpo monoclonal ha sido obtenido a partir
de linfocitos de bazo de ratón Balb/c fusionados con células del mieloma
X63/Ag8653. Purificado por cromatografía de afinidad, presenta una pureza
del 99%.
The hybridome which produces the monoclonal antibody has been obtained
by the fusion of lymphocytes from Balb/c mice’s spleen with myelome
X63/Ag8653 cells. The IgG has been purified by affinity chromatography,
showing a purity of 99%
Tinción IHQ de angina / Tonsil IHC stain.
Tinción IHQ de riñón / Kidney IHC stain. 1
1
-75
-60
-37
-25
WB / WB. 2
INGENASA
DESCRIPCIÓN DEL ENSAYO IHQ / IHC PROCEDURE1
Muestras fijadas en formol salino al 10% durante 20-24 horas y
procesadas para su inclusión en parafina. Cortes de 3 micras de
grosor transferidos a portaobjetos
tratados previamente con
Vectabond. Secado a 37ºC una noche. Muestras con o sin tratamiento
con proteasa. Anticuerpo Circovirus IHQ (Ver condiciones de uso
recomendadas para dilución. Atención, el sobrenadante se suministra
listo para usar) en suero de conejo al 1% en PBS. Incubación en
cámara húmeda a 4ºC durante 18 horas. Como segundo anticuerpo se
utiliza inmunoglobulina de conejo biotinilada específica de ratón. La
reacción se amplifica con estreptavidina- peroxidasa y se revela con el
cromógeno diaminobenzidina.
Samples are fixed in 10% saline formalin for 20-24 hours and
processed to be included in paraffin (3μm) and then dried at 37ºC over
night. Samples are analyzed with or without treatment with protease.
IHQ Circovirus Antibody (See recommended use conditions for the
dilution. Note that thesupernatant is supplied ready to use) in rabbit
serum at 1% in PBS. Samples are incubated in wet chamber at 4ºC for
18 hours. As a second antibody a biotinilated rabbit antimouse
inmunoglobulin is used. The reaction is amplified with streptavidineperoxidase and diaminobenzidine is used as a chromogen.
DESCRIPCIÓN DEL ENSAYO WB / WB PROCEDURE2
- Incubate with Purified IgG (36A9) 20 ug/ml in PBS-Tween20-0.05%dry milk 1%.during 2hous at 37ºC.
- 5 washing steps of 5 min with PBS-Tween20-0.05.%
- Incubate with anti-mouse Alkaline Phosphatase (See recommended
use conditions for dilution) in PBS-Tween20-0.05-dry milk 1%.during
1hous at room temperature
- 5 washing steps of 5 min with PBS-Tween20-0.05.
- Colour developed with NBT/BCIP
- Incubación con IgG purificada delAcM 36A9 20μg/ml en PBS-Tween20
0,05 leche en polvo 1% durante 2 horas a 37ºC.
- 5 pasos de lavado de 5 min con PBS-Tween20 0,05%.
- Incubación con anticuerpo secundario anti ratón Fosfatasa Alcalina (Ver
condiciones de uso recomendadas para dilución) en PBS-Tween20 0,05%leche en polvo 1% durante 1 hora a temperatura ambiente.
- 5 pasos de lavado de 5 min con PBS-Tween20 0,05%.
- Desarrollo de color con NBT/BCIP
CARACTERÍSTICAS / CHARACTERISTICS
AcM / mAb
Isotipo / Isotype
Especificidad / Specificity
IgG2 a
VP2 PCV2
36A9
PRESENTACIÓN / FORMAT
Disponible en dos presentaciones / Two formats available:
PRESENTACIÓN /
FORMAT
Sobrenadante /
Supernatant
Ig purificada /
Purified Ig
CANTIDAD /
QUANTITY
CONCENTRACIÓN / CONCENTRATION
(aproximada) / (aproximated)
5 ml
10-20 μg / ml
1ml
REFERENCIA/
REFERENCE
1mg/ml
M.11.PCV.B36A9
M.11.PCV.I36A9
CONSERVACIÓN / STORAGE
-20ºC
REFERENCIAS / REFERENCES
1 Dra. Marisa Andrada, Dra. Eva Sierra Unidad de Anatomía Patológica Veterinaria. Instituto Universitario de Sanidad Animal. Universidad Las
Palmas Gran Canaria, Spain
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